尉玉杰

摘要：從豬的糞便中分離出引起仔豬副傷寒的病原菌，對該病原菌的菌落特征和生化特點進行了鑒定分析，并對該病原菌進行了體外抑菌試驗，結果顯示該種致病菌對頭孢塞芬、頭孢唑啉敏感性最強，抑菌圈分別是18、25mm，在豬源沙門氏菌防治中，應該選擇上述2種抗生素進行對癥治療，這樣才能提高治療效果。

關鍵詞：豬源沙門氏菌;分離鑒定;體外抑菌試驗

中圖分類號：S852.61

文獻標識碼：B

doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.24.005

0引言

沙門氏菌在自然界中廣泛分布，是牲畜體內的一種常在菌群，廣泛存在于豬牛羊的腸道中，通常沙門氏菌不會表現(xiàn)出明顯的致病能力，只有當動物身體抵抗能力下降、胃腸道中的有益菌群失衡時，沙門氏菌才會表現(xiàn)出致病能力，導致豬出現(xiàn)典型的臨床癥狀。

1材料與方法

1.1材料選取

本次研究所采集到的病例主要來源于某中小規(guī)模養(yǎng)殖場養(yǎng)殖的患病豬。在無菌條件下，直腸深部采集患病豬的新鮮糞便裝人到無菌保存袋后，帶回試驗室保存，在4C環(huán)境下等待使用。本次研究中所使用的培養(yǎng)基主要包括黃綠磺胺培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)培養(yǎng)基、三糖鐵培養(yǎng)基、明膠液化培養(yǎng)基和檸檬酸鹽培養(yǎng)劑。上述幾種培養(yǎng)基按照相應的配置方法嚴格制作。試驗中使用的試劑主要包括結晶紫、盧格氏碘液、番紅染色液、甲基紅指示劑。

1.2方法

1.2.1細菌分離培養(yǎng)

將采集到的糞便制作成涂片后，選擇使用革蘭氏染色劑對涂片進行充分染色，結合染色結果判定是否為沙門氏菌，再決定是否需要進行細菌分離培養(yǎng)。在細菌分離培養(yǎng)中，先進行增菌培養(yǎng)，培養(yǎng)一段時間后，將增菌液劃線接種到分離培養(yǎng)基上，然后挑取可疑菌落進行革蘭氏染色鏡檢，如果是紅色短棒桿菌[1]，需要進行進一步純化培養(yǎng)，重復上述步驟，直到顯微鏡檢查的致病菌形態(tài)一致為止。

1.2.2細菌形態(tài)鑒定

首先，革蘭氏染色。將采集到的病料，涂抹在載玻片上，使用結晶紫對涂片進行充分染色，染色時間控制在1min。染色結束后用水小心沖洗，然后進行媒染，向涂片滴加革蘭氏碘液，作用1min后，用清水將碘液去除，再將載玻片傾斜，向其中連續(xù)滴加95%的乙醇，脫色20～25s，直到流出的液體無色為止，然后使用清水立即清洗干凈[2]。選擇使用番紅復染，將染好的涂片放置在空氣中晾干或者使用吸水紙吸干;顯微鏡檢查。從培養(yǎng)基上選擇典型形態(tài)的單個致病菌菌落，小心挑取致病菌，制成涂片后進行革蘭氏染色，然后放置在顯微鏡下觀察，致病菌被革蘭氏染.成紫色表示革蘭氏陽性染色，若染成紅色表示為革蘭氏陰性染色。

1.2.3致病菌生化鑒定

將革蘭氏陰性染色的桿菌進行各種發(fā)酵糖發(fā)酵試驗，再進行進一步的生化鑒定。生化試驗主要選擇過氧化氫試驗、檸檬酸鹽試驗、產硫化氫試驗、明膠液化試驗、乙酰甲基醇試驗、苯丙氨酸試驗。結合最終試驗結果確定相應的細菌種類。

1.2.4藥敏試驗

選擇使用紙片擴散法，將培養(yǎng)好的致病菌涂布在培養(yǎng)皿上，將各種藥名紙片做好標記后，放置在培養(yǎng)皿中，持續(xù)培養(yǎng)24h后，觀察抑菌圈大小，用抑菌圈的大小表示該種抗生素對致病菌的敏感程度。

2結果

2.1致病菌形態(tài)

致病菌能在黃綠磺胺培養(yǎng)基上生長，生長出圓形、表面濕潤光滑、邊緣整齊、淡黃色透明的致病菌菌落，菌落中央突起。同時，在細菌培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基顏色由紅色逐漸變成淡黃色。進一步鏡檢可以發(fā)現(xiàn)致病菌呈桿狀，兩端呈橢圓形，革蘭氏陰性染色。進一步分離培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)分離出的沙門氏菌菌落直徑為0.5～1.5mm，中央凸起，圓形，邊緣整齊，呈淡黃色，濕潤光滑，細菌有鞭毛能運動，沒有芽孢，沒有夾膜[3]。

2.2生化鑒定

對從患病豬糞便中分離出來的致病菌進行生化鑒定，發(fā)現(xiàn)該種致病菌過氧化氫酶試驗為陽性，檸檬酸鹽試驗、產硫化氫試驗、明膠液化試驗、乙酰甲基醇試驗、苯丙氨酸試驗全部為陰性。結合上述致病菌培養(yǎng)的形態(tài)特征和生化鑒定，結果可以判定分離出來的細菌屬于沙門氏菌屬。將分離出來的致病菌進行進一步的糖發(fā)酵試驗，結果顯示分離得到的致病菌能發(fā)酵葡萄糖、甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、麥芽糖，不能發(fā)酵乳糖和蔗糖，結合常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊，對該細菌種類進行鑒定，可知分離得到的沙門氏菌屬于甲型副傷寒沙門氏菌。

2.3藥敏試驗

將分離得到的致病菌分別與頭孢唑林、頭孢塞酚、萬古霉素、紅霉素、氯霉素、青霉素、四環(huán)素、苯唑西林、甲氧氟啶、諾氟沙星進行紙片擴散法藥敏試驗。在藥敏試驗判定中，如果抑菌圈的大小超過15mm，則判定該種抗生素對沙門氏菌高度敏感，具有強抑菌作用。如果抑菌圈的直徑大于10mm、小于15mm，則表示該種抗生素對致病菌具有中度抑菌作用。如果抑菌圈的直徑小于10mm，表示該種抗生素對沙門氏菌的抑菌作用較低。如果抑菌圈直徑小于5mm，表示該種致病菌對該種抗生素具有耐藥性。通過藥敏試驗發(fā)現(xiàn)頭孢唑林、頭孢塞酚、萬古霉素、紅霉素、氯霉素、青霉素、四環(huán)素、苯唑西林、甲氧氟啶、諾氟沙星的抑菌圈直徑分別為18、25、7、7、8、7、9、13、10、3mm，結合，上述判定要求，發(fā)現(xiàn)分離得到的致病菌對頭孢唑林、頭孢塞酚高敏，對苯唑西林、甲氧氟啶中敏，對四環(huán)素、紅霉素、氯霉素、青霉素、萬古霉素低敏，對諾氟沙星耐藥。

3討論與結論

3.1合理選擇分離培養(yǎng)基

沙門氏菌在不同生長環(huán)境下所需要的培養(yǎng)基種類存在很大差異性，因此應該根據(jù)沙門氏菌所處的生長環(huán)境與不同培養(yǎng)基的生長情況進行綜合選擇。在進行沙門氏菌分離培養(yǎng)中，常規(guī)的方法是選擇麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、sS瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂營養(yǎng)培養(yǎng)基。其中在SS瓊脂培養(yǎng)基上生長的致病菌無色透明，中間帶有黑色的金屬光澤感;在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上能生長出無色透明的致病菌菌落，能與大腸桿菌作出區(qū)分。本次所選擇的培養(yǎng)基中，致病菌在黃綠磺胺培養(yǎng)基中生長，會使培養(yǎng)基的顏色由紅色變成淡黃色，顏色變化較為明顯，同時分離出的致病菌形態(tài)更為明顯，能更加明顯地鑒定沙門氏菌屬性。

3.2細菌分離鑒定

沙門氏菌在分離鑒定中常規(guī)的方法是根據(jù)致病菌的形態(tài)以及生化試驗確定致病菌類型，同時也可以借助分子生物學，如血清鑒定、PCR技術等，但由于基層地區(qū)的試驗室缺乏相應的檢測設備，同時這些技術操作要求相對較高，基層地區(qū)不具備該條件，因此通常采用傳統(tǒng)分離鑒定方法。本次分離鑒定主要包括選擇性增菌、分離培養(yǎng)、純化培養(yǎng)、生化鑒定、糖發(fā)酵等幾個步驟，準確性相對較高，采用上述步驟，能得到比較純凈的沙門氏菌菌種。

3.3致病菌耐藥性鑒定

甲型副傷寒沙門氏菌是獸醫(yī)臨床上比較常見的沙門氏菌菌屬，該種沙門氏菌具有很強的致病性，在豬群中一旦爆發(fā)流行，將會造成極大的危害，導致大量豬死亡。近年，隨著生豬養(yǎng)殖產業(yè)不斷向前發(fā)展，很多養(yǎng)殖戶存在盲目用藥的行為，抗生素的使用種類不斷增多，使用量不斷增大，導致致病菌的耐藥性日趨嚴重。因此，在進行具體診治中，在明確致病原的基礎上一定要進行嚴格的藥敏試驗。本次藥敏試驗發(fā)現(xiàn)，分離得到的致病菌對頭孢唑林、頭孢塞酚高敏，對苯唑西林、甲氧氟啶中敏，對四環(huán)素、紅霉素、氯霉素、青霉素、萬古霉素低敏，對諾氟沙星耐藥。因此，獸醫(yī)在進行臨床治療中，一定要結合本地區(qū)藥敏試驗結果，選擇相應的抗菌藥物，這樣能極大縮短發(fā)病周期，提高治療效果。

參考文獻

[1]李三星.沙門氏菌藥敏試驗及質粒的保有狀況[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，1998（6）：7.

[2]馮文喆，金菊，王盎，等.鵝沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2018（6）：27-28.

[3]宋岱松，陳煥昌，劉媛媛，等.1例育肥豬沙門氏菌性腸炎的診治[J].養(yǎng)殖與飼料，2019（5）：70-74.