姚莉梅 石磊 李海波 尚昆 朱青青 周光榮 江龍

摘要：對貴州省梵凈山自然保護區(qū)進行叢枝菌根真菌資源調(diào)查時，從植物根際土壤中分離鑒定出三個中國新記錄種，分別為網(wǎng)紋雙型囊霉Ambispora reticulata、光亮多樣孢囊霉Diversispora clara和高山隔球囊霉Septoglomus altomontanum，對其進行了詳細的形態(tài)描述和圖示。

關(guān)鍵詞：梵凈山;叢枝菌根真菌;雙型囊霉屬;多樣孢囊霉屬;隔球囊霉屬

中圖分類號，0939.5支獻標識碼，A

叢枝菌根（Arbuscular mvcorrhizal，AM）真菌是屬于球囊菌門（G10meromvcota）中的一類營養(yǎng)共生真菌，可與大多數(shù)植物形成共生體。按照ht-tp：//www，amf-phylogerly，com網(wǎng)站上整理公布的數(shù)據(jù)，目前在世界范圍內(nèi)發(fā)表的AM真菌共有4目11科36屬334種，中國記錄近兩百種。梵凈山國家自然保護區(qū)位于貴州省銅仁市，是武陵山脈主峰，1992年被世界自然保護聯(lián)盟（IUCN）列為具有全球意義的A級保護區(qū)，2018年被列人“世界自然遺產(chǎn)名錄”。全區(qū)生態(tài)系統(tǒng)保存完好，基本沒有人為擾動，是當今地球同緯度生物多樣性保存最為完好的地區(qū)，擁有高等植物303科1266屬3728種，是研究AM真菌物種多樣性的極佳樣地。目前僅陶光耀與袁騰進行了初步調(diào)查，鑒定報道的AM真菌種類12屬42種，接近國內(nèi)AM真菌物種數(shù)量的1/4.說明該保護區(qū)AM真菌種類十分豐富。因此開展梵凈山自然保護區(qū)土壤中AM真菌的調(diào)查與研究，在豐富我國叢枝菌根真菌資源和開發(fā)應(yīng)用方面有重要意義。通過對梵凈山植物根際土壤AM真菌的物種鑒定，我們發(fā)現(xiàn)了三個國內(nèi)新記錄種，現(xiàn)予報道。

1材料與方法

1.1采集土樣

采樣地位于貴州省銅仁市梵凈山自然保護區(qū)，采集土樣時，除去土壤表面約2cm的腐殖土與雜質(zhì)，采集距離地表約5～30cm土層土壤，約1kg裝入采樣袋中，自然風干后放4℃冰箱中進行保存以備用。

1.2分離鑒定

土壤AM真菌孢子采用濕篩傾注-蔗糖離心法進行分離。在體視顯微鏡下對分離到的孢子進行其大小、形狀、顏色及連孢菌絲進行初步觀察及分類，再將孢子洗凈后吸取到載玻片上，置于生物顯微鏡（Olympus Bx53）和攝影系統(tǒng)（OlympusDP70）下，對孢子大小、形狀、顏色、連孢菌絲、孢子壁及發(fā)芽壁的層數(shù)和厚度、孢子壓破后的內(nèi)含物及在Melzer’s試劑中的染色情況、孢子表面有無紋飾或附著物等特征進行詳細觀察、記錄，并照相。再依據(jù)http：//www，amf-phvlogeny，com網(wǎng)站、國際叢枝菌根真菌保藏中心（INvAM）（http：//invam，caf，wvu，edu）、和http：//www，zor，zut，edu，pl/Glomer-omvcota等網(wǎng)站提供的種屬描述及其相應(yīng)的圖片，結(jié)合貴州大學AM真菌保藏資源，進行屬種鑒定，中文學名參見王幼珊等（2017）球囊菌門叢枝菌根真菌最新分類系統(tǒng)菌種名錄。

2結(jié)果與討論

經(jīng)孢子形態(tài)學鑒定，從貴州省銅仁市梵凈山自然保護區(qū)植物根際土壤中共分離、鑒定出 AM真菌中國新記錄種3種，雙型囊霉屬（4mbisporn）、多樣孢囊霉屬（Diwersispora）、隔球囊霉屬（Septoglomus）各1種。下面是詳細描述和圖示。

2.1 網(wǎng)紋雙型囊霉Ambispora reticulata Oehl&Sieverd（2012），（圖1）

孢子果未見。孢子在土壤中單生，幼嫩孢子白色，成熟孢子黃棕色，球形至近球形，大小89～140um。孢子壁有2層，L1為透明至淡黃色，厚1um左右，隨著孢子成熟逐漸消失，成熟孢子幾乎不可見;L2為無色透明至淺黃色，厚2～5um，在Melz-er’s試劑中發(fā)生反應(yīng)，呈現(xiàn)紫紅色。孢子壁兩層：GWl兩層緊貼，均為無色透明膜狀壁，GW1-L1半柔性，厚1.1～3.um，表面具有特殊的網(wǎng)狀紋飾，有由脊包圍的不規(guī)則形狀的凹坑，形狀為三邊形到八邊形，寬3.2～9.6um，深0.5～2.um;GW1-L2光滑，厚1um左右，在Melzer’s試劑中不發(fā)生反應(yīng);GW2雙層：GW2-L1為透明剛性壁，厚1.3～3.5um，GW2-L2透明，厚度很薄，很難觀察到，發(fā)芽壁在Melzer’s試劑中無反應(yīng)。孢子梗：由孢子壁和發(fā)芽壁的外層延伸形成，在孢子基部寬6～16um×4～17um，GW1-L1的網(wǎng)狀紋飾延伸到孢子梗呈波浪狀紋飾。在Melzer’s試劑中不反應(yīng)。

Fritz Oehl（2010）。在瑞士阿爾卑斯山和亞高山草原上首次發(fā)現(xiàn)網(wǎng)紋雙型囊霉，觀察到第一層發(fā)芽壁上有特殊的網(wǎng)狀紋飾結(jié)構(gòu)，是區(qū)分雙型囊霉屬其它物種的識別特征。我們從梵凈山植物根際土壤中分離得到的孢子經(jīng)過觀察，在第一層發(fā)芽壁上可明顯觀察到該種的識別特征一網(wǎng)紋紋飾結(jié)構(gòu)（圖1-1.4.7～12），且紋飾的形狀（圖1-4）、寬度與深度（圖1-9.11～12）也與該種識別特征一致，此外孢子顏色、大小及其與Melzer’S試劑的反應(yīng)結(jié)果（圖1）與Fritz Oehl的描述一致，因此確定為網(wǎng)紋雙型囊霉Ambisporareticulata。

標本號：Inl20181025FJ-5、Fas20181025FJ-41、Fas20181025FJ-48、Rhs20181025FJ-108、Rhg20181025FJ-112、Rhs20181025FJ-113、Rhr20181025FJ-118、Inb20181025FJ-128、Int20190725FJ-8、hnst，20190725FJ-13、Cajt20190725FJ-25、Fas20190725FJ-31、Inl20190725FJ-41、Que20190725FJ-53、Phy-20190725FJ-81.孢子于2018年10月從貴州省梵凈山自然保護區(qū)闊葉箬竹Indocalamus latifolius、箭竹Fargesia spathacea、貴州杜鵑Rhododendronguizhouense、大鐘杜鵑Rhododendron ririei、巴山箬竹Indocalamus bashanensis，以及2019年7月從黃金鳳Impatiens siculifer、巴東櫟Ouercus engleriana、山茶Camellia japonica、箭竹Fargesia spathacea、毛竹Phyllostachys edulis、箬竹Indocalamus tessellatus、闊葉箬竹Indocalamus latifolius根際土壤中分離得到。

2.2光亮多樣孢囊霉Diversispora clara Oehl，B，Estrada，G，A，Silva&Palenz，（2012），（圖2）

孢子果未見。孢子在土壤中單生，透明至奶白色，球形（63～112um）或近球形（67～127x63～122um）。孢子壁三層：L1透明，厚度<1um，在成熟過程中逐漸消逝，因此在成熟孢子中經(jīng)常不存在：L2層狀壁，明亮至較少的乳白色，厚度3～5.3um：L3透明，厚1um左右，通常與L2緊密粘附，不易觀察。L1和L2在Melzer’S試劑中被染色為黃色，孢子細胞的內(nèi)容物為油狀液滴，在Melzer’S試劑中被染成比細胞壁更深的黃色。孢子具有亮白色連孢菌絲，常單生，形狀為圓柱形，空隙少見打開，常在基部或離基部較近處由L2和L3的隔膜封閉。

Beatriz Estrada（2011）等人從西班牙10種金盞花植物根際土壤中首次發(fā)現(xiàn)光亮多樣孢囊霉Di-versispora clara，該種孢子顏色較該屬其他孢子透明，孢子壁較薄，連孢菌絲網(wǎng)柱形，且在孢子基部或離孢子基部較近的地方有隔膜封閉。我們分離到的孢子顏色透明（圖2-2～4）、孢子壁較?。▓D2-4～8），連孢菌絲網(wǎng)柱形且在離孢子基部較近處有隔（圖2-3），孢子形態(tài)特征與Beatriz Estrada等人描述一致，由此確定為光亮多樣孢囊霉Diversispora clara。

標本號：Inl20181025FJ-5、Fas20190725FJ-38、Int20190725FJ-45。孢子于2018年10月從闊葉箬竹Indocalamus latifoldius以及2019年7月從貴州省梵凈山自然保護區(qū)箬竹Indocalamus tessellatus和箭竹Fargesia spathacea根際土壤中分離得到。

2.3 高山隔球囊霉Septoglomus altmontanumPalenz，Oehl，Azc6n-Aguilar&G，A，Silva（2013），（圖3）

孢子果未見。土壤中單生，深紅棕色至紅黑色，形狀橢網(wǎng)形至近球形，大小130～190X 121～167um。孢子壁兩層：L1為半透明至暗黃色壁，光滑，厚2.2～3.7um：L2為深紅棕色至紅黑色的層狀壁，厚4.0～7.6um，兩層孢子壁在Melzer’S試劑中不發(fā)生反應(yīng)。連孢菌絲顏色稍淺于孢子顏色，為暗黃色至紅色，形狀為圓柱形，偶爾為漏斗形，常發(fā)生彎曲;常在孢子基座處達到最寬19～31um，連孔常被L2延伸形成隔。連孢菌絲與Melzer’S試劑中也不發(fā)生反應(yīng)。

Javier Palenzuela（2013）等人在對麥冬根際土壤叢枝菌根真菌進行調(diào)查時，首次報道了高山隔球囊霉Septoglomus altomontanum。該種孢子較大，顏色較深，尤其是連孢菌絲較寬，最寬處可達35um，是高山隔球囊霉Septoglomus altomontanum與該屬其他種區(qū)分的主要識別特征。我們分離的孢子連孢菌絲結(jié)構(gòu)最寬處可達31um（圖3-7～8），在孢子顏色、形狀上都與Javier Palenzuela等人的描述一致（圖3），因此確定為高山隔球囊霉Septoglo-rous altomontanum。

標本號：Irt20181025FJ-38、Fas20181025FJ-60、Woj20190725FJ-72、Phh20190725FJ-28、Hys-20190725FJ-30、孢子于2018年10月從貴州省梵凈山自然保護區(qū)鳶尾Iris tectorum、箭竹Fargesiaspathacea，以及2019年7月從狗脊蕨Woodwardiajaponica、臘蓮繡球Hydrangea strigosa、毛竹Phyl-lostachys edulis根際土壤中分離獲得。

梵凈山國家級自然保護區(qū)原生生態(tài)系統(tǒng)保存完好，因其獨特的氣候及地理位置，具有梵凈火絨草、梵凈山冠唇花、梵凈山鎧蘭等許多特有的生物物種，梵凈山AM真菌資源也十分豐富，目前我們已經(jīng)在該保護區(qū)共分離鑒定出13屬58種AM真菌，占全球AM真菌種質(zhì)資源17%，占國內(nèi)29%。此次三個新記錄種的發(fā)現(xiàn)，進一步說明梵凈山自然保護區(qū)AM真菌的物種多樣性豐富。