羅彤，付文雯，黃坤，張亞珍，張苗，王會霞，石寶琴，郭盧云

(1.湖北省食品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗研究院，武漢 430075;2.湖北省食品質(zhì)量安全檢測工程技術(shù)研究中心，武漢，430075;3.黃岡市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，黃岡438000；4.湖北輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院，武漢 430070)

0 引言

氟蟲腈（fipronil）是一種苯基吡唑類殺蟲劑，對蚜蟲、葉蟬、飛虱、鱗翅目幼蟲、蠅類和鞘翅目等一系列害蟲均具有很高的殺蟲活性[1]。食品安全標(biāo)準(zhǔn)與監(jiān)測評估司最新發(fā)布的GB 2763.1-2018《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中百草枯等43種農(nóng)藥最大殘留限量》中對牛奶中氟蟲腈的臨時限量為0.02 mg/kg（http：//www.sdtdata.com/fx/fmoa/tsLibCard/169176.html）。至今尚沒有針對牛奶中氟蟲腈及其代謝物檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)和文獻。因此，建立牛奶中氟蟲腈及其衍生物殘留的檢測方法具有重要的意義。文獻中氟蟲腈的檢測方法多為氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)[2-6]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[1，7-9]。本研究基于QuECh-ERS前處理方法，建立了QuEChERS-氣相色譜-負(fù)化學(xué)源質(zhì)譜法測定牛奶中氟蟲腈及其代謝物殘留，為實現(xiàn)牛奶中氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物殘留的快速監(jiān)測提供技術(shù)支持。

1 實驗

1.1 儀器與試劑

TSQ 8000evo氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，XS204分析天平，Allegra 6412冷凍離心機，XH-C渦旋混合器，Trayster翻轉(zhuǎn)式混勻器。

氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈亞砜、氟甲腈（質(zhì)量濃度100μg/mL），乙腈（色譜純），氯化鈉（分析純），乙二胺-N-丙基硅烷（PSA），C18，無水硫酸鎂，牛奶樣品為市售產(chǎn)品。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液和衍生劑的配制

氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈亞砜、氟甲腈混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：將標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈逐級稀釋成質(zhì)量濃度為10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別移取適量標(biāo)準(zhǔn)使用液，用色譜純乙腈逐級稀釋配制成質(zhì)量濃度為2.5，5，10，20，30，40，50，100 g/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取牛奶5 g（精確至0.01 g），置于聚乙烯塑料離心管中，加入10 mL乙腈，振蕩提取30 min，加入5 g氯化鈉，渦旋2 min后于轉(zhuǎn)速為4000 r/min離心5 min。取上清液2 mL至離心管加入100 mg的PSA粉末、100 mg的C18粉末、200 mg無水硫酸鎂粉末，渦旋30 s，靜置至上層液體無渾濁物；取上層液體過0.22μm濾膜后轉(zhuǎn)移至進樣小瓶，待GC-NCI-MS技術(shù)分析。

1.4 氣相色譜-負(fù)化學(xué)源質(zhì)譜條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管柱（30.0 m×0.25 mm×0.25μm）；升溫程序：初始溫度70℃，保持1 min，以30℃/min升溫至200℃，保持4 min，以10℃/min升溫至270℃，保持1 min；進樣口溫度250℃；流速為1.0 mL/min；進樣體積1μL；進樣方式為不分流進樣。

1.4.2 質(zhì)譜條件

負(fù)化學(xué)源（CI）；離子源溫度為150℃，傳輸線溫度為250℃，溶劑延遲時間為5 min，掃描模式為選擇離子監(jiān)測（SIM），監(jiān)測離子如表1所示。

2 結(jié)果及討論

2.1 QuEChERS方法的優(yōu)化

分散固相萃取常用的凈化劑有PSA和C18等。PSA可吸附糖、有機酸、脂肪酸等極性干擾物；C18可吸附脂肪等非極性干擾物[9]。

本試驗對常用的PSA、C18和無水硫酸鎂3種填料的使用對加標(biāo)牛奶樣品提取液進行凈化，綜合考慮回收率、凈化效果和基質(zhì)效應(yīng)等因素，最終確定凈化劑加入量分別為100 mg PSA粉末、100 mg C 18粉末、200 mg無水硫酸鎂。

表1 氟蟲腈及其代謝物質(zhì)譜條件參數(shù)

2.2 線性范圍、檢出限和定量限

氟蟲腈及其衍生物標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度50μg/L）的總離子流如圖1所示。以一系列質(zhì)量濃度（2.5～100μg/L）的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在確定的色譜和質(zhì)譜條件下進行測定。以峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以3倍信噪比計算檢出限(LOD)，以10倍信噪比計算定量限(LQD)。氟蟲腈及其衍生物的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限如表2所示。由表2可以看出，氟蟲腈及其衍生物的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r2）均大于0.9950。氟甲腈、氟蟲腈亞砜、氟蟲腈、氟蟲腈砜的檢出限分別為0.02，0.01，0.05μg/kg和0.05μg/kg；定量限分別為0.06，0.03，0.15μg/kg和0.15μg/kg。

圖1 氟蟲腈及其代謝物(50μg/L)的總離子流

2.3 方法的準(zhǔn)確度和精密度

為了驗證QuEChERS前處理方法聯(lián)合GC-NCI/MS測定牛奶中氟蟲腈及其代謝物殘留的可行性和準(zhǔn)確性，實驗采用牛奶基質(zhì)樣品進行加標(biāo)回收率驗證，加標(biāo)水平分別為0.01，0.02，0.05 mg/kg，按照前述方法處理平行測定6次，回收率和精密度如表3所示。由表3可以看出，牛奶基質(zhì)中氟甲腈、氟蟲腈亞砜、氟蟲腈和氟蟲腈砜方法回收率分別為85.6%～96.7%，89.3%～98.6%，88.9%～99.4%，89.5%～102.4%；相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.7%～6.1%，4.2%～5.5%，3.9%～6.0%，4.0%～5.9%，低于10%。圖2為質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.02 mg/kg的加標(biāo)牛奶樣品的定量離子色譜。

3 結(jié)論

本研究建立了QuEChERS-氣相色譜-負(fù)化學(xué)源質(zhì)譜法測定牛奶中氟蟲腈及其代謝物殘留。該方法簡單、快速、基質(zhì)干擾小、靈敏度高、重復(fù)性好，適用于牛奶中氟蟲腈及其代謝物殘留的定量檢測，可為牛奶的安全監(jiān)管及質(zhì)量控制提供技術(shù)支持。

表2 氟蟲腈及其衍生物的線性方程、相關(guān)系數(shù)、方法檢出限和方法定量限 μg/kg

表3 牛奶基質(zhì)中氟蟲腈及其衍生物的加標(biāo)回收率和精密度(n=6) %

圖2 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.02 mg/kg加標(biāo)牛奶樣品溶液中氟蟲腈及其衍生物的定量離子色譜