王首帆 徐宜厚 徐愛琴 朱立宏 秦宗碧 邱百怡

摘要目的：探討復(fù)方黃芩“水膜”外用對(duì)急性濕疹大鼠皮膚抗炎和抑制金黃色葡萄球菌的作用機(jī)制。方法：64只雄性大鼠根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為復(fù)方黃芩“水膜”觀察組（黃芩組）、黃蒲潔膚洗液組（黃蒲組）、硼酸液組（硼酸組）和生理鹽水組（鹽水組）4組，每組16只，鼠右耳予以100%二甲苯致炎后，分別用各組藥物濕敷1 h進(jìn)行干預(yù)。檢測(cè)大鼠右耳腫脹程度;常規(guī)HE染色，觀察各組每個(gè)視野100個(gè)表皮細(xì)胞中的炎性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)。采用試管稀釋法對(duì)4組所用藥物作連續(xù)對(duì)倍稀釋，觀察體外對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制情況。結(jié)果：1）與鹽水組比較，黃芩組、黃蒲組和硼酸組大鼠右耳腫脹度均下降（均P<0.05），其中黃芩組和硼酸組較黃蒲組顯著下降（P<0.05），而黃芩組與硼酸組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。2）與鹽水組比較，黃芩組、黃蒲組和硼酸組大鼠右耳表皮細(xì)胞中炎性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)均減少（均P<0.05），其中黃芩組和硼酸組較黃蒲組顯著減少（P<0.05），而黃芩組與硼酸組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。3）黃芩組最低抑菌濃度（MIC）為15.6 mg/mL（1∶16），藥物最小殺菌濃度（MBC）為7.8 mg/mL（1∶8），高于硼酸組（P<0.05）而低于黃蒲組（P<0.05）。結(jié)論：復(fù)方黃芩“水膜”外用治療急性濕疹能有效改善大鼠的腫脹度，具有良好的抗炎和抑制金黃色葡萄球菌的作用。

關(guān)鍵詞復(fù)方黃芩;“水膜”;急性濕疹;抗炎;金黃色葡萄球菌

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.01.017

濕疹是最常見的以皮損對(duì)稱分布、劇烈瘙癢等為臨床表現(xiàn)的一種過(guò)敏性炎性反應(yīng)性皮膚病，根據(jù)國(guó)內(nèi)普查發(fā)現(xiàn)其中以急性濕疹發(fā)病率最高，約占52%[13]。濕疹病因復(fù)雜，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要?dú)w因于環(huán)境等因素引起的皮膚過(guò)敏、感染等，因此針對(duì)濕疹病因病理主要以抗過(guò)敏藥物、抗組胺藥和皮質(zhì)類固醇激素為主要治療方案，這些外用制劑的治療雖然能夠控制急性濕疹的臨床癥狀，改善皮膚丘疹、滲出和瘙癢等癥狀，但是長(zhǎng)期使用這類藥物存在易反復(fù)發(fā)作、加重病情等不良反應(yīng)[47]。因此探尋安全有效的中藥外用制劑十分必要?？v觀古今文獻(xiàn)未見濕疹的病名，由古籍記載參照對(duì)應(yīng)臨床癥狀可得將濕疹歸屬于中醫(yī)學(xué)“瘡”“廯”和“風(fēng)”的范疇?！吨T病源候論·瘡病諸候》中有“瘡”的病因病機(jī)相關(guān)記載“濕熱相搏，故頭面身體皆生瘡。其瘡初如疙，須臾生汁，熱勝者則變?yōu)槟?，隨痙隨發(fā)”，認(rèn)為急性濕疹發(fā)病雖在表但病根在里，屬于先天稟賦不足，又外感六淫內(nèi)蘊(yùn)濕熱，內(nèi)外合邪浸淫肌膚發(fā)瘡瘍[89]。本研究選用復(fù)方黃芩“水膜”濕敷患處以清瀉濕熱、涼血消腫止癢，標(biāo)本兼治，觀察其抗炎和抑制金黃色葡萄球菌的作用?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料

64只雄性大鼠，體重為180～200 g，購(gòu)自武漢愛博泰克生物科技有限公司，許可證號(hào)：SCXX（鄂）20070029。動(dòng)物飼養(yǎng)于本單位動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，飼養(yǎng)條件：溫度（23±1）°C，濕度（50±1）%，以12/12 h為光暗周期。

1.2方法

1.2.1分組與模型制備根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為復(fù)方黃芩“水膜”觀察組（黃芩組）、黃蒲潔膚洗液組（黃蒲組）、硼酸液組（硼酸組）和生理鹽水組（鹽水組）4組，每組16只。同等環(huán)境下，正常供水和墊料，所有雄性大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，將大鼠右耳予以100%二甲苯致炎后。出現(xiàn)肉眼可見的右耳腫脹即為造模成功。見圖1。

1.2.2干預(yù)方法動(dòng)物造模后進(jìn)行干預(yù)。1）黃芩組：以復(fù)方黃芩“水膜”（即復(fù)方黃芩水煎劑精制而成的濃縮藥液“水膜”）濕敷右耳;2）黃蒲組：以黃蒲潔膚洗液（廠家五〇五藥業(yè)有限公司;國(guó)藥準(zhǔn)字B20021012藥味組成：黃柏、蛇床子、黃連、土茯苓、白鮮皮、苦參、百部、虎杖、蒲公英、丹參、丁香、地膚子）濕敷右耳;3）硼酸組：以硼酸液（廠家東莞市輝宏化工有限公司;生產(chǎn)批號(hào)29182942）濕敷右耳;4）鹽水組：以生理鹽水濕敷右耳。以上4組均濕敷1 h，分6次濕敷（每次間隔10 min），10 min/次。

1.2.3檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.3.1大鼠右耳腫脹程度每組8只大鼠麻醉處死，切除大鼠左右兩耳，右耳腫脹程度為兩耳的重量差。

1.2.3.2大鼠表皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)每組隨機(jī)選取8只大鼠，麻醉處死后取大鼠右耳于10%多聚甲醛中固定，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)技術(shù)石蠟包埋，連續(xù)切片，4 μm/片，常規(guī)HE染色，觀察各組每個(gè)視野100個(gè)表皮細(xì)胞中的炎性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)。

1.2.3.3體外對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制將金黃色葡萄球菌（ATCC25923，中國(guó)藥品生物制品檢定所）接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，培養(yǎng)傳代，配成2×108/mL的菌液，采用試管稀釋法對(duì)4種藥物作連續(xù)對(duì)倍稀釋（每個(gè)試管總量為1 mL），再加入10 μL菌液，比較找出對(duì)金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度（MIC）;同時(shí)再轉(zhuǎn)種于固定培養(yǎng)基，觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，找出藥物的最小殺菌濃度（MBC）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（百分率）表示，采用非參數(shù)χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1復(fù)方黃芩“水膜”對(duì)大鼠右耳腫脹度的影響與鹽水組比較，黃芩組、黃蒲組和硼酸組大鼠右耳的腫脹度均下降（P<0.05），其中黃芩組和硼酸組較黃蒲組顯著下降（P<0.05），而黃芩組與硼酸組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2各組大鼠表皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察與鹽水組比較，黃芩組、黃蒲組和硼酸組大鼠右耳表皮細(xì)胞中炎性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)均減少（P<0.05），其中黃芩組和硼酸組較黃蒲組顯著減少（P<0.05），而黃芩組與硼酸組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1、圖2、表2。

2.3各組對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用黃芩組MIC為15.6 mg/mL（1∶16），MBC為7.8 mg/mL（1∶8），高于硼酸組（P<0.05）而低于黃蒲組（P<0.05）。見表2。

3討論

《黃帝內(nèi)經(jīng)》原文以“諸痛癢瘡，皆屬于心”和“營(yíng)氣不從，逆于肉里，乃生癰腫”道出急性濕疹的病因病機(jī)，心火旺盛，脾虛生濕，心火旺而耗血傷陰，脾虛，脾失健運(yùn)，濕熱內(nèi)蘊(yùn)而血燥風(fēng)動(dòng)，不能及時(shí)滋養(yǎng)肌膚;又外感風(fēng)濕熱邪，心主血脈，血熱偏虛，濕熱淫邪內(nèi)外相搏，肌膚浸淫而發(fā)瘡。中醫(yī)外治法歷史悠久、療效確切，采用在急性濕疹患者局部外用藥，使藥力直接作用于病所，從而達(dá)到治病的目的[1013]。急性濕疹好發(fā)于皮膚，其病位表淺，丘疹、膿皰等病灶外露可見，采用中藥外治的方法不僅可以使藥力直達(dá)病所，藥物直接作用于患處而透達(dá)腠理，疏暢患處所處經(jīng)脈，調(diào)和氣血，扶正祛邪，還能通過(guò)腠理毛竅，經(jīng)皮給藥透皮吸收循經(jīng)深入臟腑，內(nèi)外合治，治標(biāo)的同時(shí)兼顧治本，療效更顯著。經(jīng)皮給藥具有諸多優(yōu)勢(shì)，比如使藥效不被胃腸道酶、消化液、PH值等口服藥物必經(jīng)的渠道所虛弱，因此近年來(lái)醫(yī)者對(duì)中藥外用制劑的研究從透皮吸收機(jī)制研究、透皮吸收促進(jìn)劑研究等方面展開，并取得不錯(cuò)的研究成果。目前中藥外用制劑劑型繁多，有水劑、油劑、酊劑、糊劑和軟膏劑等，其中水劑屬于“水膜”療法，即將外用中藥以水煎煮獲得濃縮藥液后濕敷于患處，形成一個(gè)“水膜”的隔離效應(yīng)，使外界與皮損暫時(shí)隔斷，促進(jìn)藥物發(fā)揮透達(dá)腠理，疏暢患處所處經(jīng)脈、調(diào)和氣血、扶正祛邪的作用;而其他諸如油劑、酊劑、糊劑和軟膏劑等劑型，需要復(fù)雜的制備工藝才能實(shí)現(xiàn)，不如“水膜”便利、價(jià)廉[14]。因此本研究選擇復(fù)方黃芩“水膜”的外用治療方法，結(jié)果顯示復(fù)方黃芩“水膜”可有效改善急性濕疹大鼠耳廓腫脹程度。

急性濕疹一種具有急性炎性反應(yīng)的常見過(guò)敏性炎性反應(yīng)性皮膚病，中醫(yī)學(xué)臨床癥狀主要體現(xiàn)在局部患處皮膚紅、腫、熱;全身癥狀則以心煩、口渴、舌紅、苔黃、尿黃、便干等表現(xiàn)出炎性反應(yīng)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究[1517]中發(fā)現(xiàn)，急性濕疹皮損處組織炎性反應(yīng)時(shí)釋放炎性反應(yīng)遞質(zhì)，比如組胺、5羥色胺（5HT）、前列腺素E2（PGE2）等，這些炎性反應(yīng)遞質(zhì)的釋放造成皮損局部血流速度增速，血管擴(kuò)張;血液代謝增加充血;血液產(chǎn)熱增加而導(dǎo)致皮損處皮膚顏色變紅，溫度升高;而這些炎性反應(yīng)又會(huì)進(jìn)一步引起局部充血和毛細(xì)血管壁通透性增高，積聚滲出物而致局部皮膚紅腫。本研究結(jié)果顯示：與鹽水組比較，黃芩組、黃蒲組和硼酸組大鼠右耳的表皮細(xì)胞中炎性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)均減少，其中黃芩組和硼酸組較黃蒲組顯著減少，而黃芩組與硼酸組間未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示復(fù)方黃芩“水膜”治療急性濕疹具有一定的抗炎作用。

急性濕疹最常見的并發(fā)癥就是繼發(fā)感染，最常見因素是患者由于瘙癢難忍而搔抓，造成原來(lái)的濕疹皮損感染出現(xiàn)周圍現(xiàn)膿皰及膿性分泌物。研究表明，在急性濕疹中感染菌種以金黃色葡萄球菌陽(yáng)性率最高，且高于亞急性、慢性濕疹的金黃色葡萄球菌檢出率，說(shuō)明金黃色葡萄球菌與急性濕疹繼發(fā)感染密切相關(guān)。臨床上在瘙癢搔抓皮膚增厚瘙癢的循環(huán)中，細(xì)菌感染反復(fù)加重，增加急性濕疹的皮損滲出分泌物，而這些分泌物可能為金黃色葡萄球菌寄生提供了一定生存條件[1819]。本研究結(jié)果顯示，黃芩組MIC為15.6 mg/mL（1∶16），MBC為7.8 mg/mL（1∶8），高于硼酸而低于黃蒲組，提示復(fù)方黃芩“水膜”在體外急性濕疹研究中具有一定的抑制金黃色葡萄球菌的作用。

總之，復(fù)方黃芩“水膜”外用治療急性濕疹能有效改善大鼠的腫脹度，減少大鼠右耳的表皮細(xì)胞中炎性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)，同時(shí)抑制金黃色葡萄球菌，有效改善大鼠急性濕疹的癥狀，療效顯著，為臨床廣泛應(yīng)用提供了基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（2017-07-07收稿責(zé)任編輯：張雄杰）