封紅瑞　田欣欣　李松濤　王孜軒　李雙江

摘要：為更詳細(xì)了解山東省德州市臨邑縣雞肉組織中四環(huán)素類獸藥殘留情況，本文對國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T6682-2008采用的高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜的測定方法進(jìn)行了研究改良。采用固相萃取法對雞肉組織中的土霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素殘留同時(shí)進(jìn)行提取、凈化、富集、檢測。

關(guān)鍵詞：雞肉;獸藥殘量;高效液相色譜法;檢測研究

四環(huán)素類抗生素是由放線菌產(chǎn)生的一類廣譜性抗生素，對大多數(shù)革蘭氏陽性菌和陰性菌可起到抑制殺菌的作用，因而被廣泛的用于治療各種感染性疾病，微量添加在飼料或動物飲水中則用于預(yù)防疾病，提高飼料的利用率，促進(jìn)動物生長等。久用四環(huán)素類抗生素可引起畜禽等動物機(jī)體的正常菌群減少，導(dǎo)致動物體內(nèi)維生素缺乏，后經(jīng)食物鏈循環(huán)間接對人體健康造成潛在損害。因此，檢測雞肉組織中四環(huán)素類殘留量對保障人體健康有很重要的意義。本文根據(jù)四環(huán)素類抗生素的特性，采用HLB小柱作為固相萃取柱，用Mcllvaine-Na2EDTA緩沖溶液對雞肉組織進(jìn)行低溫提取，并對GB/T6682-2008采用的高效液相色譜法進(jìn)行研究改良，運(yùn)用于雞肉組織的檢測，建立了一種加標(biāo)回收率高、靈敏度更高、檢測結(jié)果更準(zhǔn)確的檢測方法。

1.材料與方法

1.1樣品來源

本次研究于從臨邑縣不同地區(qū)市場隨機(jī)購買12只肉雞，每只肉雞體重為2.0～2. 5kg，屠宰后取肌肉組織置于封口袋內(nèi)，逐一標(biāo)記，并保存在3℃的恒溫保溫箱里待檢測。 1.2儀器設(shè)備 高效液相色譜儀、旋渦振蕩器、移液槍、固相萃取柱、0. 45 um微孔濾膜等。

1.3試劑

鹽酸土霉素、鹽酸強(qiáng)力霉素、鹽酸四環(huán)素、甲醇、乙二胺四乙酸二鈉、檸檬酸、磷酸氫二鈉氫氧化鈉等。

1.4限量標(biāo)準(zhǔn)

2.實(shí)驗(yàn)方法

2.1 Mcllvaine-Na2EDTA緩沖溶液的配置

分別稱取1. 29g檸檬酸，1.09g磷酸氫二鈉，3.72g乙二胺四乙酸二鈉于燒杯中，用90mL去離子水溶解，并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH=4.O±0.5，轉(zhuǎn)移至lOOmL容量瓶中，并定容至lOOmL，搖勻待用。

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

準(zhǔn)確稱取50.Omg三種四環(huán)素類抗生素于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成1.O mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，然后梯度稀釋為lOOppm、lOppm后冷凍保存待用。

2.3流動相的配置

稱取7. 2g磷酸二氫鈉于燒杯，加入600mL蒸餾水，精密過濾，并用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH=2.5，超聲20min。

2.4樣品提取

取2.Og雞肉樣，置于50mL離心管中，加入8mL McllvaineNa2EDTA緩沖溶液，渦旋混勻4min，離心機(jī)轉(zhuǎn)速8000r/min離心lOmin，取上清液于另一離心管內(nèi)。

2.5凈化

在HLB固相萃取柱中加入濾膜，后稱取0.5g HLB于固相萃取柱，依次用3mL甲醇、3mL水活化，加入上清液過柱，用3mL水淋洗、減壓抽干3min，后用3mL草酸甲醇溶液洗脫，將樣品洗到離心管中，用氮?dú)鈱㈦x心管中溶液吹干，用移液槍移取甲醇補(bǔ)至1mL，后用高效液相色譜儀檢測雞肉組織中四環(huán)素類殘留量。

3.檢測與分析

圖3 2是加1 mL lOppm的四環(huán)素類的加標(biāo)回收測的色譜圖，根據(jù)色譜可以計(jì)算出四環(huán)素的回收率。土霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素峰面積分別為4. 4867mAU.min、4.0267mAU.min、1. 4884mAU.min，測出量分別為9.72ppm、9.46ppm、8.29ppm，理論量都是10.OOppm，加標(biāo)回收率分別為97. 2%、94. 6%、82. 9%，說明改良后的檢測方法可完全適用于雞肉組織中四環(huán)素類獸藥檢測。

4.結(jié)論

測定結(jié)果顯示，土霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素加標(biāo)回收率分別為97. 2%、94. 6%、82. 9%，即結(jié)果說明抽檢的臨邑縣雞肉未檢測出四環(huán)素類獸藥殘留。恰印證前期調(diào)研結(jié)果：養(yǎng)殖場在不同品種雞的養(yǎng)殖過程中只使用中藥。綜上，隨著國家對獸藥的監(jiān)管力度越來越大，養(yǎng)殖人員素質(zhì)越來越高，雞肉超標(biāo)事件愈來愈少，人們的食品健康安全也能夠得到更充分的保障。

5、方法的總結(jié)分析

本文采用HLB小柱為固相萃取柱，通過對提取液的選擇、色譜條件的優(yōu)化建立了一種加標(biāo)回收率高、準(zhǔn)確度高的雞肉中3種四環(huán)素類抗生素的檢測分析方法，該方法相對于現(xiàn)有國標(biāo)方法具有基質(zhì)干擾少、適用性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。

四環(huán)素類抗生素種類繁多，具有不穩(wěn)定、流動性強(qiáng)等特點(diǎn)，目前，雖然經(jīng)改良的高效液相色譜法檢測方法己能夠?qū)崿F(xiàn)對四環(huán)素類抗生素的精準(zhǔn)檢測，且選擇性強(qiáng)、分辨率高、假陽性低，但其樣品前處理較復(fù)雜，不適合現(xiàn)場實(shí)時(shí)篩查。相信隨著檢測分析技術(shù)的不斷發(fā)展，未來將有更多檢測手段使其不斷的完善，能夠更加快捷、高效的檢測出雞肉組織中的四環(huán)素類藥物殘留。

參考文獻(xiàn)

[1]孫雷，張?bào)P，劉琪，王樹槐，汪霞，朱永林，豬肉組織中四環(huán)素類藥物殘留檢測一一高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法研究[J].中國獸藥雜志，2008 （02）：27-29.

[2]王聰，鈕正睿，曹進(jìn)，等.4種四環(huán)素類抗生素的電噴霧質(zhì)譜裂解規(guī)律研究[J].中國抗生素雜志，2018，43 （10）：1211 1216.

[3]劉保國.雞肉組織中四環(huán)素類藥物殘留檢測與分析[J].現(xiàn)代畜牧科技，2018 （05）：7+76.

[4]富玥，雞肉中四環(huán)素類抗生素獸藥殘留量檢測[J].食品安全導(dǎo)刊，2018 （12）：79-80.