呂志陽(yáng) 陳璟 汪潔 陳靜 顧雪梅 魏穎 楊雨微

摘 ? 要：采用擠出滾圓法制備山楂葉提取物微丸，建立測(cè)定微丸提取物中牡荊素-2-O-鼠李糖苷含量的方法，評(píng)價(jià)微丸的溶出情況。采用固定微丸的制備工藝，以粉體學(xué)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)化載藥量、水溶性載體材料、潤(rùn)濕劑種類(lèi)及用量等微丸的處方，采用高效液相法測(cè)定山楂葉提取物中牡荊素-2-O-鼠李糖苷的含量。微丸處方為山楂葉提取物∶微晶纖維素∶乳糖∶潤(rùn)濕劑（60%乙醇）質(zhì)量比為10∶12∶3∶8;色譜條件：流動(dòng)相四氫呋喃-乙酸-水-甲醇-乙腈（38∶4∶152∶3∶3），檢測(cè)波長(zhǎng)：330 mm，流速為1.0 mL/min，在蒸餾水中30 min時(shí)牡荊素-2-O-鼠李糖苷的溶出量達(dá)95.2%。所得山楂葉提取物微丸質(zhì)量好，牡荊素-2-O-鼠李糖苷的含量測(cè)定方法實(shí)用性強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：山楂葉提取物;微丸;牡荊素-2-O-鼠李糖苷;溶出

微丸作為多單元型給藥系統(tǒng)，一個(gè)劑量往往由分散的多個(gè)單元組成?？裳b入膠囊、壓制成片劑，或制成其他的制劑，易于制成緩控釋、腸溶等不同類(lèi)型的微丸[1]。微丸由于其粒徑小，可以懸浮在胃體的消化液中，在胃中滯留的時(shí)間長(zhǎng)，生物利用度高，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)易、具有較大的表面積、流動(dòng)性好等工藝學(xué)優(yōu)點(diǎn)[2]。擠出滾圓法是目前應(yīng)用最廣泛的制丸法， 該方法操作簡(jiǎn)便，成品收率高，制得的微丸內(nèi)藥物或其他活性成分的含量均勻[3]。

山楂葉提取物是從山楂樹(shù)的葉子中提取出來(lái)的黃酮類(lèi)物質(zhì)，如牡荊素、金絲桃苷、槲皮素、蘆丁等，具有降低血脂、降壓、增加冠脈流量，耐缺氧等作用[4]。本研究應(yīng)用擠出滾圓法制備山楂葉提取物微丸，以微丸的粒徑、圓整度、脆碎度等粉體學(xué)性質(zhì)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)合微丸中主要成分牡荊素-2-O-鼠李糖苷溶出情況評(píng)價(jià)制備工藝，為山楂葉提取物微丸的制劑工藝研究及產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)提供了可靠的依據(jù)。

1 ? ?儀器與試藥

1.1 ?儀器

JBZ-300型多功能微丸擠出滾圓機(jī)（遼寧醫(yī)新聯(lián)）;RCZ-IB型智能溶出試驗(yàn)儀（天大天發(fā)科技有限公司）;Agilent 1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）;AS-20500A超聲波清洗器（奧特賽恩斯儀器有限公司）;FA1204B萬(wàn)分之一電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）;TGL-18C-C型高速臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)）;CJY-300B型片劑脆碎度測(cè)試儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）。

1.2 ?試藥

山楂葉提取物（質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98%，SQSZ20190120，西安圣青生物科技有限公司），牡荊素-2-O-鼠李糖苷對(duì)照品（99%，PCS-181022，成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司），乳糖（20160815，中國(guó)上?；菖d生化試劑有限公司），可溶性淀粉（43964124U0，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司），微晶纖維素（Microcrystalline cellulose，MCC）（20150625，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），甘露醇（20160912，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），四氫呋喃、無(wú)水乙醇、乙腈（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），乙酸（永華化學(xué)科技有限公司），甲醇（山東禹王工業(yè)有限公司化學(xué)分公司）。

2 ? ?方法與結(jié)果

2.1 ?山楂葉提取物微丸的制備

固定擠出滾圓微丸的制備工藝，選取微丸粉體學(xué)指標(biāo)包括：微丸得率（20～30 目間微丸的比例）、脆碎度、圓整度、堆密度等作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，分別優(yōu)選微丸的載藥量、水溶性輔料的品種、潤(rùn)濕劑的種類(lèi)及用量等。

2.2.1 ?山楂葉提取物微丸載藥量的考察

山楂葉提取物黏性較大，用量直接影響成丸的優(yōu)劣，MCC因其適宜的良好的黏合性質(zhì)和流體學(xué)性質(zhì)，可賦予濕物料足夠的凝聚性，具較大的高內(nèi)部孔隙和比表面積，可以保留和吸收大量的水分，有助于擠出，而通過(guò)控制塑性材料中水分遷移，可阻止擠出和滾圓過(guò)程中相分離的發(fā)生[5]。由其制得的微丸圓整度好、堆密度大、硬度和強(qiáng)度更高，極少出現(xiàn)崩塌現(xiàn)象，應(yīng)用范圍非常廣泛[6]。所以本實(shí)驗(yàn)以MCC為主要輔料，設(shè)置載藥量分別為10%、20%、30%、40%、50%、60%，以微丸載藥量高、成丸性能佳為篩選目標(biāo)。加入適量的潤(rùn)濕劑（水）制備軟材，并制備微丸，不同的載藥量微丸粉體學(xué)性質(zhì)結(jié)果，如表1所示。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，載藥量對(duì)微丸的影響很大，隨著載藥量不斷增大，微丸粉體學(xué)性質(zhì)中得率降低，載藥量加大，圓整度增加，同時(shí)粒徑在20～30 目間微丸的數(shù)量在減小，堆密度變化不大。脆碎度先是降低，當(dāng)載藥量達(dá)到30%時(shí)，脆碎度又升高。但是總體變化并不大。由此可以看出，載藥量對(duì)于擠出滾圓法制備微丸的影響極為顯著。綜合載藥量和微丸粉體學(xué)性質(zhì)對(duì)成丸效果采用加權(quán)綜合評(píng)分原則?？偡諷=載藥量×100+（得率得分-平面臨界角得分），評(píng)分越高，效果越好，當(dāng)載藥量為40%時(shí)各指標(biāo)綜合評(píng)分為98.6，明顯高于其他載藥量下的得分，故本實(shí)驗(yàn)選擇最優(yōu)處方的載藥量為40%，作為制備工藝研究的處方比率。評(píng)分結(jié)果如表2所示。

2.2.1 ?山楂葉提取物微丸水溶性輔料的選擇

按照上述制備工藝，選取微丸的載藥量為40%，分別以10%的乳糖、可溶性淀粉、PVP、甘露醇作為水溶性輔料[6]，考察微丸的得率（20～30 目間微丸的比例）、圓整度、堆密度和脆碎度等粉體學(xué)性質(zhì)，同時(shí)結(jié)合微丸中牡荊素-2-O-鼠李糖苷的溶出情況做出綜合的評(píng)價(jià)，微丸粉體學(xué)性質(zhì)結(jié)果如表3所示。

添加水溶性輔料后微丸的得率均達(dá)到70%以上，其中乳糖組得率最高為80.2%;乳糖的圓整度在這幾種水溶性輔料中也是最佳的，堆密度和脆碎度變化不明顯。主要成分的溶出度研究發(fā)現(xiàn)，加入聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinyl Pyrrolidone，PVP）和乳糖后藥物釋放的速度有所提高，30 min牡荊素-2-O-鼠李糖苷累積釋藥量有所增加，30 min時(shí)二者均達(dá)90%以上，但PVP的加入使20～30 目的微丸得率明顯下降，甘露醇的加入使得藥物更加黏稠，制成的微丸成球性能差，得率降低，而乳糖的使用對(duì)微丸得率無(wú)明顯影響，故確定10%乳糖為山楂葉提取物微丸處方中的水溶性輔料。

2.1.3 ?山楂葉提取物微丸潤(rùn)濕劑的選擇

擠出滾圓法制備微丸常用的潤(rùn)濕劑為水或乙醇與水的混合物，山楂葉提取物微丸粉末具有一定的黏性，所以選用蒸餾水或一定比例的乙醇為潤(rùn)濕劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別以水、20%、40%、60%、80%乙醇溶液作為潤(rùn)濕劑，其中，山楂葉提取物∶MCC∶乳糖∶水（乙醇與水的混合物）質(zhì)量比為10∶12∶3∶8（載藥量為40%）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別加入適量的上述潤(rùn)濕劑制備軟材，制備微丸，比較微丸的各項(xiàng)粉體學(xué)性質(zhì)，結(jié)果如表4所示。

結(jié)果表明，當(dāng)使用蒸餾水時(shí)，混合物過(guò)黏，堵塞模孔，微丸的得率低，隨著乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的提高，微丸的得率有所升高，乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)的不斷提高，所得微丸成長(zhǎng)柱狀較多，微丸的堆密度略有下降，圓整度顯著降低，而脆碎度明顯增加，小于30 目的微丸量明顯增多。當(dāng)使用80%乙醇時(shí)，微丸的得率降低，形成的微丸成球性能差，故以60%乙醇作為潤(rùn)濕劑時(shí)，微丸圓整度最好，得率最高，微丸成球性能好，故本實(shí)驗(yàn)選擇60%乙醇為潤(rùn)濕劑。

經(jīng)過(guò)對(duì)微丸載藥量、水溶性輔料及潤(rùn)濕劑的處方單因素考察后，確定最佳處方如下：山楂葉提取物∶MCC∶乳糖∶潤(rùn)濕劑（60%乙醇）質(zhì)量比為10∶12∶3∶8，所制備的山楂葉提取物微丸質(zhì)量較好。

2.2 ?山楂葉提取物微丸中牡荊素-2-O-鼠李糖苷的HPLC含量測(cè)定方法

2.2.1 ?色譜條件

色譜柱：Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱;流動(dòng)相：四氫呋喃-乙酸-水-甲醇-乙腈（38∶4∶152∶3∶3），檢測(cè)波長(zhǎng)：330 mm，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL，柱溫30 ℃。此色譜條件下，供試品中牡荊素-2-O-鼠李糖苷能得到較好的分離。

2.2.2 ?對(duì)照品溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備：取牡荊素-2-O-鼠李糖苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置于100 mL容量瓶中，60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，得到含牡荊素-2-O-鼠李糖苷為95.46 μg/mL。

2.2.3 ?標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

精密吸取牡荊素-2-O-鼠李糖苷對(duì)照品溶液0.1、0.25、0.5、0.75、1.0、1.25 mL，置于10 mL容量瓶中，加入60%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成質(zhì)量濃度分別為0.010、0.025、0.050、0.075、0.100、0.125 mg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制曲線(xiàn)經(jīng)計(jì)算得色譜峰面積與進(jìn)樣量之間的回歸方程為：Y=692.52X+20.477，r=0.999 6。結(jié)果表明，牡荊素-2-O-鼠李糖苷在0.10～1.25 mL范圍內(nèi)與峰面積存在良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.3 ?山楂葉提取物微丸中牡荊素-2-O-鼠李糖苷的溶出測(cè)定

考察樣品在蒸餾水中的溶出情況，選擇轉(zhuǎn)籃法測(cè)定，溶出介質(zhì)：900 mL蒸餾水，溫度：（37±0.50）℃，轉(zhuǎn)速：100 r/min。稱(chēng)取3份山楂葉提取物微丸適量，分別置于溶出杯中，于30 min取樣，每次5 mL，取樣后立即以0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，棄去初濾液，留續(xù)濾液作為供試品溶液，同時(shí)補(bǔ)加新鮮溶出介質(zhì)5 mL，測(cè)定其中的牡荊素-2-O-鼠李糖苷的含量，計(jì)算藥物的溶出量。結(jié)果表明，山楂葉提取物微丸中牡荊素-2-O-鼠李糖苷在蒸餾水介質(zhì)中30 min時(shí)累積溶出達(dá)95.20%，溶出效果較好，符合速釋制劑要求[7]。

3 ? ?結(jié)語(yǔ)

微丸的粉體學(xué)性質(zhì)可以用得率、圓整度、堆密度、脆碎度等多指標(biāo)考察，但在整個(gè)處方和工藝因素的選擇過(guò)程中，微丸的堆密度、脆碎度兩項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)顯著性差別，堆密度均保持在0.87 g/mL左右，而脆碎度波動(dòng)范圍也較小，故選取得率和圓整度作為評(píng)價(jià)微丸成型性的最主要的考察指標(biāo)，進(jìn)而優(yōu)化微丸處方。主要成分牡荊素-2-O-鼠李糖苷在30 min時(shí)溶出達(dá)到95%，可滿(mǎn)足速釋微丸的要求。山楂葉提取物中成分較多，將能夠反映該中藥主要藥效的有效成分作為指標(biāo)對(duì)其進(jìn)行控制。以山楂葉提取物微丸中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高的牡荊素-2-O-鼠李糖苷為指標(biāo)性成分，確定以四氫呋喃-乙酸-水-甲醇-乙腈（38∶4∶152∶3∶3）梯度洗脫對(duì)山楂葉提取物中牡荊素-2-O-鼠李糖苷分離效果較好。

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