文/徐東峰 王清波 孔清清

苯氧羧酸類農(nóng)藥是應(yīng)用非常廣泛的除草劑，其在農(nóng)產(chǎn)品中的殘留一旦進(jìn)入人體會(huì)對(duì)人的身體健康造成危害，各國(guó)都對(duì)其殘留量制定了嚴(yán)格的限量[1]。目前對(duì)苯氧羧酸類殘留的檢測(cè)方法有GC-MS法、LC-MS法等，相對(duì)于其他方法，HPLC法對(duì)儀器要求較低且不需要繁瑣的衍生化過程[2]。本試驗(yàn)采用HPLC作為分析儀器，考察了不同提取試劑及不同的提取條件對(duì)棉花中苯氧羧酸殘留提取效果的影響。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器

Agilent高效液相色譜儀，R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，KQ-500KDE超聲清洗器。

1.2 藥品及試劑

2-甲-4-氯乙酸，2-甲-4-氯丙酸，2，4-D丙酸標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自美國(guó)Accustandard公司；乙腈為色譜純，磷酸二氫鈉、丙酮、二氯甲烷均為分析純，水為經(jīng)過Millipore系統(tǒng)處理的去離子水。

1.3 色譜條件

色譜柱：安捷倫 Eclipse X D B-C 1 8色譜柱（4.6×150mm）；流動(dòng)相A：乙腈，流動(dòng)相B：7.3g磷酸二氫鈉溶于1000mL去離子水中，用磷酸將pH調(diào)到4；梯度洗脫：開始用10%的乙腈與90%的磷酸二氫鈉緩沖鹽溶液，然后在30min內(nèi)線性轉(zhuǎn)變?yōu)?0%乙腈與10%的磷酸二氫鈉緩沖鹽溶液；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；進(jìn)樣量：20 μL。

1.4 試驗(yàn)方法

取2g棉花樣品，置于200mL錐形瓶中，分別加入50mL丙酮、10mL水、0.1mL甲酸，混合均勻后用超聲波提取器提取20分鐘，收集提取溶液于旋蒸瓶中。將剩余的樣品用同樣的方法繼續(xù)提取5分鐘，將提取溶液收集到旋蒸瓶中。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)掉溶液中的有機(jī)部分，將剩余的溶液倒入150mL分液漏斗中，加入10mL飽和氯化鈉溶液，分兩次用30mL二氯甲烷萃取兩次，將二氯甲烷溶液收集到旋蒸瓶?jī)?nèi)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)至近干，再用氮?dú)獯蹈珊?，加?mL甲醇溶解，并用高效液相色譜儀分析。

2 討論

2.1 提取用酸的選擇

由于苯氧羧酸類農(nóng)藥屬于酸性成分，在提取溶液中添加一定的酸可以保證其結(jié)構(gòu)，抑制其解離。取3份棉花空白樣品，分別置于3個(gè)200mL錐形瓶中，在其中分別滴加濃度為600mg/L的2-甲-4-氯丙酸標(biāo)注品溶液，300mg/L的2-甲-4-氯乙酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，200mg/L的2，4-D丙酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液各1mL。各加入50mL丙酮、10mL水之后分別加入甲酸、硫酸、鹽酸各0.1mL，按照1.4的方法進(jìn)行處理，用HPLC進(jìn)行分析，比較3種酸對(duì)提取效果的影響（見圖1）。

由試驗(yàn)結(jié)果可知，3種酸對(duì)苯氧羧酸類除草劑的提取效果影響差別不大，其中添加甲酸后提取效果較為均衡，因此選擇甲酸作為提取過程中的酸化試劑。

2.2 提取試劑的選擇

對(duì)2.1中的3份加標(biāo)棉花樣品，分別使用添加了0.1mL甲酸的50mL無水乙醚、50mL丙酮、50mL乙腈與10mL超純水混合進(jìn)行提取，按照1.4的提取及萃取方法進(jìn)行處理，將處理后的樣品溶液用高效液相色譜儀分析，得到不同試劑的提取效果（見圖2），通過對(duì)比，相對(duì)于其他兩種提取溶劑丙酮的綜合提取效果更好。

2.3 甲酸添加量的考察

本試驗(yàn)考察了不同甲酸添加量對(duì)提取效果的影響，對(duì)2.1中的3份加標(biāo)棉花樣品，使用丙酮與水混合提取，在提取溶劑中分別加入0μL、50μL、100μL甲酸，按照1.4的方法進(jìn)行提取與萃取，將處理后的樣品溶液用高效液相色譜儀分析后比較提取效果。通過比較確定添加100 μL甲酸后的提取溶劑提取效果最好。

3 方法學(xué)研究

3.1 精密度與回收率

在3份空白棉花樣品中分別加入濃度為0.6ppm、6ppm、30ppm的2-甲-4-氯乙酸、2-甲-4-氯丙酸、2,4-D丙酸混標(biāo)2mL，按照1.4的方法進(jìn)行處理后，用高效液相色譜儀分析，重復(fù)3次，考察精密度。

另外取濃度為0.6ppm、6ppm、30ppm的2-甲-4-氯乙酸、2-甲-4-氯丙酸、2,4-D丙酸單標(biāo)用HPLC進(jìn)行分析，將得到的峰面積與不同添加量的3份樣品的平均峰面積進(jìn)行對(duì)比得到方法回收率。

由試驗(yàn)結(jié)果可知低添加量樣品的精密度及回收率較中、高添加量的樣品相差較大（見表1～表3），可見本方 法對(duì)中、高殘留量樣品檢測(cè)效果更好。

表1 2-甲-4-氯乙酸精密度與回收率

表2 2-甲-4-氯丙酸精密度與回收率

表3 2,4-D丙酸精密度與回收率

3.2 線性范圍

表4 3種物質(zhì)方法曲線

分別取濃度為0.6μg/mL、3μg/mL、6μg/mL、18μg/mL、30μg/mL的2-甲-4-氯乙酸、2-甲-4-氯丙酸、2,4-D丙酸混標(biāo)2mL加入5份2g空白樣品中，按照1.4的方法進(jìn)行處理后，用高效液相色譜儀分析，得到3種物質(zhì)的工作曲線（見表4），由試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以得出3種物質(zhì)在0.3μg/g～15μg/g濃度范圍內(nèi)線性良好。

4 總結(jié)

本試驗(yàn)研究了不同的提取條件對(duì)棉花中苯氧羧酸類農(nóng)藥殘留提取效果的影響，確定了HPLC法分析該物質(zhì)在本試驗(yàn)范圍內(nèi)最佳的提取方法。該方法操作簡(jiǎn)便，對(duì)儀器要求低，且通過方法學(xué)研究證明該方法具有良好的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，尤其是對(duì)于中、高殘留量的樣品。