陳方如，蒙 堅(jiān)，劉群英，黃 熙

(桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚性病科，廣西桂林 541001)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是可以造成多系統(tǒng)、多器官功能損害的經(jīng)典自身免疫性疾病，其發(fā)病機(jī)制仍有許多問(wèn)題有待闡明[1]。近年來(lái)固有免疫在SLE發(fā)生發(fā)展中的作用越來(lái)越受到重視，樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)的相關(guān)研究便是其中之一。在各種炎癥信號(hào)的刺激下，DCs會(huì)產(chǎn)生各種細(xì)胞因子，從而誘導(dǎo)T細(xì)胞、B細(xì)胞的增殖與活化，病理情況下則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的自身免疫反應(yīng)，產(chǎn)生大量自身抗體[2-3]。因此，本研究選擇與DCs關(guān)系密切的細(xì)胞因子IL-6、IL-10和IL-23，檢測(cè)它們?cè)赟LE患者中的表達(dá)水平，及其與臨床表型的聯(lián)系，以探討SLE炎癥形成的機(jī)制，為臨床開展個(gè)體化靶向治療提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年7月至2017年12月在本院皮膚科就診的SLE患者共30例作為SLE組，其中男1例，女29例，年齡10～63歲，平均32.5歲，病程2個(gè)月至15年。SLE診斷符合美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)1997年修正的分類標(biāo)準(zhǔn)[4]。對(duì)照組15例為本院健康體檢者，其中男1例，女14例，年齡22～50歲，平均28.1歲。各組年齡、性別構(gòu)成差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并得到患者知情同意。

1.2標(biāo)本及臨床資料采集 清晨采集SLE組患者和對(duì)照組體檢者空腹靜脈血5 mL， 置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝試管中，靜置30 min后，3 000 r/min離心5 min，留取上層血清分裝于1 mL EP管，置于-80 ℃冰箱凍存待測(cè)。所有患者均采集臨床資料，包括SLE疾病活動(dòng)指數(shù)(SLE disease activity index，SLEDAI)[5]、24 h尿蛋白、抗核抗體(ANA)、抗雙鏈DNA(ds-DNA)抗體、補(bǔ)體等。所有研究對(duì)象相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查均由本院檢驗(yàn)科完成。

1.3細(xì)胞因子的測(cè)定 人血清IL-6、IL-10和IL-23細(xì)胞因子水平測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，試劑盒由北京達(dá)科為公司提供，嚴(yán)格按說(shuō)明書操作。

2 結(jié) 果

2.1SLE組與對(duì)照組IL-6、IL-10和IL-23表達(dá)差異的比較 SLE組血清IL-6、IL-10及IL-23水平均明顯高于對(duì)照組，兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1 SLE患者血清中IL-6、IL-10及IL-23表達(dá)水平

2.2IL-6、IL-10和IL-23表達(dá)與SLE患者病情活動(dòng)的關(guān)聯(lián)性 SLE病情活動(dòng)按SLEDAI評(píng)分來(lái)判斷，30例患者中7例大于或等于15分，9例10～14分，10例5～9分，4例小于5分。將每例SLE患者相應(yīng)的IL-6、IL-10和IL-23水平與SLEDAI評(píng)分進(jìn)行直線相關(guān)分析，結(jié)果顯示，SLEDAI評(píng)分與IL-6(R2=0.89，P<0.01)、IL-10(R2=0.85，P<0.01)均呈顯著正相關(guān)，見(jiàn)圖1。

2.3IL-6、IL-10和IL-23表達(dá)與實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性 SLE患者中，24 h尿蛋白量≥500 mg組的血清IL-6(P<0.01)及IL-10(P=0.02)水平顯著高于24 h尿蛋白量<500 mg組。ANA滴度≥1∶320組的血清IL-6(P<0.01)水平顯著高于ANA滴度<320組。抗dsDNA抗體陽(yáng)性組血清IL-6及IL-10(P<0.01)水平顯著高于陰性組。補(bǔ)體水平低下組的血清IL-6(P<0.01)及IL-10(P=0.03)水平顯著高于正常組。IL-23的表達(dá)水平與24 h尿蛋白、ANA、抗dsDNA抗體及補(bǔ)體指標(biāo)均無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表2。

圖1 IL-6、IL-10、IL-23表達(dá)水平與SLEDAI評(píng)分的關(guān)系

項(xiàng)目組別IL-6IL-10IL-2324h尿蛋白≥500mg33.53±7.6346.64±17.46114.03±16.86<500mg21.73±5.8733.39±8.05114.94±14.64P<0.010.020.88ANA滴度≥1∶32033.08±6.8046.83±15.43117.88±16.74<1∶32019.29±4.5129.45±5.79108.54±11.85P<0.010.150.12抗dsDNA抗體陽(yáng)性33.83±6.8148.16±15.82116.51±17.18陰性20.44±4.9830.39±5.7811.77±13.44P<0.01<0.010.42補(bǔ)體水平低下33.38±8.1045.98±18.15117.17±15.05正常21.90±5.4834.15±7.53111.35±16.18P<0.010.030.32

3 討 論

SLE臨床表型復(fù)雜，其發(fā)病機(jī)制與遺傳異質(zhì)性、免疫調(diào)節(jié)異常等多種因素有關(guān)。天然免疫系統(tǒng)是人體保護(hù)自身的第一道防線，其中DCs連接著天然免疫與獲得性免疫，其釋放的各種細(xì)胞因子參與了誘導(dǎo)免疫耐受或啟動(dòng)免疫應(yīng)答過(guò)程。本研究發(fā)現(xiàn)SLE患者血清中IL-6、IL-10和IL-23水平均較健康人群明顯升高，它們與DCs有著較為密切的關(guān)系，在SLE炎性反應(yīng)過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的作用。

本研究中SLEDAI評(píng)分與IL-6、IL-10水平存在顯著正相關(guān)關(guān)系，表明這兩個(gè)指標(biāo)對(duì)SLE的疾病活動(dòng)情況具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。同時(shí)24 h尿蛋白、ANA、抗dsDNA抗體及補(bǔ)體水平低下均與血清IL-6表達(dá)水平升高相關(guān)，而IL-10水平與SLE患者24 h尿蛋白、抗dsDNA抗體、補(bǔ)體水平異常也相關(guān)，這提示IL-6和IL-10可能主要從促進(jìn)自身抗體的形成及腎臟損害兩個(gè)方面參與了SLE 的發(fā)病過(guò)程。既往研究發(fā)現(xiàn)，IL-6可以促進(jìn)細(xì)胞中心的活化和分化，參與系統(tǒng)性自身免疫及炎性反應(yīng)的形成。在DCs中，IL-6水平異常升高可造成細(xì)胞的功能缺陷，打破免疫耐受平衡[6-7]。狼瘡鼠模型中IL-6缺陷，可以延緩疾病的發(fā)展，減少CD4+和 CD8+T細(xì)胞的數(shù)量，減少腎小球IgG和C3的沉積。外源性IL-6可以促使B細(xì)胞產(chǎn)生的DNA增加，目前鼠人嵌合抗人IL-6R單抗Tocilizumab被美國(guó)食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)治療，但感染風(fēng)險(xiǎn)的增加限制了它的應(yīng)用[8-9]。DCs分泌的IL-10是一個(gè)關(guān)鍵調(diào)節(jié)分子，如其表達(dá)異常則無(wú)法終止過(guò)度T細(xì)胞反應(yīng)所造成的慢性炎癥和組織損傷[10]。TEITZ-TENNENBAUM等[11]發(fā)現(xiàn)，如果阻斷IL-10信號(hào)通路，則不同類型DCs比例將發(fā)生變化，進(jìn)而可抑制免疫性炎性反應(yīng)的程度。目前，在中國(guó)SLE人群中證實(shí)了IL-10的基因易感性，有研究提出IL-10可以作為SLE疾病活動(dòng)度的預(yù)測(cè)指標(biāo)[12-13]。

DCs在受到炎癥信號(hào)刺激后會(huì)產(chǎn)生IL-23，這對(duì)效應(yīng)細(xì)胞Th1和Th17的活化有十分重要的影響，而且還參與了自身免疫性濾泡Th細(xì)胞的擴(kuò)增[14-15]。FISCHER等[16]報(bào)道，IL-23與狼瘡腎、SLE患者肥胖及外周血管炎有關(guān)，還有研究報(bào)道IL-23的表達(dá)水平與SLE病情活動(dòng)度密切相關(guān)[17]。但是本研究發(fā)現(xiàn)IL-23的表達(dá)水平與SLE病情活動(dòng)、24 h尿蛋白、ANA、抗dsDNA抗體及補(bǔ)體指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)性，研究結(jié)果的差異性可能與種族人群不同有關(guān)，且本研究樣本量較小，還需大樣本研究進(jìn)一步驗(yàn)證。

人體內(nèi)各種免疫細(xì)胞產(chǎn)生了大量的細(xì)胞因子，反之細(xì)胞因子又影響著免疫細(xì)胞的分化、成熟和活化；它們之間相互作用形成了維持免疫平衡的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)。DCs是天然免疫和獲得免疫之間的重要橋梁，與DCs功能有關(guān)的細(xì)胞因子中，IL-6、IL-10及IL-23與之存在何種調(diào)控關(guān)系，以及在免疫網(wǎng)絡(luò)中與其他細(xì)胞因子、免疫細(xì)胞之間的聯(lián)系都還需深入探究。綜上所述，IL-6、IL-10在SLE中的表達(dá)水平改變可以考慮作為新的潛在生物學(xué)標(biāo)記應(yīng)用于評(píng)估SLE的疾病活動(dòng)，且為SLE個(gè)體化治療的靶點(diǎn)提供了新的線索。