尹超群

重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院輸血科，重慶 401520

新生兒溶血癥（hemolytic disease of newborn）是一種由母嬰血型不合所引起的疾病之一[1]，多發(fā)于新生兒，母嬰血型不合時(shí)便可產(chǎn)生不規(guī)則抗體，而不規(guī)則抗體是引發(fā)新生兒溶血癥發(fā)生的主要因素[2]。因此，想要提前了解新生兒的溶血癥發(fā)生情況，在孕婦產(chǎn)前實(shí)施不規(guī)則抗體篩查極為重要。所以在該次研究中，該院將2016年10月—2018年6月期間在該院接受產(chǎn)前檢查的150例夫婦血型不合孕婦作為研究對(duì)象，對(duì)不規(guī)則抗體篩查在孕期檢查中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行了研究分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將在該院接受產(chǎn)前檢查的150例夫婦血型不合孕婦作為該次研究的主要對(duì)象，將其作為研究組，所有150例孕婦，年齡范圍在22～38歲之間，孕婦平均年齡（27.5±8.3）歲，孕婦懷孕次數(shù)在 1～5 次之間，平均懷孕次數(shù)（2.2±1.0）次；另選取150例夫婦血型不合孕婦作為對(duì)照組，所有150例孕婦，年齡范圍在22～39歲之間，孕婦平均年齡（27.1±7.9）歲，孕婦懷孕次數(shù)在1～5次之間，平均懷孕次數(shù)（2.1±0.9）次。該院征求了所有孕婦及其家屬的同意，該次研究同時(shí)得到倫理委員會(huì)的許可。兩組孕婦的基礎(chǔ)信息經(jīng)檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 新生兒溶血癥診斷標(biāo)準(zhǔn)

①新生兒出生3 d之內(nèi)，出現(xiàn)黃疸癥狀，且癥狀逐漸加重；②新生兒出生1～4 d內(nèi)，未早產(chǎn)新生兒血清總膽紅素含量達(dá)到220.6 μmol/L以上，早產(chǎn)新生兒血清總膽紅素含量達(dá)到256.5 μmol/L以上，且持續(xù)2周以上；③新生兒未由于其他因素而引發(fā)溶血癥[3]。

1.3 研究方法

該院為研究組150例孕婦進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，對(duì)照組150例孕婦不進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查。該次研究中用到的儀器和試劑主要包括強(qiáng)生專(zhuān)用離心機(jī)和孵育器、單克隆抗A單克隆抗B抗體、RhD(IgM)抗體、巰基乙醇應(yīng)用液、標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞、IgG抗人球檢測(cè)卡等。

1.3.1 不規(guī)則抗體檢測(cè)步驟 患者不抗凝血液或EDTA.K2 抗凝血 2～3 mL，3 400 r/min 離心 5 min，離心備用。檢測(cè)前將未開(kāi)的抗人球蛋白檢測(cè)卡置于離心機(jī)當(dāng)中，離心5 min，隨后取出備用。在抗人球蛋白檢測(cè)卡上填寫(xiě)受血者的姓名、住院號(hào)、篩選細(xì)胞編號(hào)等基礎(chǔ)信息，并撕掉卡上的封條。接著在每孔中加入bliss液1滴，使用微量移液器加入受血者血清或血漿40 μL，隨后在相應(yīng)編號(hào)孔中滴加濃度為3%的I、II、III號(hào)譜紅細(xì)胞各10 μL，再將檢測(cè)卡放入孵育箱當(dāng)中10 min，最后將其放入離心機(jī)當(dāng)中進(jìn)行5 min的離心處理，并觀察結(jié)果。若3組細(xì)胞均無(wú)凝集，則抗體篩選為陰性；若3組細(xì)胞任一組或一組以上出現(xiàn)凝集，則抗體篩為陽(yáng)性。

1.3.2 ABO血型和RhD血型檢查步驟 該次研究采用試管法，患者EDTA.K2抗凝血2～3 mL，3 400 r/min離心5 min，取一試管，向其中加入1 mL鹽水和40 μL積壓紅細(xì)胞，混勻后制成濃度為3.8%的紅細(xì)胞懸液備用。

（1）ABO血型檢測(cè)：①正定型：取A、B兩支試管，試管中分別加入抗-A血清和抗-B血清1滴，并在試管中各加入1滴待檢測(cè)紅細(xì)胞懸液，搖勻后在3400r/min的轉(zhuǎn)速下離心15 s。若A管血清凝集，B管無(wú)凝集，則正定型為A型；若A管無(wú)凝集，B管血清凝集，則正定型為B型；若A、B管均無(wú)凝集，則正定型 O型；若A、B管均凝集，則正定型為AB型。

②反定型：配制3.8%的A、B、O標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，取3支試管分別標(biāo)記A、B、O后向各管中加入被檢血清或血漿1滴，再向相應(yīng)試管中加入A、B、O標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液各1滴，搖勻后在3 400 r/min的轉(zhuǎn)速下離心15 s。若A和O細(xì)胞不凝集，B細(xì)胞凝集，則反定型為A型；若B和O細(xì)胞不凝集，A細(xì)胞凝集，則反定型為B型；若O細(xì)胞不凝集，A、B細(xì)胞均凝集，則反定型為O型；若A、B、O細(xì)胞均不凝集，則反定型為AB型[4-6]。

③正反定型必須一致，才能出具患者的血型鑒定報(bào)告。

（2）RhD血型檢測(cè)：取一試管加入1滴RhD(IgM)抗體試劑，然后加1滴待檢紅細(xì)胞懸液，混勻后3 400 r/min離心15 s，若出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，則為RhD陽(yáng)性；若無(wú)紅細(xì)胞凝集，則為RhD陰性。

1.3.3 lgG抗A/B效價(jià)測(cè)定 在lgG抗A/B效價(jià)測(cè)定方面，分別取研究組夫婦血清和2-Me應(yīng)用液各0.2 mL，將試管口塞緊，置37℃水浴2 h以中和完全抗體。接著取小試管10支，用蠟筆編1～10號(hào)，在每管中加生理鹽水0.2 mL，在第一管中加中和血清0.2 mL，作倍量稀釋。然后將未開(kāi)的IgG抗人球檢測(cè)卡放入專(zhuān)用離心機(jī)離心5 min備用，在IgG抗人球檢測(cè)卡上標(biāo)明患者姓名、待測(cè)孔編號(hào)，撕掉卡上的封條，在各待測(cè)孔加入5%A或B型紅細(xì)胞懸液10 uL，再加入相應(yīng)編號(hào)試管中的倍量稀釋中和血清40 uL。最后將卡放入37℃專(zhuān)用孵育器中孵育10 min，移出放入專(zhuān)用離心機(jī)離心5 min，取出觀察結(jié)果。以紅細(xì)胞凝集的最高稀釋度的倒數(shù)即為lgG抗A/B效價(jià)。如果效價(jià)在1:64及以上則為陽(yáng)性，并對(duì)效價(jià)在1:64及以上的孕婦進(jìn)行護(hù)理干預(yù)，反之則為陰性。如果孕婦為O血型，丈夫?yàn)锳B血型，則需要進(jìn)行l(wèi)gG抗A和抗B效價(jià)測(cè)定，如果夫婦二人的血型相符合，則不需要進(jìn)行l(wèi)gG抗A/B效價(jià)測(cè)定[7-8]。

檢查結(jié)束后，對(duì)研究組孕婦不規(guī)則抗體檢出情況和兩組新生兒溶血癥發(fā)生情況進(jìn)行調(diào)查。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，孕婦不規(guī)則抗體檢出率和新生兒溶血病發(fā)病率用百分?jǐn)?shù)表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 孕婦不規(guī)則抗體檢出情況

研究組150例孕婦，經(jīng)lgG抗A/B效價(jià)檢查，lgG抗A/B效價(jià)1∶64及以上孕婦77例 （51.33%），lgG抗A/B效價(jià)1∶64以下孕婦73例（48.67%）；經(jīng)不規(guī)則抗體檢測(cè)，陰性孕婦140例（93.33%），陽(yáng)性孕婦10例（6.67%）。 見(jiàn)表 1。

表1 研究組孕婦不規(guī)則抗體檢出情況[n(%)]

2.2 新生兒溶血病發(fā)生情況

在新生兒溶血病發(fā)生情況方面，研究組中144例（96.00%）新生兒未發(fā)病，6 例（4.00%）新生兒發(fā)病，其中5例新生兒血清總膽紅素＜205 μmol/L，1例新生兒血清總膽紅素在205～300 μmol/L之間；對(duì)照組中127例（84.67%）新生兒未發(fā)病，23例（15.33%）新生兒發(fā)病，其中6例新生兒血清總膽紅素＜205 μmol/L，12例新生兒血清總膽紅素在205～300 μmol/L之間，5例新生兒血清總膽紅素＞300 μmol/L。數(shù)據(jù)經(jīng)檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見(jiàn)表 2。

表2 兩組新生兒溶血病發(fā)生情況對(duì)比[n(%)]

3 討論

新生兒的血型由父母雙方的血型來(lái)確定[9]，當(dāng)新生兒從父親遺傳來(lái)的血型抗原為新生兒母親沒(méi)有的，新生兒紅細(xì)胞進(jìn)入母體后使新生兒母親產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，產(chǎn)生抗體后由胎盤(pán)進(jìn)入新生兒體內(nèi)，最終引發(fā)免疫反應(yīng)的發(fā)生，導(dǎo)致新生兒發(fā)生溶血病[10-11]。因此，在孕婦生產(chǎn)前實(shí)施有效的檢查，并根據(jù)檢查結(jié)果進(jìn)行針對(duì)性的干預(yù)治療具有重要的臨床意義。在該次研究中，經(jīng)不規(guī)則抗體篩查和lgG抗A/B效價(jià)測(cè)定，研究組中不規(guī)則抗體陽(yáng)性孕婦10例，陽(yáng)性率為6.67%，效價(jià)在1∶64及以上的孕婦77例，占全組的51.33%，孕婦通過(guò)合理有效的護(hù)理干預(yù)后，研究組中發(fā)生溶血病的新生兒僅6例，新生兒溶血病發(fā)生率為4.00%，對(duì)照組中發(fā)生溶血病的新生兒多達(dá)23例，新生兒溶血發(fā)生率高達(dá)15.33%，數(shù)據(jù)經(jīng)檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 在劉?；鄣热薣12]的研究當(dāng)中，經(jīng)不規(guī)則抗體篩查和lgG抗A/B效價(jià)測(cè)定的孕婦，更根據(jù)檢查結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)性干預(yù)，生產(chǎn)后新生兒溶血病發(fā)生率僅為6.00%，低于對(duì)照組新生兒溶血病的發(fā)生率（15.00%），與該次研究的結(jié)果相對(duì)比，基本吻合。

綜上所述，在孕婦懷孕期間進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，對(duì)于預(yù)防孕婦產(chǎn)后新生兒溶血病診斷具有重要意義。