曾永禎 李軍山 高晗 董璐萌 李雪利 耿彥梅

摘要：為了全面反映瓜蔞配方顆粒所含多種組分，明確瓜蔞配方顆粒HPLC指紋圖譜的測定方法，對10批瓜蔞配方顆粒進行了HPLC指紋圖譜測定及相似度評價。采用HPLC方法，色譜柱為GL Sciences公司InertSustain AQ-C18柱（4.6 nm×250 nm，5 μm），以甲醇-0.1%甲酸水溶液為流動相，梯度洗脫，檢測波長為260 nm，流速為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃，對瓜蔞配方顆粒指紋圖譜測定結(jié)果進行了相似度評價。結(jié)果表明，10批瓜蔞配方顆粒指紋圖譜中呈現(xiàn)16個共有峰，相似度均大于0.960，表明瓜蔞配方顆粒具有良好的一致性;此外，在16個共有峰中指認出腺嘌呤、尿苷2個化學成分。瓜蔞配方顆粒指紋圖譜反映了瓜蔞配方顆粒的多組分面貌，可為瓜蔞配方顆粒的多組分質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：醫(yī)藥工程;瓜蔞配方顆粒;指紋圖譜;高效液相色譜;相似度

中圖分類號：R917文獻標志碼：Adoi： 10.7535/hbgykj.2019yx04011

Abstract：In order to fully reflect the features of various components of Trichosanthis fructus formula granules and clarify the HPLC fingerprint of Trichosanthis fructus formula granules，ten batches of Trichosanthis fructus formula granules are determined by HPLC fingerprint and evaluated for similarity.Using HPLC methed，the chromatographic column is GL Sciences InertSustain AQ-C18 column（4.6 nm×250 nm，5 μm），and taking methanol -0.1% formic acid aqueous solution as mobile phase， gradient elution， detection wavelength 260 nm，the flow rate is 0.8 mL/min，and the column temperature is 25 ℃， and the similarity evaluation of Trichosanthis fructus is carried out with reference to fingerprint.The results show that there are 16 common fingerprint peaks in all fingerprint spectra of 10 batches of Trichosanthis fructus formula granules，and the similarity is greater than 0.960，presenting a good similarity.Besides，in the 16 fingerprint peaks， two of them are Adenine and Uridine.Therefore， the fingerprint of Trichosanthis fructus standard decoction reflects the multi-componernt appearance，and the method has good feasibility， which can provide a reference for the multi-componernt quality control of Trichosanthis fructus formula granules.

Keywords：medical engineering; formula granule of Trichosanthis fructus; fingerprint; HPLC;similarity

瓜蔞為葫蘆科植物栝樓或雙邊栝樓的干燥成熟果實，秋季果實成熟時，連果梗剪下，置通風處陰干而得[1]。其商品藥材分為仁瓜蔞和糖瓜蔞，品質(zhì)以仁瓜蔞為優(yōu)，性寒、味甘、微苦[2-7]，具有清熱滌痰、寬胸散結(jié)、潤燥滑腸等功效，用于肺熱咳嗽、痰濁黃稠、胸痹心痛、結(jié)胸痞滿、腸癰腫痛、大便秘結(jié)等癥的治療[8-12]。

目前，關(guān)于瓜蔞藥材質(zhì)量的研究較多，但有關(guān)指紋圖譜方面的報道相對較少，且大多是針對藥材煎液和飲片的指紋圖譜，未見針對瓜蔞配方顆粒指紋圖譜研究的相關(guān)報道。已有研究表明，瓜蔞含有尿苷、腺嘌呤、胞苷、丙氨酸、胞嘧啶、乙基-D-呋喃葡萄糖苷、槲皮苷等[13-16]多種復(fù)雜成分，對其配方顆粒指紋圖譜第4期曾永禎，等：瓜蔞配方顆粒指紋圖譜研究河北工業(yè)科技第36卷方法的建立帶來了一定的困難。本研究采用高效液相色譜法建立瓜蔞配方顆粒指紋圖譜，以期全面反映瓜蔞配方顆粒的多組分面貌，為其質(zhì)量控制提供參考。

1主要儀器及材料

LC-20AT高效液相色譜儀，日本島津儀器設(shè)備有限公司提供;CPA225D分析天平，賽多利斯公司提供;KH3200E型超聲波清洗器，江蘇昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司提供。

瓜蔞配方顆粒，神威藥業(yè)集團有限公司提供，批號分別為15050611，18072411，18072511，18072611，18072711，18072811，18091631，18092731，19022331，

19022431。

對照品腺嘌呤，批號為110886-201102，中國食品藥品檢定研究院提供;對照品尿苷，批號為887200202，中國食品藥品檢定研究院提供。

甲醇，色譜純，批號為20181115，天津科密歐化學試劑有限公司提供;無水甲酸，批號為20180108，天津科密歐化學試劑有限公司提供;其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1瓜蔞配方顆粒指紋圖譜分析方法

對照品溶液的制備：取腺嘌呤、尿苷對照品適量，精密稱定，以甲醇溶解并定容，制成每1 mL含50 μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本品2.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入70%（體積分數(shù)，下同）甲醇10 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）過濾，取續(xù)濾液，即得。

色譜條件：色譜柱為GL Sciences公司Inert Sustain AQ-C18柱（4.6 nm×250 nm，5 μm）;以甲醇-0.1%甲酸水溶液為流動相，按表1程序進行梯度洗脫，檢測波長為260 nm，流速為0.8 mL/min，柱溫為25 ℃，進樣量為10 μL。

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜峰的保留時間和峰面積。按照上述指紋圖譜條件，對瓜蔞配方顆粒進行指紋圖譜分析，并指認色譜峰，詳見圖1。圖1中1號峰為腺嘌呤，2號峰為尿苷。

2.2方法學考察

2.2.1精密度

取瓜蔞配方顆粒（批號為18092731），按照瓜蔞配方顆粒指紋圖譜分析方法進行指紋圖譜的測定，連續(xù)進樣6次。以腺嘌呤作為對照峰，計算各共有峰的相對保留時間與相對峰面積的RSD值。各共有峰相對保留時間的RSD值<0.48%，相對峰面積的RSD值<1.5%，表明該儀器的精密度良好。

2.2.2重復(fù)性

取瓜蔞配方顆粒（批號為18092731），按照瓜蔞配方顆粒指紋圖譜分析方法分別制備6份供試品溶液，平行測定。以腺嘌呤作為對照峰，計算各共有峰的相對保留時間與相對峰面積的RSD值。各共有峰相對保留時間的RSD值<0.58%，相對峰面積的RSD值<1.8%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.2.3穩(wěn)定性

取瓜蔞配方顆粒（批號為18092731），按照瓜蔞配方顆粒指紋圖譜分析方法進行指紋圖譜測定，分別在0，2，4，6，8，10，12 h進行測定。以腺嘌呤作為對照峰，計算各共有峰的相對保留時間與相對峰面積的RSD值。各共有峰相對保留時間的RSD值<0.48%，相對峰面積的RSD值<2.1%，表明供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3瓜蔞配方顆粒指紋圖譜分析

按照瓜蔞配方顆粒指紋圖譜分析方法，分別制備10批瓜蔞配方顆粒的供試品溶液，進行指紋圖譜分析。

對10批大生產(chǎn)所得瓜蔞配方顆粒進樣分析，最終匹配出16個共有峰，采用中藥色譜指紋圖譜和相似度評價系統(tǒng)，將10批配方顆粒色譜圖導入該軟件，得到10批瓜蔞配方顆粒的指紋圖譜，見圖2。以批號為18092731的瓜蔞配方顆粒作為參照圖譜，時間窗為0.1，采用中位數(shù)法，經(jīng)多點校正自動匹配生成對照圖譜，計算相似度，詳見表2。S1—批號為15050611;S2—批號為18072411;S3—批號為18072511;S4—批號為18072611;S5—批號為18072711; S6—批號為18072811;S7—批號為18091631;S8—批號為19022431;S9—批號為19022331;S10—批號為18092731。

由表2可知，10批瓜蔞配方顆粒的指紋圖譜相似度與對照指紋圖譜的相似度均在0.960以上，表明所建立的指紋圖譜方法可用于瓜蔞配方顆粒的鑒定及其整體質(zhì)量的控制。

3討論

1）采用高效液相色譜法分析了10批瓜蔞配方顆粒樣品，建立了瓜蔞配方顆粒的化學指紋圖譜。結(jié)果表明，各批次瓜蔞配方顆粒的相似度均大于0.960。所建立的指紋圖譜方法可用于瓜蔞配方顆粒的鑒定及其整體質(zhì)量控制，填補了瓜蔞配方顆粒指紋圖譜研究領(lǐng)域的空白。

2）通過對瓜蔞配方顆粒樣品進行全波長掃描，比較了不同波長下色譜圖的峰數(shù)目與分離效果。結(jié)果表明，在260 nm波長下，瓜蔞配方顆粒的峰數(shù)目較多且分離度良好，因此將260 nm作為瓜蔞配方顆粒指紋圖譜的檢測波長。

3）分別考察了采用50%甲醇、甲醇、乙醇、70%甲醇不同溶劑進行提取，超聲、回流等不同提取方法，以及不同色譜柱對成分分離度的影響。結(jié)果表明，以70%甲醇超聲40 min提取配方顆粒，采用InertSustain AQ-C18色譜柱分離時得到的分離度最高。

4）對瓜蔞中含有的多種核苷類成分定位出腺嘌呤、尿苷2個共有峰，黃芩苷、木樨草苷、3，29-二苯甲?；闃侨嗜肌Ⅴに氐瘸煞忠蚝枯^低，沒有檢測到，故未進行定位。本研究中圖譜出峰較多，對其他峰的化學物質(zhì)確認尚需作進一步的研究。

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