鄧智超 李佳 宋營虎

[關鍵詞]三七;蜂膠;免疫;小鼠

蜂膠是由蜜蜂從植物幼芽、樹皮與樹干裂縫上采集來的樹脂，并混入它的上顎腺分泌物和蜂蠟等加工而成的具有芳香氣味的膠狀固體物。蜂膠的組成非常復雜，已知成分達300多種，主要生物活性物質有黃酮類、萜烯類和咖啡酸類化合物等，是一種具有抗腫瘤、抗病原微生物、抗氧化、抗炎、免疫調節(jié)等生理活性的天然物質[1]。三七為血加科植物干燥的根，止血化瘀，化瘀而不傷氣血[2]。三七粉具有多種功能，如免疫調節(jié)、抗衰老、改善記憶、抗疲勞等作用。三七粉可雙向調節(jié)人體機能，增強機體的應激能力和提高機體的免疫能力，是療補功能兼?zhèn)涞乃幨惩粗参锼嶽3]。

本實驗研究比較二者單獨使用及配伍對小鼠免疫的影響。

1 材料與方法

1.1藥物 三七由亳州天宇生物科技有限公司提供，產(chǎn)地云南;蜂膠由江蘇江大源生態(tài)生物科技有限公司提供。三七蜂膠粉有三七、蜂膠分別粉碎后，以2.5：1比例混合制成。

1.2 動物 SPF級昆明種雌性小鼠，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供，體重為18.0～22.0g，實驗動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（滬）2013-0016。

1.3儀器 T-1000型電子天平（美國雙杰）、JA2003型電子天平（上海菁海）、離心機、二氧化碳培養(yǎng)箱（日本Sanyo）、恒溫水浴鍋（鞏義予華）、酶標儀（美國Molecular Devices）、顯微鏡（日本olympus）等。

1.4動物分組與給藥方法 試驗動物隨機分為5組，每組50只，分別進行;小鼠巨噬細胞碳廓清試驗;遲發(fā)型變態(tài)反應試驗;臟體比值、抗體生成細胞數(shù)測定;ConA誘導小鼠淋巴細胞轉化實驗、NK細胞活測定。5組再隨機分為三七組、蜂膠組、三七蜂膠低劑量組、三七蜂膠高劑量組及對照組。三七組小鼠灌胃三七0.2g/kg?BW，蜂膠組小鼠灌胃蜂膠0.08g/kg?BW，三七蜂膠低劑量組灌胃三七蜂膠粉0.14g/kg?BW、三七蜂膠高劑量組灌胃三七蜂膠粉0.28g/kg?BW，對照組灌胃去離子水。灌胃體積0.02ml/g BW，對照組給予等體積蒸餾水，連續(xù)灌胃30天后。

1.5實驗方法：按照《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》2003版“增強免疫功能實驗”進行免疫實驗及相關指標檢測。

1.6 統(tǒng)計學方法 先對數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗，若方差齊，采用單因素方差分析進行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett-t法進行多個劑量組與一個對照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則對原始數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D換，滿足方差齊性檢驗后，用轉換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計;若變量轉換后仍未達到方差齊性，則改用秩和檢驗，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的Tamhane’s ?T2檢驗進行兩兩比較，檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 對小鼠體重的影響 各個試驗小組各劑量組小鼠試驗初期、試驗中期、試驗末體重及實驗期間體重增長與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.2 對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響三七復合物各劑量組對小鼠脾臟/體重比值和胸腺/體重比值與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1

2.4對小鼠抗體生成細胞數(shù)的影響三七組、蜂膠組和三七蜂膠低劑量組小鼠抗體生成細胞數(shù)，與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（表2，P>0.05）。三七蜂膠高劑量組小鼠抗體生成細胞數(shù)增加，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（表2，P<0.05）。

3.6對小鼠NK細胞活性的影響三七組、三七蜂膠低劑量組小鼠NK細胞活性，與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（表3，P>0.05）。蜂膠組、三七蜂膠高劑量組小鼠NK細胞活性顯著增大，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（表3，P<0.05）。

機體的免疫系統(tǒng)是能識別并清除從外環(huán)境中入侵的病原體和內(nèi)環(huán)境中由于各種因素產(chǎn)生的腫瘤細胞，主要包括體液免疫、細胞免疫以及非特異性免疫。其中體液免疫由抗體介導，抗體產(chǎn)生量體現(xiàn)了體液免疫功能的強弱[4]，此外抗體細胞生成數(shù)是衡量機體體液免疫功能的重要指標。DTH和抗體生成能力這 2個指標相結合，可用來準確評價一般藥物的免疫藥理活性[5]。細胞免疫由T細胞介導，經(jīng)其自身分化為效應細胞后執(zhí)行免疫功能，本試驗通過ConA誘導小鼠T淋巴細胞轉化試驗以及利用SBC可與腹壁皮膚蛋白結合成抗原，并且刺激T細胞增殖及激活，由此驗證三七蜂膠混合粉對T細胞的影響[6]。非特異性免疫又稱固有免疫，是機體遇到病原體后的第一道防線，執(zhí)行非特異性免疫的細胞包括具有吞噬能力的巨噬細胞、不受MHC限制的自然殺傷細胞（NK細胞） 等。其中巨噬細胞吞噬能力是衡量機體非特異性免疫功能的重要標志之一，本試驗通過小鼠碳粒廓清試驗、NK細胞測判斷三七蜂膠混合粉對非特異性免疫的調節(jié)作用進行評估。

蜂膠作為天然免疫刺激劑， 能強化免疫系統(tǒng)， 增強免疫細胞的活力。對免疫系統(tǒng)的中心器官胸腺， 蜂膠可促進產(chǎn)生大量T細胞。蜂膠能促進脾臟產(chǎn)生大量淋巴細胞，有豐富的B細胞，可分泌特殊性抗體;對骨髓、淋巴結等整個系統(tǒng)產(chǎn)生有益的影響[7]。三七粉可明顯增強免疫功能低下小鼠的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能，明顯增強免疫功能低下小鼠的遲發(fā)性超敏反應，顯著提高免疫功能低下小鼠血清溶血素的生成[3]。本實驗結果顯示，三七組小鼠單核-巨噬細胞碳廓清吞噬指數(shù)、NK細胞活性顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;蜂膠組小鼠足趾腫脹度、巨噬細胞碳廓清吞噬指數(shù)、NK細胞活性顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;三七蜂膠低劑量組小鼠巨噬細胞碳廓清吞噬指數(shù)顯著增大、三七蜂膠高劑量組小鼠小鼠足趾腫脹度、抗體生成細胞數(shù)、巨噬細胞碳廓清吞噬指數(shù)、NK細胞活性均顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。實驗結果與以上文獻相似。說明三七、蜂膠均有一定的增強免疫作用，三七蜂膠混合粉效果更明顯，且高劑量組優(yōu)于低劑量組，分析原因可能是兩者具有協(xié)同作用。

參考文獻

1.王玉芬. 蜂膠的研究進展[J]. 河北醫(yī)藥， 2002，24（3）：227-228

2.趙鵬，李彬，等.三七皂甙對小鼠免疫功能影響的實驗研究[J].中國熱帶醫(yī).2004 年8月，4（4）：522-524

3.劉成明，王麗，寧俞媛，等.三七粉對小鼠免疫調節(jié)功能的影響.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥.2015年12月，11（23）：7-8

4.蘆愛芳.淺談免疫力[J]. 健康必讀旬刊，2012（9） ： 538～538

5.王陽，趙飛.測定魚油中EPA和DHA的前處理方法比對研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2016，26（ 18） ： 2624～2627

6.沈映君.中醫(yī)藥學高級叢書 中藥藥理學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000： 92.

7.張其康，吳珍紅，繆曉青，等. 蜂膠囊對巨噬細胞吞噬能力的影響及其急性毒理.福建農(nóng)林大學學報 （自然科學版 ）， 2003， 32 （ 5）： 500- 2