楊素明 張帷政 周旸哲 肖圣舟 劉欣佳

摘要：目的使用滴鼻的激發(fā)方式選擇不同濃度卵清蛋白（OVA）對小鼠OVA致敏性支氣管哮喘模型的影響。方法雌性昆明小鼠24只隨機分為4組，分別為空白對照組、實驗A組（生理鹽水）、實驗B組（50μg/mlOVA溶液）、實驗C組（100μg/ml OVA溶液）;制備OVA致敏性支氣管哮喘模型;模型制備的第21天到第27天用滴鼻法讓實驗組吸入不同的藥物，對照組正常喂養(yǎng)。第28天顯微觀察肺泡灌洗液，進行炎癥細胞分類細胞計數;制備肺組織病理切片，觀察支氣管的炎癥改變。結果小鼠哮喘激發(fā)后結果顯示，OVA溶液能夠激發(fā)OVA致敏性支氣管哮喘。炎癥細胞分類計數結果顯示，實驗B組及C組的嗜酸性粒細胞、中性粒細胞及淋巴細胞數目顯著高于對照組;實驗B組各類炎癥細胞數目最高。切片結果顯示，實驗組小鼠肺組織皆有炎癥細胞侵潤，實驗B組及C組有肺泡壁結構損傷，且實驗B組侵潤及損傷最明顯。結論OVA溶液能夠激發(fā)OVA致敏性支氣管哮喘，劑量為50μg/ml時效果最佳。

關鍵詞：卵清蛋白;滴鼻;支氣管哮喘

支氣管哮喘（BA）簡稱哮喘，是由嗜酸性粒細胞（LOS）、肥大細胞（MC）、中性粒細胞（N）、T淋巴細胞等多種炎性細胞及其細胞因子參與的，以氣道高反應性等為主要特征的慢性氣道炎性反應[1]。不同的激發(fā)方式和激發(fā)時間使建立小鼠哮喘模型的方法存在較大差異，本實驗采用滴鼻法[2]，研討不同濃度的激發(fā)溶液對小鼠哮喘激發(fā)的差異，為研究支氣管哮喘動物模型提供依據。

一、材料與方法

（一）實驗動物及分組

6～8周雌性昆明小鼠24只，中南大學實驗動物中心提供，隨機均數分配為空白對照組、實驗A組（生理鹽水）、實驗B組（50vg/ml0VA溶液）、實驗C組（100wg/mlOVA溶液）。

（二）實驗試劑及儀器

氫氧化鋁[Al（OH）]凝膠，OVA購自美國Sigma公司;日本OLYMPUS公司BX51T-32P01型顯微鏡，德國Slee公司MEV型號冰凍切片機。

（三）實驗方法

1.模型的制備：小鼠分別于第0、7、14天腹腔注射含100μgOVA和0.1mlAI（OH）凝膠的混懸液0.2ml。

2.哮喘激發(fā)：在第21天到第27天使用乙醚瞬時麻醉小鼠，通過滴鼻法使不同組的小鼠自然吸入不同的溶液6天（1次/天），對照組正常喂養(yǎng)。

3.炎癥細胞分類計數使用乙醚瞬時麻醉小鼠，結扎全肺，用冷生理鹽水行支氣管肺泡灌洗，0.8ml/次，共3次，回收灌洗液，2000r/min離心5min，細胞沉淀用lml生理鹽水重懸，制備涂片，以蘇木精一伊紅（HE）染色，顯微鏡下進行細胞計數[2]。

4.HE染色組織切片：支氣管肺泡灌洗后，取小鼠全肺組織經10%甲醛固定24h后，常規(guī)石蠟包埋切片HE染色，光鏡下觀察各組切片上支氣管的炎癥改變[2]。

5.統(tǒng)計學分析：所有數據用x±s表示，采用SPSS 22.0進行統(tǒng)計分析。

二、結果

（一）哮喘激發(fā)后表現(xiàn)

激發(fā)5-6天后實驗B組及C組出現(xiàn)尾巴紫紺、呼吸急促、抽搐、倒地并伴有明顯腹式呼吸行為，其中B組小鼠過敏反應出現(xiàn)時間更早且程度更嚴重。

（二）炎癥細胞分類計數結果

實驗B組及C組的嗜酸性粒細胞、中性粒細胞及淋巴細胞數目顯著高于對照組;實驗B組炎癥粒細胞及嗜酸性粒細胞數目最高。（見表一）

（三）肺組織病理切片結果：對照組小鼠肺組織結構正常;實驗組小鼠肺組織皆有炎癥細胞侵潤，實驗B組及C組有肺泡壁結構損傷，且實驗B組侵潤及損傷最明顯。

三、討論

小鼠哮喘激發(fā)后表現(xiàn)結果表示，OVA溶液能夠激發(fā)OVA致敏性支氣管哮喘。炎癥細胞分類計數結果顯示，實驗B組及C組的嗜酸性粒細胞、中性粒細胞及淋巴細胞數目顯著高于對照組;實驗B組炎癥粒細胞及嗜酸性粒細胞數目最高。切片結果顯示，實驗組小鼠肺組織皆有炎癥細胞侵潤，實驗B組及C組有肺泡壁結構損傷，且實驗B組侵潤及損傷最明顯。

綜上所述，OVA溶液能夠激發(fā)OVA致敏性支氣管哮喘，劑量為50μg/ml時效果最佳。

參考文獻：

[1]尹靜波.炎性細胞因子在支氣管哮喘發(fā)病機制中的作用[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2011（10）：1087-1089.

[2]程勝，陳輝龍，王正云，王愛利，謝敏，曹勇，謝俊剛，熊維寧，徐永健.滴鼻和霧化兩種不同激發(fā)方式對小鼠支氣管哮喘模型氣道炎癥的影響[J].華中科技大學學報（醫(yī)學版），2014，43（02）：121-124.

基金項目：長沙醫(yī)學院2017年大學生研究學習和創(chuàng)新性實驗計劃項目：長醫(yī)教[2017]18號-315。