陳紹明 尹力 高志毅

摘 要：目的：建立一個用高效液相色譜法測定化妝品中苯酚含量的方法。方法：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;色譜柱：C18柱，（4.6*250mm*5μm）;流動相：甲醇+水（58+42）;流速：1.0ml/min;檢測波長：280nm;柱溫：25℃;進(jìn)樣量：5μ。結(jié)果：精密度試驗、準(zhǔn)確度試驗測試結(jié)果均能滿足要求，質(zhì)控結(jié)果滿意。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確，可用于化妝品中苯酚的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：化妝品;苯酚;紫外檢測器;方法確認(rèn)

根據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中苯酚的測定，通過HPLC進(jìn)行測定，對苯酚的測定項目進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗、精密度試驗、檢測限、定量限、線性關(guān)系與線性范圍考察、準(zhǔn)確度試驗（加樣回收試驗）的驗證，確保檢驗方法對被檢物質(zhì)有足夠的專屬性和靈敏度，通過回收率試驗驗證檢驗過程的回收率，并確定苯酚的線性范圍、定量限，用以確定HPLC法在本實驗室的適用性及可控性。

一、概述

根據(jù)CNAS-CL10《檢測和校準(zhǔn)實驗室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在化學(xué)檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》中5.4“檢測和校準(zhǔn)方法及方法的確認(rèn)”的規(guī)定：“實驗室應(yīng)對首次采用的檢測方法進(jìn)行技術(shù)能力的驗證”，檢驗方法學(xué)的驗證是保證檢驗結(jié)果準(zhǔn)確可靠的關(guān)鍵因素。

二、驗證內(nèi)容

1.儀器與材料

1.1 樣品：中藥祛斑膏 ?TZH18000458。

1.2 方法選擇

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版中苯酚的測定，采用直接法，通過HPLC測定中藥祛斑膏中的苯酚的含量。

1.3 儀器及試藥

1.3.1高效液相色譜儀：Agilent 1260（紫外檢測器）。

1.3.2色譜柱：C18柱，（4.6*250mm*5μm）。

1.3.3試劑：甲醇 ?色譜級 德國默克 ?I0945607 812;苯酚對照品批號50804 含量以99.9%計。

1.3.4天平：賽多利斯電子天平（CPA225D）;

1.3.5超聲波清洗機(jī)

2.試驗方法 ?《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版中苯酚的測定，具體內(nèi)容如下：

2.1 色譜條件 ?色譜柱：C18柱，（4.6*250mm*5μm）;流動相：甲醇+水（58+42）;流速：1.0ml/min;檢測波長：280nm;柱溫：25℃;進(jìn)樣量：5μ。

2.2 苯酚標(biāo)準(zhǔn)儲備液的制備 ?準(zhǔn)確稱苯酚標(biāo)準(zhǔn)品0.1077g，用甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。此溶液甲醇含量為107.5923mg/100ml。

2.3標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備 ?取標(biāo)準(zhǔn)儲備液1、5、10、20ml于100ml容量瓶中，用甲醇定容，配制成濃度為10mg/L，50mg/L，100mg/L，200mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2.4 供試品溶液的制備 ?稱取1g樣品（精確至0.001g），于50mL容量瓶中，加甲醇定容，常溫超聲提取15min，4000rpm離心10min，精密移取上清液5ml于50ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，0.45μm濾膜過濾后待測。

2.5測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μL，注入色譜儀，測定，即得。

3.驗證項目

3.1系統(tǒng)適用性試驗

稱取供試品1.0725g，1.0810按供試品溶液的制備，制得供試品溶液;取2.4項下的的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為對照品溶液，按照上述色譜條件測定。

測試結(jié)果表明：在本實驗室內(nèi)該方法系統(tǒng)適用性能夠滿足要求。

3.2 精密度試驗

分別精密吸取2.4項下標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為200mg/L，按測定方法重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積值。對各次測得的峰面積值求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值，用以說明儀器精密度情況。

峰面積分別為735.11847;728.36633;731.68073;731.38043;732.82886;729.76147，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值RSD為0.003%，≤2%，說明儀器精密度良好。

3.3 線性關(guān)系與線性范圍考察

按照2.2所述配制苯酚標(biāo)準(zhǔn)儲備液，濃度苯酚為1.075923mg/ml，分別按照0.5→100ml、1mL→100mL、5mL→100mL、10mL→100mL、20mL→100mL溶液稀釋成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。分別取該工作溶液5μL注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

三、結(jié)論

根據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中苯酚的測定，通過HPLC進(jìn)行測定，對苯酚的測定項目進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗、精密度試驗、線性關(guān)系與線性范圍考察、檢測限、定量限、準(zhǔn)確度試驗（加樣回收試驗），各項試驗測試結(jié)果均能滿足要求，儀器性能穩(wěn)定，試驗結(jié)果滿意。從以上數(shù)據(jù)可以看出用該方法檢測化妝品中的苯酚的含量，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以在本實驗室運用此方法檢測化妝品中的苯酚的含量。

該方法中苯酚的方法檢出限為2.5mg/g，定量限為5mg/g，苯酚的線性范圍為0.00005379615mg/ml～0.00215184600mg/ml。

參考文獻(xiàn)

[1]《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）

[2]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典 2015版[M].四部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：374-377.