黃江麗 張志紅 王東升

摘要：為研究開發(fā)反芻家畜降甲烷、促生長調(diào)節(jié)劑，采用體外產(chǎn)氣法初步研究不同植物提取物、本試驗(yàn)構(gòu)建的1株工程菌（1株表達(dá)α-淀粉酵母酶的酵母菌）及其不同組合對(duì)湖羊瘤胃發(fā)酵過程的影響。體外發(fā)酵試驗(yàn)表明，博落回提取物既有良好的降甲烷效果，又基本不影響微生物蛋白（membrane cofactor protein，簡(jiǎn)稱MCP）產(chǎn)生：發(fā)酵12、24 h，對(duì)照組的甲烷產(chǎn)量分別為7.62%、11.74%，而博落回處理組分別為4.92%、6.14%;發(fā)酵36 h的微生物蛋白含量對(duì)照組為410 mg/L，而博落回處理組為408 mg/L;添加一定水平的工程菌在基本不影響MCP產(chǎn)生的前提下具有一定的降甲烷效果（降低甲烷產(chǎn)量12.9%）;博落回提取物與大蒜油和工程菌組合處理組與對(duì)照組相比，能抑制35.4%的甲烷產(chǎn)生，而其微生物蛋白產(chǎn)量還略高于正對(duì)照組，博落回提取物與肉桂油和工程菌組合處理組與對(duì)照組相比，抑制20.2%的甲烷產(chǎn)生，微生物蛋白產(chǎn)量則基本與對(duì)照持平。進(jìn)一步的動(dòng)物試驗(yàn)表明，博落回提取物與大蒜油按一定比例組合加以一定量的活化工程菌，能降低甲烷生成促進(jìn)湖羊生長。

關(guān)鍵詞：湖羊;植物提取物;降甲烷;微生態(tài)生長促進(jìn)劑

中圖分類號(hào)： S826.5;S816.7 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A ?文章編號(hào)：1002-1302（2019）14-0189-04

反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)產(chǎn)生的甲烷是有機(jī)物發(fā)酵的必然產(chǎn)物。據(jù)報(bào)道，反芻動(dòng)物產(chǎn)生的甲烷會(huì)造成2%～12%能量的損失[1]。同時(shí)，牛、羊等反芻家畜是超強(qiáng)溫室氣體——甲烷的主要排放源，全球數(shù)十億頭反芻家畜每年排出的甲烷達(dá)數(shù)億噸，導(dǎo)致溫室效應(yīng)不斷加劇。目前我國牛、羊等反芻家畜的年存欄數(shù)已達(dá)3億頭，隨著牛、羊制品需求量的不斷上升，這一數(shù)字還在不斷刷新，而與此同時(shí)我國肩負(fù)的溫室氣體減排任務(wù)卻十分艱巨。如何在滿足日益增加的牛、羊制品需求的同時(shí)，逐步減少溫室氣體排放是各國經(jīng)濟(jì)、社會(huì)發(fā)展過程中遇到的重大挑戰(zhàn)，具有“降甲烷”和“促生長”雙重功效的微生態(tài)制劑為應(yīng)對(duì)這一挑戰(zhàn)提供了切實(shí)可行的途徑。目前，抗生素離子載體等已經(jīng)成功地用于降低瘤胃中能量和蛋白質(zhì)的損失。由于抗生素在乳、肉中殘留及其對(duì)人類健康影響的風(fēng)險(xiǎn)，公眾越來越重視抗生素等促生長劑在畜禽生產(chǎn)中的使用情況[2]。因此，開發(fā)天然的瘤胃調(diào)控劑對(duì)提高反芻動(dòng)物生產(chǎn)性能和保護(hù)環(huán)境均有重大意義。

植物提取物具有天然無耐藥性、毒副作用小等優(yōu)勢(shì)，近年來被廣泛應(yīng)用于反芻動(dòng)物瘤胃調(diào)控研究中。本試驗(yàn)采用體外產(chǎn)氣法初步研究不同植物提取物、本試驗(yàn)構(gòu)建的一株工程菌（1株表達(dá)α-淀粉酵母酶的酵母菌）及其不同組合對(duì)湖羊瘤胃發(fā)酵過程的影響，再結(jié)合動(dòng)物試驗(yàn)，篩選出1組降甲烷效果良好、有一定促生長作用的微生態(tài)生長促進(jìn)劑，可為各種反芻家畜降甲烷微生態(tài)生長促進(jìn)劑的研究提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 體外發(fā)酵試驗(yàn)

1.1.1 試驗(yàn)材料 用于本研究的肉桂油、大蒜油、薄菏油、丁香油均購自江西省吉安盛大香料油有限公司，肉桂油的主要成分為肉桂醛和苯乙醛，含量分別為85.61%、7.36%;大蒜油的主要成分為丙級(jí)二硫化丙烯，含量為59.86%;薄菏油主要成分為L-薄荷醇，含量為51.58%;丁香油的主要成分為丁香酚，含量為85.13%。博落回提取物（博落回總堿含量≥60%、血根堿含量≥40%）由中科院亞熱帶研究所提供，莫能菌素（有效成分含量為40%）購自江西南昌獸醫(yī)防疫站。供試工程菌（1株表達(dá) α- 淀粉酵母酶的酵母菌，菌種保藏號(hào)為CCTCCM 2014390）為筆者所在研究室重組構(gòu)建所得。工程菌的活化：用接種環(huán)挑取一定量的工程菌，于100 mL LED培養(yǎng)基中30 ℃振蕩培養(yǎng)16 h左右即達(dá)到生長峰值。

1.1.2 體外瘤胃發(fā)酵試驗(yàn)設(shè)計(jì) 2014年4—12月體外試驗(yàn)分3批在筆者所在單位動(dòng)物營養(yǎng)分析實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。（1）降甲烷天然植物提取物的篩選。試驗(yàn)設(shè)負(fù)對(duì)照組（CK組，未添加組）和正對(duì)照組即莫能菌素組（添加60 mg/L莫能菌素組），5個(gè)處理組分別為肉桂油組、博落回提取物組、大蒜油組、薄菏油組、丁香油組。各處理組濃度統(tǒng)一用量為500 mg/L，每個(gè)處理設(shè)5個(gè)重復(fù)，分別在12、24、36 h測(cè)定CH4含量，發(fā)酵結(jié)束后測(cè)定發(fā)酵液pH值，并把發(fā)酵液保存在4 ℃冰箱中，用于微生物蛋白（membrane cofactor protein，簡(jiǎn)稱MCP）含量測(cè)定。（2）1株表達(dá)a-淀粉酵母酶的體外發(fā)酵試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)負(fù)對(duì)照組（CK組，未添加組）和正對(duì)照組（添加 60 mg/L 莫能菌素組），處理組接種活化的工程菌1 mL，設(shè)5個(gè)重復(fù)。發(fā)酵24 h測(cè)定CH4含量，并測(cè)定發(fā)酵液pH值，微生物蛋白含量。（3）降甲烷天然植物提取物與工程菌組合的體外發(fā)酵試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)負(fù)對(duì)照組（未添加組）和正對(duì)照組莫能菌素組（添加60 mg/L莫能菌素）。處理組添加不同比例的植物提取物并接種活化工程菌，組合1為博落回提取物+大蒜油，組合2為博落回提取物+肉桂油，組合3為博落回提取物+大蒜油+工程菌，組合4為博落回提取物+肉桂油+工程菌，天然提取物添加量500 mg/L，工程菌添加量1 mL/50 mL，每個(gè)處理設(shè)5個(gè)重復(fù)。分別在12、24、36 h測(cè)定CH4產(chǎn)量，發(fā)酵結(jié)束后測(cè)定發(fā)酵液pH值，并把發(fā)酵液保存在4 ℃冰箱中，用于微生物蛋白含量測(cè)定。

1.1.3 體外培養(yǎng) 采用Mauricio等的壓力讀取式體外產(chǎn)氣系統(tǒng)[3]進(jìn)行體外瘤胃發(fā)酵培養(yǎng)。體外發(fā)酵瘤胃液取自湖羊養(yǎng)殖基地——樂平市三王牧業(yè)有限公司的5只體質(zhì)量為 （35±3） kg 的成年瘺管湖羊。在試驗(yàn)當(dāng)天晨飼前抽取湖羊瘤胃液，4層紗布過濾至預(yù)熱處理后的收集瓶，在39 ℃水浴中保溫，沖入CO2厭氧備用。在體外培養(yǎng)前，將發(fā)酵底物（稻草粉、玉米粉和黃豆粉按照2 ∶ 1 ∶ 0. 3比例）及相應(yīng)量的天然植物提取物和莫能菌素預(yù)先裝入100 mL產(chǎn)氣瓶中，然后準(zhǔn)確抽取40 mL人工唾液。將產(chǎn)氣瓶用CO2飽和后密封，并于 39 ℃ 恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)過夜，再吸取10 mL瘤胃液于產(chǎn)氣瓶中，混勻，產(chǎn)氣瓶置于39 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。厭氧人工瘤胃緩沖液的配制按Menke等的方法[4]配制。

1.1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法 CH4和CO2含量的測(cè)定采用Gasboard 3200L便攜紅外沼氣分析儀（武漢四方光電科技有限公司），發(fā)酵液pH值用梅特勒-托利多酸度計(jì)直接測(cè)定，菌體蛋白含量的測(cè)定采用Makkar等的試驗(yàn)原理和試驗(yàn)方法[5-6]，用嘌呤法測(cè)定體外菌體蛋白含量。

1.1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2003整理，運(yùn)用SPSS 18統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用LSD法進(jìn)行多重比較。

1.2 動(dòng)物試驗(yàn)

1.2.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)羊由樂平市三王牧業(yè)有限公司提供，請(qǐng)專業(yè)人員裝好瘺管，恢復(fù)良好后再供試驗(yàn)用。試驗(yàn)于2015年3—9月在樂平市三王牧業(yè)有限公司湖羊養(yǎng)殖基地進(jìn)行。

1.2.2 試驗(yàn)方法 試驗(yàn)選擇15只體質(zhì)量為33～39 kg的成年湖羊作為研究對(duì)象，試驗(yàn)設(shè)1組負(fù)對(duì)照組（CK組，未添加組）和1組正對(duì)照組莫能菌素組（添加60 mg/L）和3個(gè)處理組：組合1，博落回提取物+低濃度大蒜油+工程菌;組合2，博落回提取物+高濃度大蒜油+工程菌;組合3，博落回提取物+肉桂油+工程菌。各組之間博落回提取物和工程菌的添加量一致，分別為每只羊添加21 mg/d博落回提取物和活化的工程菌1 mL;組合1的大蒜油添加油為每只羊添加70 μL/d;組合2的大蒜油添加量為每只羊添加700 μL/d;組合3的肉桂油添加量為每只羊添加175 μL/d。每組設(shè)3只湖羊重復(fù)，預(yù)飼期10 d，正式試驗(yàn)15 d，處理組將添加物每天直接添加到精料中喂食。精料和粗料分開飼喂，每只羊飼喂 400 g/d 精料（分2次）、950 g/d粗料，精粗比為3 ∶ 7，09：00—10：00第1次飼喂，15：00—16：00第2次飼喂，定時(shí)定量飼喂湖羊。粗料由苔草和花生秧組成，精料由玉米粉、黃豆粉和麩皮組成。每天記錄飼料剩余情況，正式試驗(yàn)3 d后采集1次瘤胃液，分析瘤胃液各項(xiàng)指標(biāo)性能并發(fā)酵24 h后測(cè)定甲烷產(chǎn)量、瘤胃液pH值、微生物蛋白等指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)束后再取瘤胃液進(jìn)行分析，并對(duì)羊的體質(zhì)量進(jìn)行稱量。

1.2.3 測(cè)定指標(biāo)與方法 CH4和CO2含量的測(cè)定采用Gasboard 3200L便攜紅外沼氣分析儀（武漢四方光電科技有限公司），發(fā)酵液pH值用梅特勒-托利多酸度計(jì)直接測(cè)定，菌體蛋白含量的測(cè)定采用Makkar等的嘌呤法[5-6]測(cè)定體外菌體蛋白含量。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2003整理，運(yùn)用SPSS 18統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用LSD法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 體外發(fā)酵試驗(yàn)

2.1.1 植物提取物對(duì)甲烷產(chǎn)生、發(fā)酵液MCP和pH值的影響 先通過查閱文獻(xiàn)初步確定初篩對(duì)象，再經(jīng)過大量反復(fù)的體外發(fā)酵試驗(yàn)，篩選出部分降甲烷效果較好的植物提取物（表1）。由表1可見，與負(fù)對(duì)照組相比，肉桂油、博落回提取物、大蒜油、薄荷油、丁香油在發(fā)酵12 h時(shí)，均有不同程度抑制甲烷產(chǎn)生的效果，其中肉桂油的抑制效果最明顯，大蒜油次之，博落回提取物、薄荷油、丁香油這3種抑制效果接近。發(fā)酵到24 h時(shí)，肉桂油抑制甲烷產(chǎn)生效果依然最顯著，大蒜油次之，而丁香油已無抑制效果。發(fā)酵到36 h時(shí)，肉桂油的抑制效果比較明顯，甚至超出正對(duì)照組莫能菌素組，其他的均基本已經(jīng)恢復(fù)與對(duì)照相同的產(chǎn)甲烷水平。

發(fā)酵12 h時(shí)，肉桂油抑制產(chǎn)甲烷效果明顯高于莫能菌素組，大蒜油的抑制效果與莫能菌素組相當(dāng)，其他組的抑制效果不同程度地低于莫能菌素組;發(fā)酵24 h時(shí)，肉桂油的抑制效果極顯著高于莫能菌素組，然后依次是大蒜油、薄荷油、博落回提取物，而丁香油組則顯著高于莫能菌素組，與負(fù)對(duì)照組相當(dāng)，即丁香油在24 h已無抑制效果;發(fā)酵到36 h時(shí)，則除了肉桂油抑制效果高于莫能菌素外，其他的抑制效果都不同程度地低于莫能菌素組，均與負(fù)對(duì)照組相當(dāng)，即除肉桂油組外，其他試驗(yàn)組已無抑制效果。

MCP是反芻動(dòng)物最主要的氮源供應(yīng)者，pH值是一項(xiàng)反映瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的指標(biāo)。本試驗(yàn)取發(fā)酵36 h后的發(fā)酵液并測(cè)定其pH值和MCP含量。由表2可知，除博落回提取物處理的發(fā)酵液MCP含量與正負(fù)對(duì)照組接近外，其他處理均不同程度低于正負(fù)對(duì)照組，以大蒜油含量最低;各處理pH值與正負(fù)對(duì)照差異均不顯著，說明不同處理對(duì)瘤胃環(huán)境影響不大。

2.1.2 1株表達(dá)α-淀粉酵母酶的酵母菌的體外發(fā)酵試驗(yàn) 初步了解到，瘤胃液體外發(fā)酵24 h即能大致確定各項(xiàng)指標(biāo)的變化。因此，為節(jié)省工作量，低甲烷活性菌群的選育只選取發(fā)酵24 h這一時(shí)間點(diǎn)測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。由表3可知，發(fā)酵24 h時(shí)，與負(fù)對(duì)照組相比，工程菌處理組（降低12.9%）有部分降甲烷效果，但沒有正對(duì)照組效果明顯。而微生物蛋白含量與負(fù)對(duì)照組略有下降但明顯高于正對(duì)照組，而各處理的pH值變化不大。說明工程菌處理組在影響微生物蛋白產(chǎn)量和瘤胃環(huán)境較小的前提下，能同時(shí)抑制甲烷的產(chǎn)生，是一種潛在的理想添加劑。

2.1.3 降甲烷天然植物提取物與工程菌組合的體外發(fā)酵試驗(yàn) 通過不同組合和添加不同的天然植物提取物并接種活化的工程菌反復(fù)進(jìn)行瘤胃液的體外發(fā)酵試驗(yàn)，篩選出各項(xiàng)指標(biāo)相對(duì)理想的組合。由表4可知，與負(fù)對(duì)照組相比，不同組合處理均有抑制甲烷的效果，其中組合3效果最為明顯，約降低32.5%，而其微生物蛋白還顯著高于正對(duì)照組;其次是組合1和組合4，分別約降低30.1%、20.5%，而組合1的微生物蛋白含量則略低于組合4。莫能菌素作為正對(duì)照，抑制甲烷效果均比各處理顯著，但由于其強(qiáng)抑制甲烷產(chǎn)生，而導(dǎo)致微生物蛋白含量也是最低。另外，從表4還可以看出，各處理的pH值比較接近，無明顯變化。綜合考慮各項(xiàng)指標(biāo)變化可以得知，組合3和組合4是比較理想的處理組合。

2.2 動(dòng)物試驗(yàn)

2.2.1 試驗(yàn)對(duì)瘺管湖羊采食量的影響 圖1為動(dòng)物試驗(yàn)用瘺管湖羊。由于添加的博落回提取物和精油有刺激味特別是大蒜油比較明顯，所以在飼喂瘺管羊的過程中發(fā)現(xiàn)直接飼喂會(huì)比較嚴(yán)重影響羊的采食量（表5），而莫能菌素可能是由于采用無水乙醇處理而嚴(yán)重影響試驗(yàn)羊的食欲。

2.2.2 試驗(yàn)對(duì)瘺管湖羊瘤胃液的影響 動(dòng)物試驗(yàn)3 d后各處理對(duì)瘺管羊瘤胃液的影響總結(jié)見表6，由于試驗(yàn)儀器故障，甲烷的產(chǎn)生量沒收集到數(shù)據(jù)。由表6可知，與負(fù)對(duì)照組相比，除組合2的微生物蛋白含量提高較少外（提高6.5%），組合1和組合3均顯著提高了微生物蛋白量（提高84.5%和67.6%），也同時(shí)均高于正對(duì)照莫能菌素的微生物蛋白量（提高36.8%和24.3%）;組合2略高于負(fù)對(duì)照組，而低于正對(duì)照組。與負(fù)對(duì)照相比，組合1氨態(tài)氮含量顯著提高（81.6%），組合2和組合3的氨態(tài)氮含量分別提高40.8%、44.7%;3個(gè)組合氨態(tài)氮含量均高于正對(duì)照組（分別為30.2%、0.9%、3.8%）。與負(fù)對(duì)照組相比，組合1和組合2的pH值明顯降低，而組合3的pH值變化不大，而正對(duì)照組的pH值則顯著高于各處理組。

由表7可知，與負(fù)對(duì)照相比，組合1和組合2降甲烷效果明顯，甲烷產(chǎn)生量分別降低18.5%和23.7%，不過均低于莫能菌素的抑制效果（甲烷產(chǎn)生量降低48.4%），有可能是與莫能菌素添加量過大有關(guān)系;組合3無抑制產(chǎn)甲烷效果，反而促進(jìn)了甲烷生成。與負(fù)對(duì)照組相比，除組合2的微生物蛋白含量略有降低外（降低1.8%），與3 d動(dòng)物試驗(yàn)后的瘤胃液變化相同，組合1和組合3均顯著提高了微生物蛋白量（35.4%、37.2%），但略低于正對(duì)照組莫能菌素的微生物蛋白含量;與負(fù)對(duì)照組相比，與3 d動(dòng)物試驗(yàn)后的瘤胃液變化相反，組合1氨態(tài)氮含量顯著降低44.4%，組合2和組合3的氨態(tài)氮含量變化不大（組合2降低7.3%和組合3提高6.0%）。各處理組的瘤胃液pH值變化均不大，表明整個(gè)瘤胃液系統(tǒng)狀態(tài)基本穩(wěn)定。綜合考慮表6、表7動(dòng)物試驗(yàn)羊瘤胃液各個(gè)指標(biāo)變化結(jié)果可知，組合1是比較理想的降甲烷微生態(tài)調(diào)控劑配方，而組合3在動(dòng)物試驗(yàn)3、7 d對(duì)瘤胃液的降甲烷效果存在截然相反的效果，具體原因有待進(jìn)一步研究分析。

2.2.3 試驗(yàn)對(duì)瘺管湖羊體質(zhì)量的影響 由表8可知，組合1處理的湖羊體質(zhì)量增加率比負(fù)對(duì)照組略高0.93%，而比正對(duì)照高50.14%，說明組合1作為添加劑明顯優(yōu)于莫能菌素。組合2的湖羊平均體質(zhì)量增長率比負(fù)對(duì)照組高4.81%，比組合1高約3.9%，這可能與添加的大蒜油濃度略高，能更好地抑制甲烷的同時(shí)又對(duì)微生物活動(dòng)影響不大有關(guān)系。而組合3的湖羊平均體質(zhì)量增長率遠(yuǎn)低于對(duì)照組，其原因有待進(jìn)一步的試驗(yàn)求證。在本研究中，綜合各項(xiàng)指標(biāo)及動(dòng)物試驗(yàn)，組合1和組合2是相對(duì)理想的處理組合，而它們的差別也僅是添加的大蒜油濃度不一樣，所以進(jìn)一步摸索不同的大蒜油添加比例，以達(dá)到最佳的降甲烷和促生長效果。

3 討論

3.1 體外發(fā)酵試驗(yàn)

本研究應(yīng)用體外發(fā)酵試驗(yàn)主要測(cè)定湖羊發(fā)酵液的甲烷產(chǎn)量、MCP含量及其pH值，初步篩選湖羊降甲烷，促生長微生態(tài)制劑成分及組合。有研究表明，博落回是一種純天然綠色生物“三藥”產(chǎn)品，可以作為防治水果、蔬菜、糧食作物、棉花的病蟲害[7-8]等的生物農(nóng)藥、獸藥、醫(yī)藥原料。此外，博落回被歐洲食品安全局認(rèn)可為用于動(dòng)物飼料添加劑的資源植物[9-10]。在奶牛飼糧中添加博落回提取物可以增加氮的利用效率，因?yàn)椴┞浠靥崛∥锛訌?qiáng)了瘤胃微生物作用，減少了瘤胃無氨態(tài)氮降解作用，從而加強(qiáng)了瘤胃氮的消化[11];此外，博落回提取物對(duì)奶牛的乳房炎具有改善作用。在羊飼糧中添加博落回提取物可以幫助改善由于酷暑造成生長性能下降的不良反應(yīng)，這種改善作用可能是由于抗炎作用和營養(yǎng)吸收加強(qiáng)而形成的[12]。博落回提取物在湖羊瘤胃體外試驗(yàn)中，低濃度時(shí)提高甲烷產(chǎn)生，高濃度時(shí)能有效降低甲烷，促進(jìn)發(fā)酵模式由乙酸型向丙酸型轉(zhuǎn)變[13]，所以本研究所采用的博落回提取物添加濃度相對(duì)較高，而且沒設(shè)濃度梯度，其添加濃度的影響有待進(jìn)一步的研究探索。植物精油在反芻動(dòng)物瘤胃發(fā)酵調(diào)控中的研究比較多[14-15]。本研究以降甲烷、促生長為主要目標(biāo)，發(fā)現(xiàn)肉桂油、大蒜油和博落回提取物的降甲烷效果良好，而其中只有博落回提取物處理組的MCP含量與對(duì)照接近，其他都不同程度地導(dǎo)致了MCP含量的降低。

飼糧中添加釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)穩(wěn)定幼年或成年反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)微生物活動(dòng)、保持正常的pH值、降低乳酸生成量、防止酸中毒、促進(jìn)纖維分解菌生長方面都有積極作用[16]，本研究采用直接添加活化的筆者所在實(shí)驗(yàn)室重組的1株酵母工程菌，簡(jiǎn)單易行，結(jié)果表明其有一定的抑制甲烷效果，而對(duì)瘤胃液的MCP含量及pH值基本無影響。結(jié)合前面試驗(yàn)的結(jié)果，本研究進(jìn)行幾種天然植物提取物與工程菌組合的湖羊的體外發(fā)酵，篩選出博落回提取物與肉桂油或者大蒜油輔以一定劑量的重組工程菌組合來進(jìn)行下一步的動(dòng)物試驗(yàn)，而對(duì)各成分的添加比例及相互作用機(jī)制則未涉及，有待進(jìn)一步的研究。

3.2 動(dòng)物試驗(yàn)

由于添加的博落回提取物和精油有刺激味，特別是大蒜油比較明顯，所以會(huì)比較嚴(yán)重影響羊的采食量，而添加低濃度大蒜油的平均剩料量反而比添加高濃度的大蒜油的略高，其原因有可能與羊的個(gè)體差異、試驗(yàn)過程數(shù)據(jù)收集誤差有關(guān)，而莫能菌素組可能是采用無水乙醇處理嚴(yán)重影響試驗(yàn)羊的食欲。試驗(yàn)對(duì)瘺管湖羊瘤胃液的影響依然是采用體外培養(yǎng)的方法，添加了肉桂油組的組合在動(dòng)物試驗(yàn)后7 d的甲烷產(chǎn)量相比對(duì)照還高，在一定程度上說明肉桂油后續(xù)有促進(jìn)甲烷生成的作用，但由于體外試驗(yàn)的局限性，這一結(jié)果還有待于更先進(jìn)、更科學(xué)的方法如呼吸室法等來檢驗(yàn)。而各處理組對(duì)瘤胃液的影響則可以通過研究其瘤胃液微生物的結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行進(jìn)一步的分析。添加大蒜油的組合處理組與對(duì)照組相比均提高了湖羊的體質(zhì)量增長率，其添加比例有待進(jìn)一步優(yōu)化;而添加了肉桂油的組合處理組和添加莫能菌素組的湖羊組體質(zhì)量增長率反而降低，其原因有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

在研究過程中發(fā)現(xiàn)，降甲烷的天然植物提取物比較多，但要達(dá)到降甲烷的同時(shí)，既能提高飼料利用率和生長速率相對(duì)較少，筆者通過大量的篩選和反復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，博落回提取物基本具備這三重功效，是一種潛在的理想的反芻動(dòng)物飼料天然植物添加劑。筆者所在的實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的酵母工程菌也有一定的降甲烷能力，而其對(duì)反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)環(huán)境的影響則有待更深入研究。博落回提取物與大蒜油按一定比例組合并加以一定量的活化工程菌，無論在體外發(fā)酵試驗(yàn)還是在瘺管湖羊的動(dòng)物試驗(yàn)，均降低甲烷生成。但由于博落回提取物與大蒜油的刺激性氣味，其適口性還有待大大改善，還應(yīng)進(jìn)一步摸索不同的大蒜油添加比例，以達(dá)到最佳的降甲烷和促生長效果。

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