李俊辰　劉忠湫　蔡得陽(yáng)　黎金連　鐘海鳳　林軍　吳群英

摘要：用不同濃度的漱口水溶液分別處理大蒜根尖8、12和24 h，利用微核技術(shù)，研究漱口水對(duì)大蒜根尖細(xì)胞遺傳損傷作用。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，漱口水處理組細(xì)胞微核率增加（P<0.05），分裂細(xì)胞數(shù)減少，分裂指數(shù)下降（P<0.05），表明漱口水對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有遺傳損傷作用。

關(guān)鍵詞：漱口水;微核率;微核指數(shù);有絲分裂指數(shù)

中圖分類(lèi)號(hào)：S633? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2019）15-0136-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.15.032? ? ? ? ? ?開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Effects of mouthwash on genetic damage of root tip cells of garlic

LI Jun-chen，LIU Zhong-qiu，CAI De-yang，LI Jin-lian，ZHONG Hai-feng，LIN Jun，WU Qun-ying

（Guilin Medical University，College of Biotechnology，Guilin 541100，Guangxi，China）

Abstract： The research aimed to study the effect of mouthwash on the genetic damage of root tip cells of garlic， different concentrations of mouthwash were used separately to treat the root tip of garlic for 8， 12 and 24 h. The results showed that mouthwash induced the aberration of chromosomal and nuclear， the higher concentrations of mouthwash induced higher frequency of micronucleus rates（P<0.05）. while he number of mitosis cell of divisions and mitotic index decreased（P<0.05）， which were negatively correlated with the treatment time and dose of mouthwash. These results suggested mouthwash caused the genetic damage.

Key words： mouthwash; micronucleus rate; micronucleus index; mitotic index

目前，人們生活水平提高的同時(shí)，各種產(chǎn)品與日俱增，化學(xué)產(chǎn)品的污染和危害也成為社會(huì)廣泛關(guān)注的問(wèn)題[1，2]。一次性漱口水由于使用方便、易攜帶，贏得了廣大群眾的青睞。目前市面上常見(jiàn)的漱口水成分為桉油葉素、乙醇、百里香酚、水楊酸甲酯、薄荷腦等。杜永華等[3]發(fā)現(xiàn)一定劑量的1，8-桉葉油素對(duì)大鼠體質(zhì)量、生化指標(biāo)和血常規(guī)指標(biāo)均有不同程度的影響，會(huì)誘發(fā)小鼠感染性損傷和肝腎損傷;聞健瓊[4]研究表明，某品牌漱口水中含26.9%的乙醇成分，禁用于難以忍耐高濃度乙醇的患者。長(zhǎng)期使用漱口水是否對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生遺傳損傷作用，目前尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

植物微核技術(shù)（Micronucleus test，MNT）有操作簡(jiǎn)便、時(shí)間短、試驗(yàn)結(jié)果可靠、較強(qiáng)的實(shí)用性[5]等特點(diǎn)，可直觀反映污染物對(duì)生物遺傳物質(zhì)影響[6]，廣泛應(yīng)用于遺傳毒性檢測(cè)、安全性評(píng)估和遺傳損傷的監(jiān)測(cè)[7]。目前觀察有絲分裂常用的材料為蠶豆，但蠶豆只有一根主根，側(cè)根生長(zhǎng)不齊，生根需10 d時(shí)間;大蒜室溫下3～5 d即可生根，與蠶豆相比，育根更加快捷，每個(gè)蒜瓣可以萌發(fā)出數(shù)條或數(shù)十條不定根，根獲得量更大，可以消除因不同個(gè)體進(jìn)行處理時(shí)，出現(xiàn)的遺傳差異，是研究植物有絲分裂的優(yōu)良材料[8-11]。本試驗(yàn)選用大蒜根尖為材料，采用MNT檢測(cè)漱口水對(duì)大蒜根尖細(xì)胞遺傳損傷的影響。

1? 材料與方法

1.1? 材料

紫皮大蒜（購(gòu)于桂林市南城百貨）。某品牌漱口水（購(gòu)于桂林市沃爾瑪超市），蒸餾水，無(wú)水乙醇、濃鹽酸（購(gòu)于隴化工股份有限公司），改良苯酚品紅（購(gòu)于Solarbio公司）。

1.2? 方法

大蒜剝皮，置于蒸餾水中水培發(fā)根（25 ℃），待根長(zhǎng)至1～3 cm，選擇根尖生長(zhǎng)情況優(yōu)良的蒜瓣，蒸餾水為對(duì)照（Control），40%、80%、100% 4個(gè)濃度的漱口水溶液分別處理8、12和24 h。截取根尖，卡諾固定液固定24 h后轉(zhuǎn)入70%乙醇中，4 ℃環(huán)境保存。

1.3? 制片與鏡檢

蒸餾水漂洗3次，放入盛有1 mol/L HCl的小燒杯中，置于 60 ℃恒溫水浴鍋中解離8～10 min，待根尖發(fā)白變軟后取出，水洗后置于載玻片上，解剖刀截取根尖長(zhǎng)約0.5 cm，改良苯酚品紅染色8～10 min，壓片，鏡檢。

1.4? 數(shù)據(jù)處理

每個(gè)處理組隨機(jī)選取3張片，每個(gè)根尖統(tǒng)計(jì)1 000個(gè)細(xì)胞，共統(tǒng)計(jì)3 000個(gè)細(xì)胞，記錄染色體畸變狀況、細(xì)胞分裂數(shù)、微核數(shù)，計(jì)算微核率、微核指數(shù)、有絲分裂指數(shù)。

微核率（MCN）=（觀察細(xì)胞中有微核的細(xì)胞數(shù)/總觀察的細(xì)胞數(shù)）×1 000‰;

微核指數(shù)=處理組微核細(xì)胞數(shù)/對(duì)照組微核細(xì)胞數(shù)×100%;

有絲分裂指數(shù)（MI）=處理組有絲分裂細(xì)胞數(shù)/處理組細(xì)胞總數(shù)×100%。

采用SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行組間P值檢驗(yàn)和組內(nèi)多重比較。當(dāng)P<0.05，表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;P<0.01，差異顯著。微核指數(shù)平均值在0～0.5表示基本無(wú)損傷，1.5～2.0為輕度損傷，2.0～3.5為中度損傷，3.5以上表現(xiàn)為重度損傷[12，13]。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 不同濃度漱口水對(duì)大蒜根尖細(xì)胞有絲分裂過(guò)程染色體畸變的影響

分別用不同濃度的漱口水溶液處理大蒜根尖，檢測(cè)根尖細(xì)胞有絲分裂情況，與對(duì)照組相比，漱口水處理組誘導(dǎo)產(chǎn)生多種類(lèi)型的染色體畸變，結(jié)果見(jiàn)圖1，主要表現(xiàn)為微核（圖1A）、染色體滯后（圖1B）、染色體橋（圖1C、圖1D）、染色體斷片（圖1E）、染色體多極化（圖1F）等染色體畸變的現(xiàn)象。

2.2? 不同濃度漱口水對(duì)大蒜根尖細(xì)胞微核率的影響

用蒸餾水和不同濃度漱口水培養(yǎng)大蒜根尖，結(jié)果表明，處理時(shí)間相同時(shí)，漱口水濃度增加，微核發(fā)生率升高（表1）。與對(duì)照組相比，80%和100%漱口水處理組微核發(fā)生率均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;而40%漱口水處理大蒜根尖8 h時(shí)，微核發(fā)生率不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），延長(zhǎng)時(shí)間至12 h和24 h時(shí)，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明低濃度、短時(shí)間處理對(duì)根尖細(xì)胞的遺傳損傷作用不大。同一濃度漱口水，作用時(shí)間越長(zhǎng)，微核率越高，其中100%濃度漱口水處理大蒜根尖8、12和24 h時(shí)，微核率分別為6.50‰、6.90‰和7.70‰，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3? 不同濃度漱口水對(duì)大蒜根尖有絲分裂指數(shù)的影響

分裂期細(xì)胞數(shù)目越多，表明細(xì)胞分裂活動(dòng)越旺盛，其有絲分裂指數(shù)越大。本試驗(yàn)采用不同濃度漱口水分別處理大蒜根尖8、12和24 h。結(jié)果表明，漱口水處理組降低細(xì)胞有絲分裂指數(shù)，降幅與漱口水濃度和處理時(shí)間呈負(fù)相關(guān)（表2）。從表2可見(jiàn)，對(duì)照組有絲分裂指數(shù)為62.72%，試驗(yàn)組分裂指數(shù)均小于10%，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3? 討論

植物微核技術(shù)是檢測(cè)污染物遺傳毒性常用的試驗(yàn)方法[14]，有絲分裂指數(shù)越大，表示根尖細(xì)胞分裂越旺盛，分裂細(xì)胞越多[15]。本試驗(yàn)研究表明，漱口水抑制根尖細(xì)胞有絲分裂，誘導(dǎo)大蒜根尖細(xì)胞產(chǎn)生多種類(lèi)型的染色體畸變，導(dǎo)致細(xì)胞分裂數(shù)目減少，對(duì)根尖的生長(zhǎng)分化產(chǎn)生不利影響。與對(duì)照組相比，漱口水濃度越高，處理時(shí)間越長(zhǎng)，微核發(fā)生率越高，40%漱口水處理組，微核數(shù)量較少，只有處理時(shí)間為24 h時(shí)，微核發(fā)生率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明低濃度漱口水對(duì)大蒜根尖遺傳損傷作用不大;80%和100%濃度的漱口水溶液處理，微核指數(shù)增大，表明高濃度漱口水對(duì)大蒜根尖遺傳損傷作用較為嚴(yán)重。漱口水作為目前市場(chǎng)上流行使用的口腔清潔劑，對(duì)保持口腔健康起到較好的作用。本試驗(yàn)初步探討漱口水對(duì)大蒜根尖細(xì)胞的遺傳損傷作用，為評(píng)價(jià)漱口水的安全性提供參考。

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