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        豬源沙門(mén)氏桿菌分離鑒定及體外抑菌試驗(yàn)

        2019-09-10 07:22:44侯美東
        畜牧獸醫(yī)科學(xué) 2019年24期
        關(guān)鍵詞:分離鑒定

        侯美東

        摘要:該文主要分析了中小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)保育豬出現(xiàn)腹瀉病的臨床癥狀,并結(jié)合病理學(xué)檢查采集相關(guān)病料,對(duì)致病菌進(jìn)行分離培養(yǎng),并將分離培養(yǎng)的致病菌進(jìn)行進(jìn)一步藥品試驗(yàn),確定高敏抗生素。細(xì)菌分離鑒定發(fā)現(xiàn),從病死豬的肝臟腸系膜淋巴結(jié)中分離得到的致病菌形態(tài)一致,經(jīng)過(guò)沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng),確定分離得到的致病菌為沙門(mén)氏菌。將分離得到的致病菌進(jìn)行紙片藥品試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)該種致病菌對(duì)頭孢曲松鈉、氟苯尼考、氧氟沙星、卡那霉素、丁胺卡那霉素高敏。結(jié)合分離鑒定和體外抑菌試驗(yàn),要指導(dǎo)養(yǎng)殖戶(hù)在發(fā)生同樣疾病后,選擇高敏抗生素進(jìn)行對(duì)癥治療,只有這樣才能提高治療效果,縮短發(fā)病周期,降低養(yǎng)殖場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)損失。

        關(guān)鍵詞:豬源沙門(mén)氏菌;分離鑒定;體外抑菌試驗(yàn)

        中圖分類(lèi)號(hào):S858.28

        文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

        doi:10.3969/j.issn.2096-3637.2019.24.013

        0引言

        豬源沙門(mén)氏菌病又被稱(chēng)為副傷寒,是由致病性沙門(mén)氏菌感染引起的一種消化道疾病,臨床上主要表現(xiàn)為急性敗血癥和壞死性腸炎。慢性病例還會(huì)表現(xiàn)為肺炎和大腸壞死性炎癥。豬沙門(mén)氏菌病造成的危害十分嚴(yán)重,會(huì)給生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。近年很多養(yǎng)殖戶(hù)在進(jìn)行生豬養(yǎng)殖中,存在不合理的用藥行為,養(yǎng)殖場(chǎng)一旦出現(xiàn)發(fā)病情況,隨意使用抗生素進(jìn)行治療,使很多致病原的耐藥性極大增強(qiáng),多種藥物的防控效果逐漸下降。為進(jìn)一步提高疾.病的診斷效率和治療效果,在明確具體在致病原的基礎(chǔ)上,一定要進(jìn)行嚴(yán)格的藥品試驗(yàn),篩選出高敏抗生素,指導(dǎo)養(yǎng)殖戶(hù)科學(xué)用藥,合理用藥。只有這樣才能提高防控效果,降低發(fā)病率。

        1材料與方法

        1.1發(fā)病情況

        2018年8月13日,某中小規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖的40頭保育豬突然出現(xiàn)發(fā)病情況,大部分患病豬主要表現(xiàn)為嘔吐腹瀉,體溫沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的變化。通過(guò)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫程序進(jìn)一步檢查,養(yǎng)殖戶(hù)對(duì)保育豬免疫接種豬瘟、豬尾狂犬疫苗。發(fā)病后養(yǎng)殖戶(hù)交患病豬單獨(dú)隔離,但沒(méi)有及時(shí)將病情上報(bào),自行選擇抗生素進(jìn)行治療,沒(méi)有取得明顯的治療效果,發(fā)病2周后,養(yǎng)殖場(chǎng)死亡豬的數(shù)量進(jìn)一步提升。結(jié)合養(yǎng)殖場(chǎng)患病豬的臨床表現(xiàn),對(duì)病死豬進(jìn)行妥善的病理學(xué)解剖,采集病料進(jìn)行嚴(yán)格的試驗(yàn)室診斷,分離得到致病原,并進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn),結(jié)合抑菌試驗(yàn)篩選出高敏抗生素,很好地控制病情,避免病情進(jìn)一步擴(kuò)散蔓延,造成更為嚴(yán)重的損失。

        1.2材料

        待檢材料主要是在無(wú)菌條件下采集病死豬的病變臟器器官。在細(xì)菌分離鑒定和體外抑菌試驗(yàn)中,運(yùn)用到的材料主要為巧克力瓊脂培養(yǎng)基、沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基及用于藥敏試驗(yàn)檢測(cè)的各種材料。

        1.3細(xì)菌分離鑒定和藥敏試驗(yàn)

        首先,細(xì)菌分離鑒定。將養(yǎng)殖場(chǎng)的病死豬解剖后,觀察各個(gè)臟器器官的病理學(xué)變化和腸道的病變情況。然后在無(wú)菌條件下采集病死豬的典型病變臟器組織,并在無(wú)菌條件下將病料進(jìn)行充分的粉碎,用接種環(huán)采集病料后劃線接種到巧克力瓊脂培養(yǎng)基上,然后將巧克力瓊脂培養(yǎng)基放置在37°C的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),持續(xù)培養(yǎng)48h,將培養(yǎng)基取出觀察致病菌的形態(tài),小心調(diào)取分離得到的致病菌,選擇使用革蘭氏染色劑進(jìn)行充分染色,放置在顯微鏡下觀察致病菌的形態(tài)。將巧克力瓊脂培養(yǎng)基場(chǎng)分離得到的致病菌轉(zhuǎn)移到沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基上,放置在37°C的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),持續(xù)培養(yǎng)24h觀察結(jié)果[1];其次,藥敏試驗(yàn)。從沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基上挑取紫色的致病菌菌落,將其轉(zhuǎn)移到血清肉湯培養(yǎng)劑當(dāng)中,37°C震蕩培養(yǎng)24h,然后選擇使用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行常見(jiàn)的抗生素藥敏檢測(cè)。

        2結(jié)果

        2.1病理解剖

        將養(yǎng)殖場(chǎng)的病死豬解剖后,觀察各個(gè)臟器器官和腸道組織的病變情況,發(fā)現(xiàn)大腸粘膜顯著腫脹,聚集成縱向的褶皺狀[2],嚴(yán)重的呈現(xiàn)紫紅色,腸道切面呈現(xiàn)油脂狀或者腦髓狀。脾臟顯著腫大,外觀呈現(xiàn)淡紫色或淡藍(lán)色,切面呈現(xiàn)紅色,肝臟腫脹,明顯淋巴結(jié)腫,大出血,肺臟充血明顯。

        2.2細(xì)菌分離鑒定

        將病死豬的病變組織接觸到巧克力瓊脂培養(yǎng)基上,持續(xù)培養(yǎng)48h后可以發(fā)現(xiàn)有菌落生長(zhǎng),并且各個(gè)臟器器官病料中分離得到的致病菌形態(tài)一致。致病菌呈現(xiàn)無(wú)色透明,濕潤(rùn),光滑圓形。小心挑取分離得到的致病菌常規(guī)涂片染色鏡檢,可以發(fā)現(xiàn)革蘭氏陰性染色的桿菌存在。從巧克力瓊脂培養(yǎng)基上挑取致病菌菌落轉(zhuǎn)移接種到沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基上,放置在37°C的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),持續(xù)培養(yǎng)24h,可以發(fā)現(xiàn)菌落生長(zhǎng)出特有的紫色[3],結(jié)合上述特征性的變化,可以判定致病原為沙門(mén)氏菌。

        2.3藥敏試驗(yàn)

        選取純化分離得到的治病菌進(jìn)行常規(guī)抗生素敏感性檢測(cè),檢測(cè)法為紙片擴(kuò)散檢測(cè)法。檢測(cè)共選擇了9種常見(jiàn)的抗生素,主要包括頭孢曲松鈉、氟苯尼考、恩諾沙星、氨芐西林、氧氟沙星、多西環(huán)素、慶大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素。藥品試驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)該種致病菌對(duì)頭孢曲松鈉、氟苯尼考、氧氟沙星、卡那霉素、丁胺卡那霉素高敏,抑菌圈直徑分別為22、23、21、20、19mm。

        3討論

        豬沙門(mén)氏菌病主要危害1~4月齡的仔豬,6月齡以上的仔豬感染該種疾病后所表現(xiàn)的臨床癥狀較輕,對(duì)該種致病菌的抵抗能力相對(duì)較強(qiáng)。結(jié)合前人的研究結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)豬霍亂沙門(mén)氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌、豬傷寒沙門(mén)氏菌、德?tīng)柋吧抽T(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌等血清是引起該種疾病的主要致病原。研究采集的病料中分離形態(tài)一致的致病菌,并通過(guò)沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基鑒定致病原為沙門(mén)氏菌。由此可以確定養(yǎng)殖場(chǎng)是由沙門(mén)氏菌感染引起的傳染性疾病。確診為沙門(mén)氏菌病后,進(jìn)行嚴(yán)格藥品試驗(yàn),最終發(fā)現(xiàn)該種致病菌對(duì)頭孢曲松鈉、氟苯尼考、氧氟沙星、卡那霉素、丁胺卡那霉素高敏,抑菌圈直徑分別為22、23、21、20、19mm。同時(shí)對(duì)多種抗生素的抵抗能力較強(qiáng),抑菌效果較差,很多抗生素不會(huì)表現(xiàn)出任何的抑菌效果。由此可以看出,近年隨著生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)不斷向前發(fā)展,沙門(mén)氏菌的耐藥性不斷增強(qiáng)。由于基層地區(qū)的動(dòng)物試驗(yàn)室檢測(cè)條件有限,沒(méi)有明確是哪種沙門(mén)氏菌,需要進(jìn)一步完善。

        4結(jié)束語(yǔ)

        沙門(mén)氏菌是自然界中廣泛存在的一種條件性致病菌,隨著生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)不斷向前發(fā)展,沙門(mén)氏菌對(duì)豬養(yǎng)殖業(yè)造成的危害日趨嚴(yán)重。并且沙門(mén)氏菌是極容易產(chǎn)生耐藥性的一種致病菌,加上生豬養(yǎng)殖中抗生素添加劑的胡亂使用,導(dǎo)致致病原的耐藥性顯著增強(qiáng),耐藥譜嚴(yán)重?cái)U(kuò)大,加大對(duì)該種疾病源預(yù)防和治療的難度。養(yǎng)殖場(chǎng)的病情確診后,引導(dǎo)養(yǎng)殖戶(hù)選擇高敏抗生素進(jìn)行對(duì)癥治療。選擇使用98%的左旋氧氟沙星,每千克飼料使用0.1g,連續(xù)使用1周。同時(shí)肌肉注射卡納霉素注射液,使用劑量為0.15mL/kg體重,2次/d,連續(xù)使用5d為1個(gè)療程。通過(guò)指導(dǎo)養(yǎng)殖戶(hù)采用高敏抗生素進(jìn)行對(duì)癥治療,很好地控制病情,降低發(fā)病率和死亡率,養(yǎng)殖場(chǎng)患病豬在短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)健康。在生豬養(yǎng)殖中,應(yīng)引導(dǎo)養(yǎng)殖戶(hù)充分做好該種疾病的預(yù)防工作,認(rèn)識(shí)疾病的傳播流行和養(yǎng)殖場(chǎng)的飼養(yǎng)管理不當(dāng),衛(wèi)生條件有很大關(guān)系。在疾病防控中,應(yīng)始終堅(jiān)持預(yù)防為主的原則,改善整體的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件,及時(shí)清理豬舍中的各種糞便污染物,始終堅(jiān)持自繁自育、全進(jìn)全出的養(yǎng)殖模式,減少疾病傳播流行途徑。

        參考文獻(xiàn)

        [1]王楊,豬沙門(mén)氏菌病的流行病學(xué)、鑒別診斷與防控措施[J].現(xiàn)代畜牧科技,2019(5):94-95.

        ?[2]劉小蘭,邊彥超,康紹珠,等,雞唾液乳酸桿菌的分離鑒定及體外抑菌試驗(yàn)[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2018(23):169-173.

        [3]李娟.豬沙門(mén)氏菌病的流行病學(xué)、臨床癥狀、診斷及其防控[J].現(xiàn)代畜牧科技,2018(12):53.

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