李清清 張繼芬

摘? ?要：建立同時(shí)測(cè)定冠心寧中主要水溶性和難溶性藥效物質(zhì)的HPLC測(cè)定方法。采用HPLC同時(shí)測(cè)定丹參素、藁本內(nèi)酯、丹參酮IIA 等14種成分的含量。色譜條件可同時(shí)測(cè)定上述14種成分，其方法學(xué)驗(yàn)證符合藥典要求。冠心寧水煎液只可檢測(cè)到丹參素等8種成分，醇提液可檢測(cè)到含水難溶性和水溶性的14種成分。建立的測(cè)定方法簡(jiǎn)便、靈敏，適用于冠心寧的體外質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：冠心寧;HPLC;含量測(cè)定

冠心寧收載于《部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》（中藥成方制劑第17冊(cè)），由川芎、丹參兩味中藥組成，具有活血化瘀、通脈養(yǎng)心功效[1]，臨床用于冠心病、心絞痛治療。已有川芎、丹參藥材指紋圖譜的研究報(bào)道[2-5]，但均針對(duì)單味藥材，尚無(wú)同時(shí)定量分析川芎、丹參藥中各成分的研究。本研究以冠心寧為研究對(duì)象，建立同時(shí)測(cè)定冠心寧中14種成分的HPLC測(cè)定方法，以期為冠心寧的深入研究提供參考。

1? ? 儀器與材料

AB135-S電子天平（梅特勒·托利多儀器有限公司）;LC-20AD 高效液相色譜系統(tǒng)（島津公司）;RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）;CoolSafe 110-4 Pro真空冷凍干燥機(jī)（丹麥LaboGene）。

川芎、丹參飲片（重慶慧遠(yuǎn)藥業(yè)有限公司）;丹參素（批號(hào)：KJ0622CA14）、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸 B、丁烯基苯酞、丹參酮I、隱丹參酮對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公司），純度均大于98%;洋川芎內(nèi)酯 H、洋川芎內(nèi)酯 A、洋川芎內(nèi)酯 I、藁本內(nèi)酯對(duì)照品（成都瑞芬思生物科技有限公司），純度均大于98%;川芎嗪對(duì)照品、阿魏酸對(duì)照品（成都克洛瑪生物科技有限公司），純度均大于98%;丹參酮ⅡA對(duì)照品（成都曼思特生物科技有限公司，純度大于98%）;冠心寧注射液（山西振東泰盛制藥有限公司，批號(hào)：1712141）;冠心寧片（正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1807002）;乙醇（重慶川東化工有限公司）;甲醇（色譜純，Adamas公司）;甲酸（色譜純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）;其余試劑均為分析純。

2? ? 方法與結(jié)果

2.1? 供試品溶液的制備

分別稱取川芎、丹參粉末（過(guò)40目篩）各5 g，加85%乙醇100 mL，60 ℃回流提取兩次，每次1 h，合并藥液，60 ℃減壓回收乙醇后冷凍干燥，即得浸膏。取浸膏約0.1 g，加甲醇超聲溶解后定容至10 mL，待測(cè)。

2.2? 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取適量丹參素等14種對(duì)照品，丹參素純水溶解并定容，丹參酮I氯仿溶解并定容，其余對(duì)照品用甲醇溶解并定容，制得各對(duì)照品貯備液。精密吸取各對(duì)照品貯備液0.1 mL，甲醇定容至2 mL，得混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.3? 色譜條件

色譜柱：Symmetry C18（4.6×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相：0.1%甲酸-甲醇;梯度洗脫：0～22 min，25%～36%甲醇;22～35 min，36%～60%甲醇;35～45 min，60%～70%甲醇;45～55 min，70%～85%甲醇;55～65 min，85%甲醇;65～70 min，85%～25%甲醇;流速：1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm;柱溫：30 ℃。

2.4? 專屬性

取陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行分析，記錄色譜圖。由圖1冠心寧的HPLC可知，在該色譜條件下各成分分離良好，陰性對(duì)照溶液不干擾測(cè)定。

2.5? 線性與范圍

取混合對(duì)照品溶液，依次稀釋4倍，得系列不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液。將各對(duì)照品溶液按“2.3”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析，記錄各峰面積。以對(duì)照品峰面積（y）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程和線性范圍如表1所示。結(jié)果表明，各對(duì)照品在各質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6? 儀器精密度

取同一供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，每天進(jìn)樣3次，連續(xù)進(jìn)樣3天，計(jì)算各成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的日內(nèi)精密度及日間精密度。丹參素、原兒茶醛、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、迷迭香酸、丹酚酸B、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯酞、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮II A的日內(nèi)精密度分別為1.13%、2.56%、1.15%、1.20%、2.04%、1.59%、2.77%、2.46%、1.75%、2.53%、1.71%、2.18%、2.48%、2.72%，內(nèi)間精密度分別為1.49%、2.64%、1.25%、1.25%、1.41%、1.31%、1.57%、1.23%、1.71%、2.02%、0.90%、3.22%、2.48%、2.43%，可滿足分析要求。

2.7? 重復(fù)性

取同一份浸膏，按“2.1”項(xiàng)下供試品制備方法制備6份供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，記錄各峰面積，計(jì)算各成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)及RSD值，丹參素、原兒茶醛、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、迷迭香酸、丹酚酸B、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯酞、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮II A的RSD為1.01%、2.97%、2.73%、1.46%、2.67%、2.51%、2.12%、2.26%、2.26%、1.79%、3.23%、0.58%、3.34%、2.30%，該方法重復(fù)性良好。

2.8? 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取同一浸膏約0.1 g，共9份，分別置于10 mL容量瓶，再分別加入相當(dāng)于原成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%、100%、150%的“2.2”項(xiàng)制備的各成分對(duì)照品貯備液溶液，甲醇超聲分散后定容至10 mL，搖勻，0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算各成分加樣回收率。丹參素、原兒茶醛、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、迷迭香酸、丹酚酸B、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯酞、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮II A平均加樣回收率分別為101.73%、100.81%、100.42%、102.86%、100.65%、98.05%、100.12%、102.40%、96.13%、96.39%、97.42%、97.44%、97.17%、95.48%，平均加樣回收率在92%～105%范圍內(nèi)，可滿足分析要求。

2.9? 穩(wěn)定性

取供試品溶液在0、2、6、8、10、12 h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)樣，按“2.3”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行分析，記錄各峰面積，計(jì)算各成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)及RSD值。丹參素、原兒茶醛、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、迷迭香酸、丹酚酸B、洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯酞、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮II A的RSD值為1.48%、2.87%、2.61%、2.91%、1.16%、2.95%、2.90%、1.14%、2.77%、1.16%、2.00%、1.88%、2.23%、2.24%，各成分RSD均小于3%，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10? 冠心寧不同提取方式的含量測(cè)定

（1）水煎液。將川芎、丹參藥材打粉（過(guò)40 目篩），分別稱取川芎、丹參粉末5 g，加10倍量純水煎煮2次，每次1 h，合并兩次提取液，減壓濃縮，冷凍干燥，得浸膏。取浸膏0.1 g，加甲醇超聲溶解并定容至10 mL，待測(cè)。

（2）醇提液。將川芎、丹參藥材打粉（過(guò)40 目篩），分別稱取川芎、丹參粉末5 g，10倍量85%乙醇，60 ℃回流提取兩次，每次1 h，合并兩次提取液，經(jīng)60 ℃減壓回收乙醇，冷凍干燥，得合提浸膏。取浸膏0.1 g，加甲醇超聲溶解并定容至10 mL，待測(cè)。

以上兩種供試品溶液按照“2.1”項(xiàng)色譜條件HPLC測(cè)定，結(jié)果如表2所示。

結(jié)果可知，水煎液中含有丹參素、原兒茶醛、川芎嗪、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯H、迷迭香酸、丹酚酸B;醇提液中除含以上成分外，還含洋川芎內(nèi)酯A、藁本內(nèi)酯、丁烯基苯酞、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮IIA水難溶性成分。

3? ? 結(jié)語(yǔ)

提取方式對(duì)冠心寧中的成分及質(zhì)量分?jǐn)?shù)有很大影響，水煎液主要含丹酚酸B等水溶性成分，但丹參、川芎成分的藥效研究，藁本內(nèi)酯、丹參酮IIA等水難溶性成分對(duì)冠心寧的臨床功效具有重要貢獻(xiàn)。可見(jiàn)，開(kāi)發(fā)同時(shí)含有丹參素、丹酚酸B等水溶性成分和藁本內(nèi)酯、丹參酮IIA等難溶性成分的冠心寧新制劑具有一定的價(jià)值和意義。

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