高 碩，李沛東，鄭佳佳，李 龍*

（杭州貝爾塔生物技術(shù)有限公司，浙江 杭州 310000）

生物安全是防止引入新病原和阻止病原傳播與擴(kuò)散的重要措施，是疫病防控的第一道防線。2018 年8 月3 日，我國(guó)遼寧省沈陽市首例非洲豬瘟確診[1]，之后中國(guó)多地出現(xiàn)非洲豬瘟疫情，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。非洲豬瘟被列為我國(guó)的一類傳染病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為法定呈報(bào)的動(dòng)物疫病[2]，足見其危害性之大。同時(shí)因其100%的發(fā)病率和死亡率[3-5]，且目前沒有有效的疫苗可用于防控，豬場(chǎng)的生物安全顯得尤為重要。所以生物安全越來越受到養(yǎng)豬業(yè)乃至整個(gè)養(yǎng)殖行業(yè)的重視。

本研究通過2018 年下半年國(guó)內(nèi)2 次大型行業(yè)會(huì)議進(jìn)行環(huán)境調(diào)查，對(duì)豬常見病毒性疾病病原（PEDV、PRRSV）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，揭示了豬病病原在行業(yè)會(huì)內(nèi)傳播流行的現(xiàn)狀，為國(guó)內(nèi)大型行業(yè)會(huì)議生物安全工作的開展，提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

GenoTube 采樣拭子管（Thermo Scientific）；無菌生理鹽水；小劑量核酸提取試劑盒（AXYGEN）；PEDV 熒 光 定 量RT-PCR 試 劑 盒（BETA VDL）；PRRSV 熒光定量RTPCR 試劑盒（BETA VDL）。

1.2 采樣方案

根據(jù)會(huì)議場(chǎng)地區(qū)域進(jìn)行采樣，主要包括各區(qū)域人員（鞋，衣服，攜帶物表面）、會(huì)場(chǎng)（地面，桌椅）、停車場(chǎng)（汽車輪胎，車身，駕駛室）等。另外，人員/車輛的采樣進(jìn)行來源地登記，會(huì)場(chǎng)環(huán)境樣品采樣區(qū)域及具體采樣點(diǎn)登記；兩次會(huì)議（會(huì)議A、會(huì)議B）均為期3 日，每天進(jìn)行采樣，每日約100 ～150 個(gè)樣品，共計(jì)約500個(gè)樣品。具體采樣方案見表1、表2。

表1 會(huì)議A 采樣方案

1.3 采樣方法

使用GenoTube 采樣拭子管蘸取無菌生理鹽水后，對(duì)人員、環(huán)境、車輛等進(jìn)行采樣。采樣點(diǎn)面積大于25 cm×25 cm 的 以25 cm×25 cm進(jìn)行采樣，不足25 cm×25 cm 的采取全部表面積。采樣時(shí)一邊涂抹一邊旋轉(zhuǎn)拭子頭，直至涂抹完所有采樣面積及拭子頭完全涂黑，之后將拭子塞回采樣管，旋緊，做好編號(hào)和標(biāo)記。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 樣品預(yù)處理

GenoTube 采樣拭子均用滅菌的磷酸緩沖液（PBS）浸泡，震蕩混勻。

表2 會(huì)議B 采樣方案

1.4.2 檢測(cè)前混樣

按照分組對(duì)樣品進(jìn)行3 混1 或5 混1 混樣操作。

1.4.3 樣品檢測(cè)

混樣后的樣品提取核酸后，采用熒光定量PCR 方法檢測(cè)PEDV 和PRRSV 病原。

1.5 數(shù)據(jù)匯總分析

對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行匯總分析，得到統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 會(huì)場(chǎng)環(huán)境調(diào)查采樣及檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)采樣方案結(jié)合現(xiàn)場(chǎng)實(shí)際情況，會(huì)議A 的 3 d 共采集261 個(gè)樣品；會(huì)議B 的3 d 共采集235 個(gè)樣品。具體如表3、表4 所示。

會(huì)議A 檢測(cè)結(jié)果顯示，會(huì)議第3 天在展覽中心104-108 號(hào)混合樣品中檢測(cè)到了PRRSV 病毒，占當(dāng)天采樣總數(shù)量的4.6%；會(huì)議第2 天環(huán)境混合樣品、人員消毒前后混合樣品、車輛混合樣品均檢測(cè)到PEDV 陽性分別占比18.9%、9.8%、3.7%。會(huì)議第3 天消毒前人員1-35 人員混合樣品、消毒后人員51-55 號(hào)、61-65號(hào)和71-74 號(hào)人員混合樣品、停車場(chǎng)車輛84-88 號(hào)混合樣品、會(huì)議中心89-98 號(hào)環(huán)境混合樣品均為PEDV病毒陽性，各占當(dāng)天采樣總量的45.4%，4.6%，13.9%，如圖1-a 所示。

會(huì)議B 檢測(cè)結(jié)果顯示，會(huì)議第2 天21-25 號(hào)人員混合樣品檢測(cè)到PRRSV 病毒；會(huì)議第1 天31-35 號(hào)人員混合樣品和會(huì)場(chǎng)環(huán)境51-55 號(hào)環(huán)境混合樣品、會(huì)議第2 天31-35 號(hào)人員混合樣品、會(huì)議第3 天會(huì)場(chǎng)周邊71-75 號(hào)環(huán)境混合樣品和停車場(chǎng)車輛66-70 號(hào)混合樣品均為PEDV 病毒陽性。會(huì)議B 檢測(cè)到的各類陽性樣品比例約為6%左右，如圖1-b 所示。

2.2 討論與分析

從檢測(cè)結(jié)果來看，兩次會(huì)議會(huì)場(chǎng)人員（車輛）病原攜帶及病原交叉污染情況較為嚴(yán)重。1）對(duì)比消毒前后結(jié)果，大會(huì)采取的消毒措施并未顯示出很好的消毒效果，消毒后的會(huì)場(chǎng)內(nèi)依然帶毒；2）人員密度較大的會(huì)議中心病原檢出率最高；（3）大會(huì)進(jìn)行的第3 天，人員攜帶的病原依然可以檢測(cè)到，更提醒我們要重視病原的攜帶傳播，參會(huì)人員應(yīng)做好自身洗消工作，勤洗澡換衣，業(yè)內(nèi)類似的大型會(huì)議應(yīng)采取更加嚴(yán)格的消毒措施，提高生物安全等級(jí)，以保證大會(huì)的安全進(jìn)行和廣大養(yǎng)殖者的切身利益。

表3 會(huì)議A 環(huán)境調(diào)查采樣統(tǒng)計(jì)結(jié)果

表4 會(huì)議B 環(huán)境調(diào)查采樣統(tǒng)計(jì)結(jié)果

圖1 會(huì)議A、會(huì)議B 陽性樣品占當(dāng)天采樣數(shù)量百分比

近年來，豬病尤其非洲豬瘟的暴發(fā)給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。攜帶接觸傳播是豬病的傳播方式之一，業(yè)內(nèi)大型會(huì)議使行業(yè)內(nèi)人員和車輛密集聚集，易造成病原攜帶及交叉污染。因此，行業(yè)大型會(huì)議應(yīng)重視生物安全工作，提高廣大參會(huì)者的生物安全意識(shí)，確保會(huì)議的正常進(jìn)行，防止攜帶的病原進(jìn)入會(huì)場(chǎng)及養(yǎng)殖場(chǎng)，給企業(yè)造成不必要的損失。