摘要：近年來隨著人們生活水平不斷提高，食源性疾病也是逐漸增多，食源性疾病更多的是由食源性致病菌引發(fā)的。能夠針對食源性致病菌進(jìn)行相對準(zhǔn)確的檢測，是有效控制食源性疾病發(fā)生的關(guān)鍵性的環(huán)節(jié)，現(xiàn)在傳統(tǒng)的檢測技術(shù)存在很多的問題，比如說耗時長、效率低，所以更加快速和靈敏的新型的檢驗技術(shù)已經(jīng)成為現(xiàn)在研究的熱點問題，這篇文章對利用免疫學(xué)以及分子生物學(xué)等快速、有效檢測食源性致病菌的方法進(jìn)行分析，總結(jié)出各種最新型的致病菌檢測技術(shù)的研究現(xiàn)狀和問題。

關(guān)鍵詞：食源性致病菌;分析技術(shù);檢測

這些年以來，我們面對的食品安全問題已經(jīng)得到了所有人的關(guān)注。食物中毒案件和人數(shù)在逐漸增加，而且大部分食物中毒是因為食源性致病菌所引起的。根據(jù)統(tǒng)計，全世界每年患食源性疾病的患者中，70%是由致病性微生物所引起的。所以現(xiàn)階段對于我們來說，構(gòu)建起有效的測試致病菌整體的檢驗體系，并且完成快速的致病菌檢測，已經(jīng)成為防止整個疾病傳染以及食品中的安全問題的重要手段。

免疫學(xué)檢測技術(shù)

免疫學(xué)方法，基本上利用的是抗原-抗體發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)，也就是抗原與抗體對應(yīng)以后發(fā)生結(jié)合。運(yùn)用免疫技術(shù)的檢測方法，把目標(biāo)致病菌的表面抗原，或者說他們分泌的一些毒素之類的東西作為主要的檢測點。因此它是一種可以利用到我們檢測致病菌的方法。這種方法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于我們平常食品中的致病菌的檢測。比如在酶聯(lián)免疫吸附這項技術(shù)中，它對多種致病菌的靈敏度（敏感程度）以及特異性（特異性能）都比較強(qiáng)，但是對和底物結(jié)構(gòu)相似的化合物有一些錯雜的錯誤匹配反應(yīng)，很難同時分析很多種成分。還有在分離技術(shù)當(dāng)中，可以很大程度地提高食物樣品中某些特定病原菌的檢出率，如副溶血性弧菌的檢測。但是它的價格相對其他方法來說是比較昂貴的，并且也是容易出現(xiàn)一些交叉錯誤的反應(yīng)的，所以還需要通過其他的技術(shù)來進(jìn)行輔助。

代謝學(xué)檢測技術(shù)

代謝學(xué)檢測技術(shù)就是在微生物生長代謝的基礎(chǔ)上，能夠通過對微生物的生長過程中含有的一些底層物質(zhì)，以及代謝之后產(chǎn)生物質(zhì)的變化，結(jié)合我們能夠看到的、了解的一些特點來進(jìn)行一系列的監(jiān)控，從而達(dá)到我們檢驗微生物的一個最終目的。代謝型技術(shù)是有非常大的應(yīng)用潛力的。尤其是在一些全球性出現(xiàn)的食品安全問題當(dāng)中，可以作為非常有效的檢測工具。就比如說電阻抗技術(shù)就是他其中的一個例子。通過檢測我們培養(yǎng)基電阻抗的一些變化，從而從這些方面來判斷細(xì)菌在整個培養(yǎng)基當(dāng)中繁殖方面的情況，再通過數(shù)據(jù)庫的比對得到最終結(jié)果。目前他這項技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于我們食品當(dāng)中的類似于金黃色葡萄球菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌等致病菌的檢測技術(shù)中去。

分子生物學(xué)檢測技術(shù)

隨著條件的發(fā)展，分子生物學(xué)這門學(xué)科得到非常快速的發(fā)展，它針對食源性致病菌的一些定性檢測以及鑒別已經(jīng)不僅僅局限于菌落外部形態(tài)特征，以及一些明顯的生化反應(yīng)特點的檢測上，而是從整個分子層面的水平上研究生物中的大分子，在這個基礎(chǔ)上我們建立起來了很多的分子生物檢測技術(shù)。

比如說我們常常聽說的脫氧核糖核苷酸的探針技術(shù)即核酸探針技術(shù)，其核心原理是堿基配對。核酸探針其實指的是帶有標(biāo)記物的已知序列的核酸片段，它能和與其互補(bǔ)的堿基配對，形式雙鏈。以此可用于檢測樣品中的特定基因序列。利用核酸探針技術(shù)去獲得實驗結(jié)果要比常規(guī)的檢測方法要更加快速并且有更高的準(zhǔn)確性，但是這項技術(shù)目前也有很多的局限性，它的后續(xù)處理會有挺多的比較大的困難。所以我們需要更加完善它?？梢杂玫耐暾奶结?，放大它的信號組合，延長或者研究出其它的雜交方式等等辦法，從而實現(xiàn)對我們的研究對象來進(jìn)行更加敏感的、高效率的、快速的檢測。在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的這樣一個技術(shù)當(dāng)中，它也是需要生物體之外的合適友好的條件下進(jìn)行的。我們常見的利用它來檢測食源性致病菌的技術(shù)其實有很多，因為相對于傳統(tǒng)的常見的一些檢測辦法，它的檢測技術(shù)可以大大減少我們整個檢測周期所需要的時間，而且相對來說它的操作更加簡單方便，并且它的特異性以及靈敏性更強(qiáng)。但是這項技術(shù)在我們食品微生物檢測行業(yè)當(dāng)中并沒有得到很多的應(yīng)用，很重要的原因就是因為在不同地方進(jìn)行測驗產(chǎn)生的結(jié)果可能會有不同，所以它的準(zhǔn)確性沒有很大的保障。

生物傳感器檢測技術(shù)

生物傳感器是利用對生物中一些物質(zhì)敏感，以及把它的濃度轉(zhuǎn)化為一個電信號來進(jìn)行檢測的一個儀器，它的工作原理就是把我們等待檢測的物質(zhì)擴(kuò)散到一個固定化的生物敏感材料當(dāng)中，讓它發(fā)生特定的反應(yīng)，它能產(chǎn)生的信息被適當(dāng)?shù)剞D(zhuǎn)化成電信號，在經(jīng)過一些放大來進(jìn)行輸出。一個生物芯片可以反復(fù)使用超過1000次。生物傳感器的穩(wěn)定性非常好，選擇性很強(qiáng)，靈敏度很高，成本又比較低，這一系列優(yōu)點能讓這個檢測技術(shù)在復(fù)雜的體系中進(jìn)行連續(xù)而快速的檢測。

電化學(xué)生物感應(yīng)器是生物傳感器檢測技術(shù)中的一個部分，它可以通過檢測修飾一些電極在待檢測的溶液當(dāng)中化學(xué)信號的變化，確定整個溶液中DNA的濃度。在進(jìn)行生物體基因互補(bǔ)堿基對的時候，我們就可以非常輕易應(yīng)用生物傳感器檢測致病菌，檢測的極限可以達(dá)到2.0×106CFU/mL。但是，電化學(xué)DNA傳感器還存在一定的局限性，就比如說很難以在表面構(gòu)建成復(fù)雜的機(jī)制環(huán)境，它的整個空間結(jié)構(gòu)存在變化。

光學(xué)生物傳感器來源于傳統(tǒng)的一些物理傳感器，它對抗外界干擾的能力相對較強(qiáng)，它把已知的一些生物分子固化在幾十納米厚的金屬膜表面，隨機(jī)被表面的等離子共振傳感器轉(zhuǎn)化，接下來就進(jìn)行檢測分析，有人把大腸埃希氏菌抗體固定到傳感器芯片的表面，并且對這些進(jìn)行了雙抗體夾心的一系列的操作，它的檢測極限已經(jīng)達(dá)到了103CFU/mL。

噬菌體識別檢測技術(shù)

噬菌體識別檢測技術(shù)在致病菌檢測方面成為整個開發(fā)的研究熱點問題，噬菌體是一種可以侵入細(xì)菌并住宿在宿主體內(nèi)進(jìn)行增殖的病毒。它的主要檢測方法是群體檢測方法，有基于分子生物學(xué)構(gòu)建的報告噬菌體檢測技術(shù)，另外還有輔以先進(jìn)的生物或者是化學(xué)試劑來進(jìn)行檢測的辦法，比如說熒光標(biāo)記法等等。

在這當(dāng)中噬菌體擴(kuò)增法應(yīng)用免疫磁性分離式卷體擴(kuò)增法。檢出限達(dá)到了10000CFU/mL。但是這個方法的缺點是檢測需要用很多的條件來進(jìn)行選擇，它的濃度和感染時間等等這些必須要事先進(jìn)行篩選。

另外還有報告噬菌體技術(shù)，他們構(gòu)建的含有l(wèi)ux基因的報告是群體用于檢測一些不同樣品基質(zhì)中的大腸桿菌O157：H7，雖然檢測的時間不是很相同，但是檢出限都可以達(dá)到1CFU/mL。在熒光標(biāo)記的噬菌體技術(shù)當(dāng)中，它們?nèi)〉昧艘恍┍容^好的效果。有人報道了利用免疫磁性分離，結(jié)合熒光標(biāo)記噬菌體技術(shù)，用于檢測碎牛肉和鮮奶中的大腸埃希氏菌，碎牛肉的大腸埃希氏出限達(dá)到了2.2CFU/g，鮮奶中的大腸埃希氏菌檢出限達(dá)到了10CUF/mL～100CUF/mL。

結(jié)束語

食品安全問題關(guān)系到我們的國計民生，隨著整個經(jīng)濟(jì)社會的不斷發(fā)展。我們一定會探究出更加優(yōu)秀的辦法來進(jìn)行更加完善的檢測，隨著人們對微生物的認(rèn)識逐漸的深入與透徹，相信一定會有更多的分析辦法和檢測技術(shù)能夠應(yīng)用到我們的生活當(dāng)中。

參考文獻(xiàn)：

[1]葛航，吳朦晨，張明洲，俞曉平.食源性致病菌等溫擴(kuò)增檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J].分析測試學(xué)報，2019（07）：874-881.

[2]周靜，田風(fēng)玉，焦必寧，何悅.基于納米材料的可視化比色檢測技術(shù)在食源性致病菌檢測中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2019，45（11）：259-267.

[3]尹琬婷，嚴(yán)志明.食源性致病菌快速檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J].食品安全導(dǎo)刊，2018（24）：114.

凌超

上海必諾檢測技術(shù)服務(wù)有限公司