高 娟，王 衛(wèi)，唐素芳

(天津市藥品檢驗(yàn)研究院，天津 300070)

氨酚氯雷偽麻緩釋片[1]為復(fù)方抗感冒藥，含對乙酰氨基酚、硫酸偽麻黃堿和氯雷他定等成分。經(jīng)查詢，國家食品藥品監(jiān)督管理局的數(shù)據(jù)庫中共有4家生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)4個批準(zhǔn)文號，分別在國家食品藥品監(jiān)督管理局YBH33042005、YBH11212008、YBH33282005和YBH03682008 4個國家標(biāo)準(zhǔn)中收載，國外藥典均無收載。本文按國家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高任務(wù)書的要求采用HPLC法對氨酚氯雷偽麻緩釋片中3種活性成分的含量測定進(jìn)行了方法學(xué)研究和驗(yàn)證，統(tǒng)一并完善了現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)，完成了氨酚氯雷偽麻緩釋片的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高工作，進(jìn)一步保證產(chǎn)品安全、有效和質(zhì)量可控。

1 儀器與試藥

Aglient 1260 高效液相色譜儀。對乙酰氨基酚對照品(中國食品藥品檢定研究院化學(xué)藥品檢定所，批號100018-200408，純度：100.0%)；硫酸偽麻黃堿對照品(深圳沃蘭德藥業(yè)有限公司，批號Y85130102，標(biāo)化純度：99.5%)；氯雷他定對照品(常州亞邦制藥有限公司，批號Y64121001，標(biāo)化純度：99.2%)；氨酚氯雷偽麻緩釋片1#～3#(A藥廠提供，批號1408475-1、1408475-3、1408475-4)；氨酚氯雷偽麻緩釋片4#～6#(B藥廠提供，批號1305011、1412008、1507002)；甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，磷酸二氫鉀(分析純，天津市贏達(dá)稀貴化學(xué)試劑廠)，十二烷基硫酸鈉(LAB級，德國Merck公司)，醋酸(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1對乙酰氨基酚

2.1.1色譜條件與系統(tǒng)適用性[2]采用Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(20∶80)；流速為1.0 ml/min；檢測波長為243 nm；柱溫為40 ℃；進(jìn)樣量為20 μl。按上述色譜條件進(jìn)行測定，理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計不低于3 000。

2.1.2溶液的制備

2.1.2.1對照品溶液 取對乙酰氨基酚對照品，精密稱定，加20%甲醇溶液溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含對乙酰氨基酚0.10 mg的溶液。

2.1.2.2供試品溶液 取本品10片，研細(xì)，用20%甲醇溶液分次轉(zhuǎn)移至500 ml量瓶中，振搖2 h使溶解，放冷，加20%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，取溶液適量，13 000 r/min離心5 min，取上清液濾過，精密量取續(xù)濾液1 ml，置100 ml量瓶中，加20%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2.3陰性對照溶液 分別稱取不同廠家空白輔料和缺對乙酰氨基酚的陰性對照各適量，同法制備、測定輔料溶液和陰性對照溶液，記錄色譜圖，結(jié)果顯示，空白輔料及其他兩種活性成分對對乙酰氨基酚的含量測定均無干擾，見圖1。

2.1.3線性關(guān)系試驗(yàn) 精密稱取對乙酰氨基酚對照品適量，溶解并逐步稀釋制成每1 ml中含對乙酰氨基酚2、20、50、100、200和300 μg的系列溶液，分別精密取上述溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以對乙酰氨基酚濃度C對峰面積A作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在2～300 μg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為A=116.05C+0.14(r=0.999 9，n=6)。

2.1.4精密度試驗(yàn) 精密吸取對乙酰氨基酚對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積的RSD分別為0.04%和0.20%，精密度符合要求。

1.對乙酰氨基酚

2.1.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對乙酰氨基酚對照品和供試品溶液，分別于制備后0、6、12和24 h測定，記錄峰面積，峰面積的RSD分別為0.16%和0.10%，兩種溶液在24 h內(nèi)均穩(wěn)定。

2.1.6重復(fù)性試驗(yàn) 取4#供試品10片，共6份，依“2.1.2.2”項(xiàng)下法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定，對乙酰氨基酚的含量測定結(jié)果平均值為99.82%，RSD為0.62%，重復(fù)性良好。

2.1.7回收率試驗(yàn) 精密稱取1片對應(yīng)量的空白輔料0.25 g、硫酸偽麻黃堿對照品60 mg及氯雷他定對照品濃溶液(0.1 mg/ml)25 ml，置同一50 ml量瓶中，共制備9份，分別精密加入對乙酰氨基酚對照品400、500和600 mg各3份，加20%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，取溶液適量，13 000 r/min離心5 min，取上清液濾過，精密量取續(xù)濾液1 ml，置100 ml量瓶中，加20%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得，依“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果平均回收率為99.8%，RSD為0.70%。見表1。

表1 對乙酰氨基酚回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.1.8供試品含量測定 取1#～6#樣品，按“2.1.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，含量測定結(jié)果分別為：97.3%、98.9%、100.1%、99.8%、97.6%和96.4%，均在擬規(guī)定的限度范圍(90.0%～110.0%)內(nèi)。

2.1.9耐用性試驗(yàn) 方法1：Agilent1260型高效液相色譜儀，Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；方法2：島津LC-2010C型高效液相色譜儀，Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。使用不同型號的液相色譜儀和色譜柱測定對乙酰氨基酚的含量，結(jié)果一致。

2.2硫酸偽麻黃堿和氯雷他定

2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性 采用Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；以甲醇-1%十二烷基硫酸鈉-醋酸(75∶25∶1)為流動相；流速為1.0 ml/min；檢測波長為257 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量20 μl。理論板數(shù)按氯雷他定峰計算不低于3 000，硫酸偽麻黃堿峰與氯雷他定峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2.2溶液的制備

2.2.2.1對照品溶液的制備 取硫酸偽麻黃堿對照品與氯雷他定對照品，精密稱定，用75%甲醇溶液溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含硫酸偽麻黃堿1.2 mg與氯雷他定50 μg的溶液。

2.2.2.2對照品溶液的制備 取本品10片，研細(xì)，用75%甲醇溶液適量分次轉(zhuǎn)移至500 ml量瓶中，振搖2 h使溶解，放冷，加75%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，取溶液適量，13 000 r/min離心5 min，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.2.2.3陰性對照溶液 分別稱取不同廠家空白輔料、缺硫酸偽麻黃堿和氯雷他定的陰性對照1、缺硫酸偽麻黃堿的陰性對照2、缺氯雷他定的陰性對照3各適量。同法制備和測定各溶液，記錄色譜圖，結(jié)果顯示，空白輔料及對乙酰氨基酚對硫酸偽麻黃堿和氯雷他定的含量測定均無干擾，且硫酸偽麻黃堿和氯雷他定互無干擾，見圖2。

2.2.3線性關(guān)系試驗(yàn)

2.2.3.1硫酸偽麻黃堿 取硫酸偽麻黃堿對照品適量，精密稱定，加75%甲醇溶液并逐步稀釋制成每1 ml中含硫酸偽麻黃堿0.12、0.24、0.6、1.2、2.4 和3.6 mg的系列溶液，分別精密取上述溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以硫酸偽麻黃堿濃度C對峰面積A作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在0.12～3.6 mg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為A=389.34C+0.52(r=0.999 99，n=6)。

1.對乙酰氨基酚 2.硫酸偽麻黃堿 3.氯雷他定

2.2.3.2氯雷他定 取氯雷他定對照品適量，精密稱定，加75%甲醇溶液并逐步稀釋制成每1 ml中含氯雷他定2、20、50、100、200和300 μg的系列溶液，分別精密取上述溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以對乙酰氨基酚濃度C對峰面積A作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在2～300 μg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為A=16.80C+0.77(r=0.999 99，n=6)。

2.2.4精密度試驗(yàn) 精密吸取硫酸偽麻黃堿、氯雷他定對照品溶液和供試品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，對照溶品液兩峰峰面積的RSD分別為0.11%和0.13%，供試品溶液兩峰峰面積的RSD分別為0.09%和0.12%，符合要求。

2.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn) 取硫酸偽麻黃堿和氯雷他定對照品溶液及供試品溶液，分別放置0、2、4、8、12和24 h后按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄峰面積，對照品溶液兩峰峰面積的RSD分別為0.56%和0.49%，供試品溶液兩峰峰面積的RSD分別為0.15%和0.57%，4種溶液在24 h內(nèi)均穩(wěn)定。

2.2.6重復(fù)性試驗(yàn) 取6#供試品10片，共6份，精密稱定，按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果硫酸偽麻黃堿含量平均值為104.83%，RSD為0.59%；氯雷他定含量平均值為102.71%，RSD為0.35%，重復(fù)性良好。

2.2.7回收率試驗(yàn)

2.2.7.1硫酸偽麻黃堿 精密稱取1/5片對應(yīng)量的空白輔料50 mg、對乙酰氨基酚對照品0.1 g及氯雷他定對照品濃溶液(0.1 mg/ml)5 ml，置同一10 ml量瓶中，共9份，分別精密加入硫酸偽麻黃堿對照品9.6、12和14.4 mg，各3份，加75%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，取溶液適量，13 000 r/min離心5 min，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液,依“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果平均回收率為100.2%，RSD為0.60%，見表2。

表2 硫酸偽麻黃堿回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.2.7.2氯雷他定 精密稱取1/5片對應(yīng)量的空白輔料50 mg、對乙酰氨基酚對照品0.1 g及硫酸偽麻黃堿對照品12 mg，置同一10 ml量瓶中，共9份，分別精密加入氯雷他定對照品濃溶液(0.1 mg/ml)4、5和6 ml，各3份，加75%甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，取溶液適量，13 000 r/min離心5 min，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，依“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果平均回收率為100.0%，RSD為0.55%，見表3。

2.2.8供試品含量測定 取兩個生產(chǎn)單位6批樣品按“2.2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按和“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。硫酸偽麻黃堿的含量測定結(jié)果分別為：108.0%、107.5%、107.1%、106.1%、105.6%和104.8%；氯雷他定的含量測定結(jié)果分別為：96.2%、94.3%、94.7%、 97.2%、 102.9%和102.7%。均在擬規(guī)定的限度范圍(90.0%～110.0%)內(nèi)。

2.2.9耐用性試驗(yàn) 方法1：Agilent1260型高效液相色譜儀，Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；方法2：島津LC-2010C型高效液相色譜儀，Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)。使用不同型號的液相色譜儀和色譜柱測定硫酸偽麻黃堿和氯雷他定的含量，結(jié)果一致。

3 討論

3.1本品含對乙酰氨基酚、硫酸偽麻黃堿和氯雷他定3種活性成分，3種成分含量及極性差異較大，導(dǎo)致提取方法和含量測定的色譜條件均不同。本文建立的對乙酰氨基酚含量測定方法可用于對氨基酚的檢查及對乙酰氨基酚釋放度的檢查；硫酸偽麻黃堿、氯雷他定含量測定方法可以用于硫酸偽麻黃堿釋放度、氯雷他定溶出度及兩種活性成分含量均勻度的檢查。

3.2片劑進(jìn)行含量測定時，一般取研細(xì)并混勻后的片粉適量制備供試品溶液，而氨酚氯雷偽麻緩釋片包衣層中含有活性成分氯雷他定，而包衣具一定延展性，研磨時不易被研細(xì)，且易附著于研缽壁，很難與片粉混勻，故采用研細(xì)后使用溶劑轉(zhuǎn)移整片供試品方法制備。