王國霞，莫文艷，范怡杰，李國立，黃文慶，陳曉瑛，黃燕華,

( 1.廣東省農業(yè)科學院 動物科學研究所，廣東 廣州 510640； 2.農業(yè)農村部華南動物營養(yǎng)與飼料重點實驗室，廣東 廣州 510640； 3.廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點實驗室，廣東 廣州 510640；4.廣州飛禧特生物科技有限公司，廣東 廣州 510640 )

雜交鱧[烏鱧(Channaargus)♂×斑鱧(C.maculata)♀]，俗稱生魚，是烏鱧和斑鱧的雜交后代，屬鱸形目、攀鱸亞目、鱧科、鱧屬，是中國南方重要的淡水經濟養(yǎng)殖魚類[1]。雜交鱧肉質細嫩、味道鮮美，無肌間刺，屬于淡水魚類中的佳品，其還具有補氣、補血、祛風濕、治胃寒等功效，同時它含有豐富的二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸，具有較高的藥用價值和營養(yǎng)價值[2]。在中國南方地區(qū)，尤其是兩廣和港澳地區(qū)，雜交鱧被視為病后康復和體虛者的滋補珍品。廣東是雜交鱧的主產區(qū)，雜交鱧養(yǎng)殖產量占全國產量的50%以上。雜交鱧對飼料蛋白質量需求較高，近幾年，隨著魚粉價格的不斷上漲，以及雜交鱧需求不平衡和消費疲軟的多重影響，導致其養(yǎng)殖效益及價格持續(xù)下滑[3]。因此，在滿足雜交鱧營養(yǎng)需求的前提下，使用低魚粉飼料配方時，如何有效提高雜交鱧攝食量而不影響生長，成為眾多水產營養(yǎng)研究者關注的課題。

促攝食物質作為一種非營養(yǎng)性飼料添加劑，是目前研究較多的一類，具有改善飼料風味和水產動物對飼料的適口性，提高攝食量和飼料利用率，促進水產動物覓食和生長，降低餌料系數和環(huán)境污染[4]等優(yōu)點。烏賊膏作為優(yōu)良的誘食劑和營養(yǎng)補充原料，對魚蝦有明顯的誘食作用，在水產飼料中有著廣泛的應用。但是烏賊膏中脂肪、水分含量高，易發(fā)生變質，此外由于加工及處理方式不同，質量差異大[5-7]，尤其是重金屬鎘和汞超標導致的衛(wèi)生安全隱患，嚴重制約其使用，尋找新的可替代的有效誘食劑產品也是必然的需求。黑水虻，學名為亮斑扁角水虻(Hermertiaillucens)，是一種大型雙翅目、水虻科、扁角水虻屬昆蟲。因其在自然界分布較廣、資源豐富、對環(huán)境安全、養(yǎng)殖難度較低[8]和易產業(yè)化等特點，黑水虻作為新型的功能性動物飼料很早就被學者關注[9-10]，最近幾年更是國際社會關注和重視的資源昆蟲，其幼蟲富含蛋白質和脂肪等。黑水虻蟲粉在水產飼料中替代魚粉的應用已有相關報道[11-15]，蟲漿也有零星報道[16]，而筆者前期觀察到黑水虻干蟲粉有明顯的蟲香味，混入飼料中可引起魚蝦搶食現(xiàn)象。但黑水虻在雜交鱧飼料中的誘食和應用研究未見報道。本研究以雜交鱧為研究對象，通過比較在飼料中添加烏賊膏、黑水虻幼蟲干粉和鮮蟲漿3種物質對其生長性能、形體指標、肌肉營養(yǎng)成分和血清指標的影響，篩選出適用于雜交鱧的誘食性物質，為其實用飼料配方的優(yōu)化提供參考和理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

各組飼料配方及營養(yǎng)水平見表1。以基礎料中添加烏賊膏(購自浙江興業(yè)集團有限公司油脂飼料加工廠)為對照組，分別添加5%黑水虻幼蟲干粉(以下簡稱蟲粉，由鮮蟲在120 ℃短時間干燥粉碎制得)和10%黑水虻鮮幼蟲漿(以下簡稱蟲漿，干物質3%，由鮮蟲直接粉碎打漿)為試驗組，3組飼料為等氮等能飼料。黑水虻干蟲和鮮蟲均由廣州飛禧特生物科技有限公司提供。各原料粉碎過60目篩，按照配方準確稱量原料逐級混勻，加適量自來水攪拌混勻后用Valva-60-Ⅰ型膨化機(廣州市維拉維機械設備有限公司)將其制成直徑為3.0 mm的膨化顆粒飼料，55 ℃烘干，自然冷卻后裝入密封袋中置干燥陰涼處保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗魚及飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗在廣東省農科院農業(yè)現(xiàn)代化科技示范區(qū)水產養(yǎng)殖實驗基地1.5 m×1.5 m×2 m的漁排網箱中進行。魚苗購自中山市三角鎮(zhèn)霍華方水產種苗孵化場，購買的魚苗在網箱中暫養(yǎng)至適宜規(guī)格后，挑選健康、規(guī)格一致的體質量為(83.24±0.13) g的雜交鱧180尾，隨機分為3組，每組3個平行，每個平行20尾。分別投喂3種試驗飼料。每日表觀飽食投喂2次(8:30—9:00和17:30—18:00)。試驗期間自然光照，水溫19～34 ℃，pH 8.0～8.5，溶解氧水平>5 mg/L，氨氮質量濃度≤0.1 mg/L，亞硝酸鹽質量濃度≤0.05 mg/L。飼養(yǎng)周期為10周。

1.3 樣品采集與分析

1.3.1 指標計算

飼養(yǎng)試驗結束后，禁食24 h，稱量質量和統(tǒng)計存活尾數，計算質量增加率、特定生長率、飼料系數和成活率。每平行取4尾魚，稱量體質量及測量體長(吻端到脊椎骨末端)，采集魚體背部肌肉用于營養(yǎng)成分測定，同時解剖分離出內臟團、肝臟和全腸并稱量質量，記錄，用于計算形體指標。所用計算公式如下：

質量增加率/%=(m2-m1)/m1×100%

特定生長率/%·d-1=[lnm2-lnm1]/t×100%

餌料系數=m3/(m2′-m1′)

平均攝食量/g·尾-1=m3/[(n1+n2)/2]

存活率/%=n2/n1×100%

肥滿度=100m/L3

臟體比/%=m4/m×100%

肝體比/%=m5/m×100%

腸體比/%=m6/m×100%

式中，m1為試驗魚初始均質量(g)，m2為試驗魚終末均質量(g)，t為試驗時間(d),m1′為試驗魚初始質量(g)，m2′為試驗魚終末質量(g)，m3為攝入飼料量，n1為試驗魚初始數量(尾)，n2為試驗魚終末數量(尾)，m為試驗魚體質量(g)，m4為試驗魚內臟質量(g)，m5為試驗魚肝臟質量(g)，m6為試驗魚腸道質量(g)。

表1 試驗飼料配方及營養(yǎng)水平(風干基礎) %

注：1.其他指L-賴氨酸0.5%、L-蛋氨酸0.1%、維生素C磷酸酯(35%)0.1%、氯化膽堿、維生素預混料0.2%、礦物預混料0.5%、磷酸二氫鈣1.0%. 維生素預混料及微量元素預混料均由廣州飛禧特生物科技有限公司提供. 每千克維生素預混料: VA 3 000 000 IU、VD31 200 000 IU、VE 15 g、VK310 g、VB110 g、VB215 g、VB615 g、煙酸40 g、泛酸鈣40 g、葉酸1.8 g、肌醇70 g、VB120.06 g、生物素 0.1 g、水分≤10%；每千克礦物質預混料: Mg 28 g、Fe 6.0 g、Zn 20 g、Mn 2.0 g、Cu 1.0 g、Co 0.1 g、I 0.5 g、Se 0.040 g、水分≤ 10%.

1.3.2 飼料和背肌成分分析

水分含量采用105 ℃烘箱干燥法(GB/T 6435—2014)測定、粗蛋白質含量采用凱氏定氮法(GB/T 6432—1994)測定、粗脂肪含量采用乙醚抽提法(GB/T 6433—2006)測定、灰分含量采用550 ℃灼燒法(GB/T 6438—2007)測定、鈣含量采用乙二胺四乙酸二鈉絡合滴定法(GB/T 6436—2002)測定、總磷含量采用鉬黃比色法(GB/T 6437—2002)測定。

1.3.3 血清指標測定

每個重復隨機取4尾魚，用1 mL無菌注射器進行魚尾靜脈取血，混合后于4 ℃下靜置2 h，3500 r/min離心(80-2臺式電動離心機)10 min，分離血清于-80 ℃冰箱保存，用于生化和免疫抗氧化指標等的測定。血清白蛋白、總膽固醇、甘油三酯、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、尿素氮、球蛋白、血糖、總蛋白含量采用日立7600全自動生化分析儀檢測(廣州金域醫(yī)學檢驗中心)。二胺氧化酶、內毒素、D-乳酸、谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶、丙二醛、堿性磷酸酶采用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒進行測定，具體測定方法參照試劑盒說明書進行。

1.4 統(tǒng)計分析

試驗數據用平均值±標準誤表示，采用SPSS 18.0軟件中單因素方差分析進行分析處理，若符合方差齊性則用Duncan法進行多重比較，否則用Dunnett-T3檢驗法進行多重比較。P<0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 黑水虻對雜交鱧生長性能的影響

各試驗組雜交鱧的成活率均達到100%。干蟲粉組和鮮蟲漿組雜交鱧末均質量和質量增加率均較烏賊膏組(對照組)增加，其中干蟲粉組的顯著高于對照組(P<0.05)，鮮蟲漿組有高于烏賊膏組的趨勢(P=0.055)，干蟲粉組和鮮蟲漿組的特定增長率均顯著高于對照組(P<0.05)；干蟲粉組和鮮蟲漿組的餌料系數均顯著低于對照組(P<0.05)(表2)。各組攝食量，及形體指標肥滿度、臟體比、肝體比和腸體比差異均不顯著(P>0.05)。

2.2 黑水虻對雜交鱧背肌營養(yǎng)組成的影響

與對照組相比，干蟲粉組和鮮蟲漿組雜交鱧背肌粗脂肪含量增加，其中干蟲粉組顯著高于對照組(P<0.05)；試驗中各組雜交鱧背肌的干物質、粗蛋白、灰分、鈣及總磷含量差異均不顯著(P>0.05)(表3)。

2.3 黑水虻對雜交鱧血清生化指標的影響

干蟲粉和鮮蟲漿組血清膽固醇含量顯著低于對照組(P<0.05)，干蟲粉和鮮蟲漿組血清甘油三酯均高于對照組，其中干蟲粉組顯著高于對照組(P<0.05)；試驗各組間血清中的血糖、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、白蛋白、球蛋白及總蛋白含量差異不顯著(P>0.05)(表4)。

表2 3種不同投喂組合的雜交鱧的攝食和生長性能

注:同行肩標小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)，下同.

表3 3種不同投喂組合的雜交鱧背肌營養(yǎng)組成 %

表4 3種不同投喂組合的雜交鱧血清各生化指標含量

2.4 黑水虻對雜交鱧血清抗氧化和腸道屏障功能指標的影響

各組間血清免疫抗氧化指標谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶、堿性磷酸酶含量差異不顯著(P>0.05)；血清中腸道屏障功能指標二胺氧化酶、內毒素和D-乳酸含量差異不顯著(P>0.05)(表5)。

表5 3種不同投喂組合的雜交鱧血清抗氧化和腸道屏障指標

3 討 論

3.1 黑水虻對雜交鱧生長性能的影響

該試驗結果表明，飼料中添加黑水虻干幼蟲粉、黑水虻鮮蟲漿與烏賊膏對照組比較，攝食量沒有差異，且均能促進雜交鱧的生長、降低餌料系數，說明黑水虻干蟲粉和鮮蟲漿在攝食上與烏賊膏具有同樣作用。添加黑水虻干蟲粉與對照組比較，質量增加率顯著提高38.19%，特定生長率顯著提高25.47%，飼料系數顯著降低28.22%。這與黑水虻蟲粉在黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)[12]、建鯉 (Cyprinuscarpiovar.jian)[13]和錦鯉(C.carpiokoi)[14]中替代魚粉對其生長性能影響不顯著的結果不一致，分析原因跟蟲粉使用量及其質量(一般魚粉優(yōu)于黑水虻蟲粉，蟲粉優(yōu)于豆粕[18])和魚種類不同有關。研究發(fā)現(xiàn)，黑水虻幼蟲不僅含有豐富的蛋白質、必需氨基酸、不飽和脂肪酸以及奇數碳脂肪酸，還含有抗菌肽、幾丁質和殼聚糖等生物活性成分，可作為一種新型的飼料原料在水產飼料中應用[17-18]。黑水虻干幼蟲粉替代魚粉試驗中，建鯉[15]和錦鯉[14]的生長性能分別在75%和70%替代組出現(xiàn)最大值，但跟魚粉對照組沒有差異，說明黑水虻幼蟲粉使用適宜劑量時效果優(yōu)于同等量魚粉，分析原因跟其含有抗菌肽、幾丁質等活性物質有關。有研究報道，20%鮮蠅蛆漿能明顯提高黃鱔(Monopterusalbus)的質量增加率并降低飼料系數，且效果優(yōu)于存放180 d和冷凍后的蠅蛆漿[19]。本試驗中添加黑水虻鮮蟲漿與對照組比較顯著提高了雜交鱧的生長參數，顯著降低了餌料系數，說明適量的鮮蟲漿可以提高魚的生長。而與在幼鏡鯉飼料中添加不同含量的黑水虻蟲漿(最高組10%)養(yǎng)殖8周對其生長性能和體組成沒有差異的報道[16]不一致，可能跟試驗動物品種和黑水虻蟲漿品質有關。

肝體比是評價魚體健康程度的重要指標，肝指數較低，表明魚體的肝臟負荷可控制在其自身肝功能調節(jié)的范圍內[15]，而當臟體比、肝體比、腸體比增加，說明內臟因脂肪等沉積進而引起肥大，不僅影響其功能，而且還會降低飼料利用效率[20-21]。本試驗結果顯示，各組雜交鱧的臟體比、肝體比、腸體比差異不顯著，表明在飼料中添加黑水虻蟲粉和黑水虻蟲漿與使用烏賊膏時一樣對雜交鱧的肝功能調節(jié)能力沒有影響。研究表明，某些蛋白替代品對水產動物肝體比不會產生顯著影響[22-23]，與本試驗中黑水虻蟲粉的試驗研究結果一致。

3.2 黑水虻對雜交鱧背肌營養(yǎng)組成的影響

本試驗中各組之間雜交鱧的水分、粗蛋白、灰分、鈣及總磷含量差異均不顯著，說明雜交鱧的營養(yǎng)水平(除粗脂肪外)受這幾種誘食物質(在該添加水平下)的影響不大，處于一個相對平衡的狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加1%～2%烏賊膏對雜交鱧背肌的營養(yǎng)組成沒有顯著影響[2]，與本試驗一致。在動物生產過程中，肌內脂肪的增加對提高肉質品質和風味具有重要作用[24]，本試驗結果中黑水虻干蟲粉組雜交鱧肌肉粗脂肪含量顯著高于烏賊膏和鮮蟲漿組，這可能與黑水虻蟲粉本身具有較高的脂肪含量有關，且黑水虻脂肪有利于肌肉脂肪的沉積，而黑水虻油脂含量要達到一定量才能夠有效果，這可能是黑水虻鮮蟲漿組(換算成黑水虻干物質為3%，低于干蟲粉組5%的用量)雜交鱧背肌脂肪含量低于干蟲粉組的原因。研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加一定量蠅蛆漿能降低黃鱔肌肉中的脂肪含量，且跟蠅蛆漿新鮮程度沒有關系[19]，與該試驗結果不一致，可能跟昆蟲種類及蟲漿的營養(yǎng)組成尤其是脂肪酸組成及含量不同有關[18-19]。

3.3 黑水虻對雜交鱧血清指標的影響

血液的生理生化指標是反映動物生理機能及代謝狀況的重要指標，也是衡量動物健康標準的指標[25]。已有研究發(fā)現(xiàn)，黑水虻預蛹替代魚粉降低舌齒鱸(Dicentrachuslabrax)[26]血漿膽固醇的含量，可能是黑水虻預蛹和脫脂蟲粉膽固醇含量低于魚粉，導致替代飼料中的膽固醇含量降低引起鱸魚血漿膽固醇含量低，飼料中膽固醇含量直接影響?zhàn)B殖動物血液膽固醇含量[27-28]。文遠紅等[29]也發(fā)現(xiàn)蠅蛆粉替代魚粉使黃顙魚血清膽固醇含量降低。本試驗中用黑水虻蟲粉、蟲漿替代烏賊膏的結果與上述研究結果基本一致。也有不同報道，黑水虻蟲粉替代魚粉(黑水虻蟲粉用量為3.5%和7.0%)對建鯉[13]血清膽固醇和甘油三酯含量沒有影響。本試驗中黑水虻蟲粉、蟲漿組血漿中的甘油三酯含量與對照組比較有增加，血清甘油三酯含量可反應脂肪組織發(fā)育和脂肪沉積能力，其含量增加提示脂肪沉積能力增強[30]，試驗組背肌粗脂肪含量增加也驗證了這一點。該試驗中脫脂蟲粉、蟲漿替代烏賊膏后雜交鱧血清谷丙轉氨酶和谷草轉氨酶有下降趨勢，與用黑水虻替代魚粉后錦鯉血漿中谷丙轉氨酶顯著下降、谷草轉氨酶下降的結果[14]一致。

3.4 黑水虻對雜交鱧血清抗氧化和腸道屏障功能指標的影響

生物在生長發(fā)育過程會產生大量的自由基，這些自由基如果不能及時被機體抗氧化防御系統(tǒng)清除，過量的自由基即可誘發(fā)氧化應激，并導致氧化損傷[31]。器官和組織對氧化應激的易感性依賴于機體氧化與抗氧化的動態(tài)平衡。超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶等作為生物抗氧化體系重要調控酶，其活性高低直接影響機體抗氧化能力，而丙二醛作為機體氧化應激程度標志物質，與機體氧化應激呈正相關[32]。研究表明，黑水虻蟲粉對錦鯉血漿超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽含量具有促進作用[14]，蛹肽蛋白分別替代大菱鲆(Scophthalmusmaximus)幼魚配合飼料中45%和60%的魚粉，能夠顯著增加大菱鲆幼魚肝臟超氧化物歧化酶活性[33]，飼料中添加20%蠅蛆蛋白可有效提高凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)血清超氧化物歧化酶活性[34]，與本研究中添加黑水虻幼蟲干粉一定程度提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的含量結果類似，這可能是因為昆蟲粉中含有抗氧化蛋白及抗菌肽[35]，且其作用效果跟蟲粉用量也有關。飼料中添加黑水虻蟲漿2.5%～10%可使幼鏡鯉血清過氧化氫酶升高，丙二醛顯著下降[16]，而本試驗中，10%的黑水虻蟲漿對雜交鱧抗氧化指標沒有顯著影響，分析可能與蟲漿品質及試驗魚種類有關，需要更多試驗驗證。

腸道不僅是重要的內分泌器官，調節(jié)營養(yǎng)物質消化與吸收，還是重要的免疫器官，其形成的屏障功能能夠屏蔽腸腔內的有害物質(像二胺氧化酶、內毒素、D-乳酸)進入體內對機體造成損傷。腸道時刻與外界相通，接觸外界微生物的次數也最多，因此也更容易產生氧化應激，造成氧化損傷[36-37]。二胺氧化酶是一種含有脫胺的腐胺和組胺的細胞內酶，大部分存在于小腸黏膜，腸黏膜受損時細胞壞死該酶被釋放進入血液。內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁的脂多糖成分，是細菌大量增殖或是死亡裂解后釋放出的有毒物質。D-乳酸是腸道固有細菌的代謝產物，血液中的D-乳酸基本上來源于腸道。因此測定血清中二胺氧化酶、內毒素、D-乳酸含量可以綜合評定腸黏膜的通透性高低。本試驗結果表明，各組雜交鱧血清二胺氧化酶、內毒素、D-乳酸含量沒有顯著差異，表明各組魚腸道屏障功能沒有差異。

4 結 論

綜合比較烏賊膏、黑水虻干蟲粉、黑水虻鮮蟲漿3種物質在雜交鱧飼料中的應用效果，結果發(fā)現(xiàn)，5%的黑水虻干蟲粉或10%鮮蟲漿可以用于雜交鱧飼料中替代烏賊膏作為促攝食物質使用，而且較烏賊膏具有更好的促生長作用。