于曉芳

（盤(pán)錦檢驗(yàn)檢測(cè)中心 遼寧盤(pán)錦 124010）

1 前言

水與人們的生活息息相關(guān)，不管是日常生活還是企業(yè)生產(chǎn)活動(dòng)，均離不開(kāi)水的支持。定期對(duì)飲用水進(jìn)行檢驗(yàn)，有利于確保飲用水的安全，減少相關(guān)疾病發(fā)生率。 潘鋒等[1]指出武漢市2015—2017 年城市生活飲用水水質(zhì)合格率為97.3%，水質(zhì)不合格的原因主要是菌落總數(shù)與游離余氯超標(biāo)。 為驗(yàn)證不同水質(zhì)檢測(cè)方法在生活飲水微生物檢驗(yàn)方面的應(yīng)用效果，便于日后科學(xué)選擇水質(zhì)檢測(cè)方法，本文對(duì)不同水質(zhì)檢測(cè)方法及檢查結(jié)果進(jìn)行分析。

2 資料與方法

2.1 一般資料

研究時(shí)間在2018 年1—12 月，研究對(duì)象為不同時(shí)間不同地點(diǎn)獲取的500 份飲用水水樣，其中250份應(yīng)用多管發(fā)酵法檢測(cè)（A 組），250 份水樣采用濾膜法檢測(cè)（B 組），A 組與B 組水樣中均包括出廠水樣100 份、管網(wǎng)末梢水樣100 份、二次供水水樣50 份。A 組、B 組在水樣數(shù)量、 水樣來(lái)源等方面滿足可比性要求，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 方法

不同水樣均以微生物中的大腸桿菌檢驗(yàn)為主，具體檢驗(yàn)方法如下：

A 組：采取多管發(fā)酵法，不同水樣樣本量為10mL，然后將其加入雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，在10mL 單料乳糖蛋白胨中加入上述1mL 樣本，量取1mL 樣本，將其加入到9 mL 無(wú)菌生理鹽水中，再在10 mL 單料乳糖蛋白胨的培養(yǎng)液中加入1 mL 樣本，不同稀釋度均需設(shè)置5 管；每日檢測(cè)處理后的自來(lái)水，接種雙料培養(yǎng)基，共5 份，每份接種10 mL，并將受污染水源確定為檢測(cè)水源。接種期間：培養(yǎng)箱溫度設(shè)置：35～37℃，培養(yǎng)時(shí)間：22～26 h；培養(yǎng)完成后，陰性標(biāo)準(zhǔn)：乳糖蛋白胨培養(yǎng)管沒(méi)有產(chǎn)酸與產(chǎn)氣；陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：培養(yǎng)管出現(xiàn)產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，此時(shí)需在伊紅美藍(lán)瓊脂板上接種發(fā)酵管中的菌落，培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。 溫度：35～37℃，培養(yǎng)時(shí)間：18～24 h，觀察培養(yǎng)基中的菌落變化，選取菌落，并進(jìn)行革蘭氏染色，通過(guò)顯微鏡進(jìn)行菌落觀察與分析[2]。

B 組：采用濾膜法，使用0.45 μm 的微孔濾膜對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾，整個(gè)檢驗(yàn)過(guò)程如下：采用一次性無(wú)菌濾膜（47 mm×0.45 μm×600）完成水質(zhì)監(jiān)測(cè)，有多種孔徑可滿足不同微生物檢測(cè)要求。 本文選擇的濾膜孔徑為0.45 μm，所有膜片均為無(wú)菌獨(dú)立包裝，表面有網(wǎng)格，便于菌落計(jì)數(shù)。 使用前應(yīng)詳細(xì)閱讀使用說(shuō)明書(shū)，并使用無(wú)菌鑷子夾取無(wú)菌濾膜，將其置于滅菌濾床上，放置位置合適后，固定過(guò)濾器，于過(guò)濾器中倒入100mL 水樣，打開(kāi)過(guò)濾器閘門(mén)，抽濾條件為-0.05Pa。水樣過(guò)濾后進(jìn)行培養(yǎng)，取出的樣品需要抽氣，時(shí)間為5 s，抽氣過(guò)程中需要關(guān)閉閘門(mén)，并取出過(guò)濾器，整個(gè)操作需要使用無(wú)菌鑷子完成，避免直接用水接觸，然后將濾膜放置到品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基中。 放置過(guò)程中濾膜需要放在細(xì)菌面， 便于其與培養(yǎng)基有效接觸，養(yǎng)殖期間避免殘留氣泡，放置完成后將濾膜倒入平皿并倒置，培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)時(shí)間為22～26 h[3]。

整個(gè)微生物檢驗(yàn)過(guò)程可詳細(xì)參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5750—2006 《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)辦法》[4]；微生物檢驗(yàn)結(jié)果可參照GB/T 5749—2006 《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》[5]。

2.3 觀察指標(biāo)

觀察不同方法對(duì)應(yīng)的水樣檢驗(yàn)合格率。

2.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

生活飲用水中每mL 水細(xì)菌總數(shù)不超過(guò)100 個(gè)則為符合飲用水要求。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

借助統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS21.0 處理檢驗(yàn)結(jié)果，檢驗(yàn)結(jié)果為計(jì)數(shù)資料，用（n，%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即P＜0.05。

3 結(jié)果

不同水樣檢測(cè)合格率方面，A 組微生物檢驗(yàn)方法明顯高于B 組（表1），數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。

4 討論

飲用水的色度、渾濁度、菌落總數(shù)、總大腸桿菌群、耐熱大腸菌群等方面要處于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的范圍才能夠滿足日常飲用。 通過(guò)對(duì)飲用水微生物檢驗(yàn)方法的研究，便于明確不同檢驗(yàn)特點(diǎn)，進(jìn)而更好地控制飲用水質(zhì)量，保證飲水安全。

表1 不同微生物檢驗(yàn)方法對(duì)應(yīng)水質(zhì)檢測(cè)合格情況

多管發(fā)酵法是常用的飲用水檢驗(yàn)方法， 該方法是在檢驗(yàn)過(guò)程中依據(jù)稀釋培養(yǎng)測(cè)數(shù)法對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行多重稀釋?zhuān)钡较♂屢航臃N到無(wú)或者極少細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)皿中。按照沒(méi)有生長(zhǎng)的最低稀釋度、最高稀釋度，依據(jù)“最大或然數(shù)”理論，得到樣品單位體積中的細(xì)菌數(shù)。最初稀釋期間的檢測(cè)結(jié)果較大，但是隨著反復(fù)稀釋?zhuān)罱K結(jié)果趨近于真實(shí)值。實(shí)際應(yīng)用期間需要根據(jù)具體情況合理確定檢驗(yàn)要求數(shù)目。本研究通過(guò)采取多管發(fā)酵法，可使應(yīng)用水合格率達(dá)到98.00%。

在飲用水檢測(cè)期間， 濾膜法通過(guò)濾膜過(guò)濾器對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾，獲取一定的細(xì)菌微生物，通過(guò)將濾膜在培養(yǎng)基上培養(yǎng)，膜上可逐漸生長(zhǎng)出大腸菌群，便于直接進(jìn)行計(jì)數(shù)。濾膜法在應(yīng)用過(guò)程中具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn)， 該方法在雜質(zhì)較少的水樣檢測(cè)中應(yīng)用較多，整個(gè)操作過(guò)程對(duì)無(wú)菌要求較為嚴(yán)格，很容易因?yàn)橥饨绛h(huán)境因素影響檢測(cè)結(jié)果。

5 結(jié)語(yǔ)

根據(jù)研究結(jié)果，多管發(fā)酵法的檢驗(yàn)合格率（98.00%）高于濾膜法（80.80%）。雖然上述兩種方法都能夠用于生活飲用水的微生物檢驗(yàn)，但多管發(fā)酵法檢驗(yàn)的合格率更高，因而在生活飲用水微生物檢驗(yàn)方面更具有價(jià)值。