張碩 王磊

摘要：本文通過(guò)多年的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，采用了變波長(zhǎng)超高效液相色譜法，充分利用每種著色劑最大可見(jiàn)吸收波長(zhǎng)，在檢測(cè)過(guò)程中變化波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，避免了單一波長(zhǎng)下繁瑣的前處理，減少提取過(guò)程的損失，并且避免雜質(zhì)在紫外區(qū)對(duì)樣品測(cè)定的干擾，保持基線平穩(wěn)，相應(yīng)的提高了幾種色素的靈敏度。

關(guān)鍵詞：著色劑;高效液相色譜法

合成著色劑是為了賦予或改善食品色澤而添加到食品中的物質(zhì)，它不是食品的成分，在著色劑合成中可能伴有其他副產(chǎn)品而造成污染，特別是早期使用的合成著色劑很多發(fā)現(xiàn)具有致癌性，因此世界各國(guó)對(duì)食用合成著色劑都嚴(yán)格控制。目前，我國(guó)允許使用的安全性較高的只有8種。對(duì)合成著色劑的檢測(cè)通常采用高效液相色譜法。

《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》規(guī)定，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)開(kāi)展測(cè)量不確定度評(píng)定工作，當(dāng)檢測(cè)結(jié)果臨近臨界值時(shí)，測(cè)量不確定度分析評(píng)定是檢測(cè)工作的重要技術(shù)組成部分。我們采用了變波長(zhǎng)超高效液相色譜法，充分利用每種著色劑最大可見(jiàn)吸收波長(zhǎng)，在檢測(cè)過(guò)程中變化波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，避免了單一波長(zhǎng)下繁瑣的前處理，減少提取過(guò)程的損失，并且避免雜質(zhì)在紫外區(qū)對(duì)樣品測(cè)定的干擾，保持基線平穩(wěn)，相應(yīng)的提高了幾種色素的靈敏度。同時(shí)，超高效液相色譜大大縮短了分析時(shí)間，節(jié)約了成本。

一、材料與方法

（一）儀器

ACQUITY iJPLC超高效液相色譜系統(tǒng)

（二）色譜條件

色譜柱;ACQUITY UPLCBEH C柱，2.1×50mm，1.7μm;流動(dòng)相：甲醇（A），0.02mol/L乙酸銨（B）;流速：0.2ml/min;進(jìn)樣量：3μL;柱溫：30℃;梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

（三）樣品測(cè)定

均勻稱(chēng)取樣品10g，用檸檬酸或稀氨水將樣品調(diào)節(jié)到pH=6-7左右，加水定容至50.0mL，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾上機(jī)。根據(jù)保留時(shí)間定性，峰面積定量，以峰面積對(duì)濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，外標(biāo)法定量。

二、結(jié)果與討論

（一）流動(dòng)相的選擇

采用梯度洗脫，通過(guò)試驗(yàn)調(diào)整流動(dòng)相的比例，最終確定梯度洗脫條件（見(jiàn)表1），我們可以發(fā)現(xiàn)各峰分離完全，且峰形良好，分析時(shí)間短。

（二）測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

采用ACQUITY UPLC測(cè)定樣品時(shí)可以設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)程序，使儀器在不同時(shí)刻用不同波長(zhǎng)測(cè)定樣品。經(jīng)過(guò)反復(fù)測(cè)定發(fā)現(xiàn)，這幾種合成著色劑的保留時(shí)間穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，因此可以在每種著色劑出峰的時(shí)間將波長(zhǎng)設(shè)定為其最大可見(jiàn)吸收波長(zhǎng)。國(guó)標(biāo)采用單一的254nm進(jìn)行檢測(cè)，但在此波長(zhǎng)下有吸收的化學(xué)組分很多，會(huì)形成大量干擾峰影響著色劑的檢測(cè)。采用每一種著色劑的最大可見(jiàn)吸收波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，無(wú)色成分沒(méi)有吸收，就可以避免這個(gè)問(wèn)題，同時(shí)提高靈敏度、簡(jiǎn)化前處理過(guò)程。通過(guò)對(duì)5種合成著色劑的吸收波長(zhǎng)進(jìn)行掃描確定最大吸收波長(zhǎng)：檸檬黃428nm、莧菜紅520nm、胭脂紅509nm、日落黃483nm、赤蘚紅528nm。根據(jù)各種著色劑的保留時(shí)間及最大吸收波長(zhǎng)確定波長(zhǎng)變化程序見(jiàn)表2。

（三）線性范圍及檢出限

在1.0～100.0mg/L的濃度范圍內(nèi)響應(yīng)值與合成著色劑的濃度成良好的線性關(guān)系。以Y表示濃度，X表示峰面積得到線性方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表3。

（四）加標(biāo)回收率試驗(yàn)

在樣品中分別加入10mg/L和20mg/L的著色劉混標(biāo)，依本法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明回收率良好。（見(jiàn)表4）

（五）精密度試驗(yàn)

對(duì)同一加標(biāo)樣品連續(xù)測(cè)定（n=6），測(cè)得RSD值分別為檸檬黃1.01%、莧菜紅1.31%、胭脂紅1.24%、日落黃1.12%、赤蘚紅2.05%。

三、結(jié)語(yǔ)

筆者提出的方法分離效果好、靈敏度高、干擾小、處理簡(jiǎn)單，方法線性范圍寬，精密度準(zhǔn)確度均取得滿意的效果，對(duì)葡萄酒的檢測(cè)很有實(shí)用價(jià)值，值得進(jìn)一步推廣。

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