常 青

（濮陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南濮陽 457000）

家禽胚胎發(fā)育是一個(gè)外部過程，雞胚發(fā)育依賴于雞蛋內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)，這些營養(yǎng)物質(zhì)在21 d孵化期為胚胎提供代謝所需的能量和其他營養(yǎng)素（王鳳華等，2007）。氧氣是唯一一種不從雞蛋中提取的營養(yǎng)物質(zhì)，因此，雞蛋的營養(yǎng)成分決定雞胚孵化的成敗。在胚胎生長的第一周，葡萄糖是主要的能量來源，而大部分碳水化合物如葡萄糖在孵化的第一周被利用。蛋黃中的脂肪酸是孵化后期的主要能量來源，卵黃營養(yǎng)物質(zhì)大量動(dòng)員進(jìn)入胚胎，并在孵化過程中得到利用（李金峰，2014）。胚胎利用卵黃營養(yǎng)物質(zhì)的能力受有氧代謝的限制，直到雞胚開始肺呼吸（Moran，2007）。因此，胚胎逐漸降低脂肪代謝，增加糖原代謝，胚胎肝臟和肌肉中儲(chǔ)存的糖原是孵化過程中的主要能量來源。但在孵化的這一階段，為了滿足孵化過程的高能量需求，糖原被大量利用，因此，在孵化結(jié)束時(shí)，胚胎中的糖原儲(chǔ)備顯著減少。雞胚在孵化過程中對(duì)能量缺乏非常敏感，可能導(dǎo)致孵化能力較弱，在更嚴(yán)重的情況下可能導(dǎo)致胚胎死亡。因此，能源供應(yīng)是小雞能否正常出殼的一個(gè)限制因素。提高胚胎中的糖原儲(chǔ)備是孵化過程對(duì)能量需求的關(guān)鍵。影響胚胎從有氧代謝向厭氧代謝轉(zhuǎn)變和糖原儲(chǔ)備平衡的因素包括孵化后期的溫度，孵育期結(jié)束時(shí)溫度的升高會(huì)導(dǎo)致出殼雞只質(zhì)量差，蛋黃殘留量大，胚胎中蛋白質(zhì)沉積量低，糖原利用率高，孵化發(fā)育和孵育期縮短（Lourens等，2007）。此外，卵黃囊膜對(duì)孵化過程中脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的吸收有影響，如溫度升高或氧氣水平降低時(shí)會(huì)導(dǎo)致胚胎死亡率提高（Powell等，2004）。因此，本研究探討了在體外注射碳酸化合物對(duì)雞胚孵化溫度升高的改善作用，同時(shí)評(píng)估其對(duì)雞胚孵化后期孵化特性和糖原狀態(tài)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 本研究開展了兩個(gè)試驗(yàn)，試驗(yàn)1選擇了來自29周齡肉種雞的800枚種蛋，雞蛋被編號(hào)后分別稱重，按照均重一致原則進(jìn)行分組。雞蛋放置于孵化箱中，孵化溫度為37.5℃，相對(duì)濕度55%，每隔2 h翻蛋一次，孵化16 d時(shí)照蛋檢查，移除未受精的雞胚和死亡胚胎。檢查后，將其中的672個(gè)雞蛋平均分配到56個(gè)重復(fù)中，每個(gè)重復(fù)含12個(gè)相同重量的雞蛋。在孵育溫度為37.5℃（對(duì)照組）和38.5℃（高溫），將各重復(fù)隨機(jī)分為2組，每組28個(gè)重復(fù)。孵化結(jié)束后，對(duì)照組留在上述培養(yǎng)箱中，高溫組放置在另一個(gè)相同的培養(yǎng)箱中。恒溫箱的相對(duì)濕度設(shè)置為55%。孵化至17.5 d對(duì)雞胚體外注射碳水化合物，對(duì)照組分為正對(duì)照組（不注射）、負(fù)對(duì)照組（注射生理鹽水），處理組分別對(duì)雞胚注射 50、100、150、200和 250 mg碳水化合物（購自Sigma-Aldrich公司）。

1.2 樣品收集與測定 孵化第19天清晨，將雞胚轉(zhuǎn)移到孵化盤的不同部位，以便在孵化時(shí)鑒定雛雞。孵化托盤被分成單獨(dú)的孵化網(wǎng)格，兩個(gè)孵育箱的孵化溫度分別設(shè)置在37℃和38℃，分別作為對(duì)照組和高溫組，相對(duì)濕度65%，孵育至21 d結(jié)束。此時(shí)，統(tǒng)計(jì)未孵化的蛋與活的或死的小雞以及死亡的胚胎。每12 h記錄一次孵化時(shí)間，孵化444～504 h間隔12 h觀察雛雞，孵化重量記錄至最近0.1 g。在孵化結(jié)束時(shí)，從每個(gè)實(shí)驗(yàn)處理中隨機(jī)選擇6只雛雞，測定雛雞體重，取其肝臟和胸肌進(jìn)行稱重。肝臟和胸肌樣品采集后立即冷凍于液氮中，-80℃保存，進(jìn)行糖原測定。取肝臟和胸肌樣品0.25 g加入8%高氯酸1 mL，在冰中勻漿 1 min，4℃下 14000 g離心 30 min，取上清，加入石油醚1 mL，混合后去除石油醚餾分，將底層樣品轉(zhuǎn)移到新的管中測定糖原。糖原的測定采用碘-碘化鉀法，在460 nm分光光度計(jì)比色法。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間均值的差異采用Ducan’s法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示組間均值存在顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 種蛋孵化率 胚胎注射碳水化合物和高溫對(duì)種蛋孵化的影響結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，胚胎注射 50、100、150、200和 250 mg碳水化合物和對(duì)照組對(duì)胚胎孵化率、胚胎后期死亡率、活胚胎移植率和死胚胎移植率的影響均無顯著差異（P＞0.05）。胚胎注射200和250 mg碳水化合物較50 mg碳水化合物組顯著降低了胚胎的孵化時(shí)間（P＜0.05）。正對(duì)照、負(fù)對(duì)照組和其他組對(duì)胚胎的孵化指標(biāo)均無顯著影響（P＞0.05）。孵化溫度和兩個(gè)試驗(yàn)處理對(duì)各指標(biāo)無顯著影響（P＞0.05）。

表1 胚胎注射碳水化合物對(duì)高溫下?雞蛋孵化率的影響

2.2 種蛋孵化和仔雞出殼重量 胚胎注射碳水化合物對(duì)高溫下雞蛋孵化重量和出殼小雞重量的影響見表2。對(duì)照組與各處理組以及孵化溫度、兩個(gè)試驗(yàn)處理對(duì)孵化蛋重?zé)o顯著影響（P＞0.05）。胚胎注射 50、100、150、200和 250 mg碳水化合物較正對(duì)照組顯著提高了出殼雞只重量及相對(duì)重量（P＜0.05），各處理組較對(duì)照組顯著提高了出殼雞只相對(duì)重量（P＜0.05）。除了100 mg碳水化合物組外，其他處理組較兩對(duì)照組均顯著提高了出殼雞只重量（P＜0.05），而各處理組之間對(duì)出殼雞只重量和相對(duì)重量均無顯著影響（P ＞ 0.05）。

2.3 出殼仔雞肝臟重量和肝糖原含量 胚胎注射碳水化合物對(duì)雞蛋高溫下孵化后出殼仔雞肝臟重量和肝糖原含量的影響見表3。胚胎孵化溫度和兩個(gè)試驗(yàn)對(duì)出殼雞只肝臟相對(duì)重量和肝糖原含量均無顯著影響（P＞0.05）。正對(duì)照組、50、150、200和250 mg碳水化合物組較負(fù)對(duì)照組顯著提高了出殼雞只重量（P＜0.05），而正對(duì)照組和碳水化合物處理組較負(fù)對(duì)照組顯著降低了肝臟相對(duì)重量（P＜0.05）。胚胎注射250 mg碳水化合物組肝糖原含量最高（P＜0.05），而正對(duì)照、負(fù)對(duì)照和50 mg碳水化合物組肝糖原含量最低（P＜ 0.05）。

表2 胚胎注射碳水化合物對(duì)高溫下雞蛋孵化重量和出殼小雞重量的影響

表3 胚胎注射碳水化合物對(duì)雞蛋高溫下孵化后出殼仔雞肝臟重量和肝糖原含量的影響

2.4 出殼仔雞胸肌重量和肌糖原含量 胚胎注射碳水化合物對(duì)雞蛋高溫下孵化后出殼仔雞胸肌重量和肌糖原含量的影響見表4。胚胎注射100、150、200和 250 mg碳水化合物較 50 mg碳水化合物和對(duì)照組顯著提高了胸肌相對(duì)重量（P＜0.05），而各組對(duì)肌糖原含量的影響均無顯著差異（P＞ 0.05）。同時(shí)，胚胎注射 150、200和250 mg碳水化合物較對(duì)照組、50和100 mg碳水化合物組顯著提高了出殼雞只的糖原指數(shù)（P＜0.05）。雞胚孵化溫度和兩個(gè)試驗(yàn)對(duì)胸肌相對(duì)重量、肌糖原含量及糖原指數(shù)均無顯著影響（P＞0.05）。

表4 胚胎注射碳水化合物對(duì)雞蛋高溫下孵化后出殼仔雞胸肌重量和肌糖原含量的影響

3 討論

本研究結(jié)果表明，雞胚注射碳水化合物提高了幼雛孵化重與蛋重的比例，但對(duì)幼雛孵化性狀無明顯影響。Smirnov等（2006）結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雞胚腸道腔內(nèi)注射碳水化合物可以改善腸道形態(tài)，提高營養(yǎng)吸收。Zhai等（2011）發(fā)現(xiàn)，雞胚注射0.25 g/mL葡萄糖、果糖、蔗糖等復(fù)合物對(duì)孵化率無顯著影響，但雛雞重量與注入體積呈正相關(guān)。上述結(jié)果表明，雞胚注射碳水化合物對(duì)胚胎代謝有一定影響。但影響雞胚孵化性能的因素有很多，如碳水化合物類型、雞只品種、雞胚大小和種雞的生長階段。

雛雞糖原狀況分析結(jié)果表明，雞胚注射碳水化合物增加了雛雞肝糖原濃度，但對(duì)肌糖原無顯著影響，這與Uni等（2005）的研究結(jié)果一致。此外，肝糖原濃度高于肌糖原說明肝糖原對(duì)胚胎的營養(yǎng)狀況比肌糖原更敏感，這可能與調(diào)節(jié)肌糖原的機(jī)制不受營養(yǎng)狀況的影響有關(guān)（Uni等，2005）。

兩個(gè)試驗(yàn)結(jié)果表明，周齡較大的母雞（35周齡）產(chǎn)蛋和孵出的小雞更重，孵出小雞的肝糖原濃度和糖原指數(shù)較年輕母雞低。此外，孵化性狀不受母雞年齡的影響，這些結(jié)果與Oloyo（2003）的研究結(jié)果一致。蛋的大小與雛雞孵化體重呈正相關(guān)，大種蛋孵出的小雞體重較高，是因?yàn)榕c小雞蛋孵出的小雞相比，大雞蛋孵出的小雞營養(yǎng)供應(yīng)過剩，孵化時(shí)剩余的卵黃囊大（Lourens等，2006）。不同周齡母雞孵出的小雞糖原水平的差異可能表明其代謝率的差異，因?yàn)槔夏鸽u的胚胎比年輕母雞的胚胎產(chǎn)生更多的代謝熱和二氧化碳?xì)?，這也表明糖原需求存在差異。較年長母雞孵出的小雞糖原水平較低，表明胚胎代謝率較高，因此，與較年輕母雞相比，對(duì)糖原的需求較高（O’Dea等，2004）。

4 結(jié)論

提高雞胚孵化后期（16～21 d）的孵化溫度和種雞日齡會(huì)對(duì)出殼小雞的體重和糖原狀態(tài)產(chǎn)生負(fù)面影響，但不影響孵出小雞的孵化特性。雞胚注射100 mg碳水化合物會(huì)緩解雞胚高溫孵化對(duì)仔雞生長的抑制，使糖原狀態(tài)得以恢復(fù)。