張艷艷 黃玉舟 李麗 韋石 趙國(guó)帥

摘 要：本試驗(yàn)通過(guò)較為簡(jiǎn)單的前處理，并利用HLB凈化柱進(jìn)行快速處理飼料樣品，采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)育成牛精補(bǔ)飼料、育成牛濃縮飼料、奶牛預(yù)混合飼料等飼料樣品中四環(huán)素、土霉素的含量進(jìn)行了測(cè)定，并探討方法的可行性。

關(guān)鍵詞：飼料;液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜;四環(huán)素;土霉素

0 引言

四環(huán)素和金霉素同屬于四環(huán)素類抗生素藥物，除對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌以及厭氧菌均有好的抑制作用外，多數(shù)立克次體屬、支原體屬、衣原體屬、非典型分枝桿菌屬、螺旋體也對(duì)四環(huán)素類藥物十分敏感，是一種高效的廣譜抗生素，是十分普遍的生產(chǎn)和臨床使用的抗生素類藥物。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)waters）;天平（Techcomp）;高速離心機(jī)（湖南湘儀）;固相萃取儀;HLB凈化柱。

1.2 試劑

甲醇（色譜純，F(xiàn)isher）;乙腈（色譜純，F(xiàn)isher）;鹽酸（分析純，國(guó)藥）;甲酸（分析純，國(guó)藥）;四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)品;土霉素標(biāo)準(zhǔn)品;0.4mol/L鹽酸溶液：準(zhǔn)確稱取32.8mL鹽酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻;0.01mol/L草酸甲醇溶液：準(zhǔn)確稱取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中;準(zhǔn)確稱取適量四環(huán)素和土霉素標(biāo)準(zhǔn)品，分別配制成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取3.0g樣品，置于50mL具塞錐形瓶，加入甲醇10mL，旋渦混勻1min，加入鹽酸溶液30mL，渦旋混勻1min，超聲20min，移至50離心管中，5000r/min離心10min，取上清液，待凈化。

1.3.2 最佳儀器條件的選擇

對(duì)儀器各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行調(diào)試，以確定最佳的儀器測(cè)定參數(shù)。

色譜條件：C18柱，100mm×2.1mm，粒徑1.7μm;柱溫，40℃;流動(dòng)相，乙腈+甲醇+甲酸=18+4+78;進(jìn)樣量，10μL。

質(zhì)譜條件：離子源，電噴霧離子源;掃描方式，正離子模式;檢測(cè)方式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）;電噴霧電壓，碰撞電壓等條件調(diào)諧至最優(yōu)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成含有四環(huán)素和土霉素各0，20，50，100，200，500，1000ng/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液，以峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，結(jié)果表明其線性關(guān)系較好。

2.2 加標(biāo)回收率結(jié)果

從表1，表2，表3可見，3種樣品的加標(biāo)回收率在75.0%～95.6%。表明該方法具有良好的準(zhǔn)確性。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)利用HLB凈化柱對(duì)育成牛精補(bǔ)飼料、育成牛濃縮飼料和奶牛預(yù)混合飼料進(jìn)行了處理，利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)其四環(huán)素及土霉素的含量進(jìn)行了分組多平行測(cè)定，結(jié)果表明該方法在準(zhǔn)確性，重復(fù)性、平行性及精密度方面表現(xiàn)良好，多濃度添加回收率均在75.0%～95.6%之間，兩種重復(fù)性試驗(yàn)中相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別均在3.08%～4.66%和2.75%～4.03%之間，且前處理方法較為簡(jiǎn)單，適合對(duì)大批量飼料樣品進(jìn)行四環(huán)素及土霉素的測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

[1]張?zhí)戽瑮罨劢?，孫世峰.飼料中4種四環(huán)素類藥物的檢測(cè)——高效液相色譜法[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2016（10）.