劉鋒 馬艷芳 張靜

摘要?目的：研究牛黃的主要成分牛磺酸（Taurine）對(duì)1型糖尿病小鼠主動(dòng)脈僵硬度和內(nèi)皮功能障礙的影響。方法：健康的雄性C57BL/6J小鼠30只，隨機(jī)分為CON組、MD組和MD+?；撬峤M，每組10只。采用SphygmoCor脈搏分析系統(tǒng)分析主動(dòng)脈脈搏流速（APV）m/s、主動(dòng)脈脈搏波增強(qiáng)指數(shù)（API）和主動(dòng)脈脈搏波增強(qiáng)指數(shù)（AIX）等指標(biāo)反映主動(dòng)脈僵硬度;采用氧化酶法、放射免疫法分別檢測(cè)血清葡萄糖水平和胰島素含量;根據(jù)血管周?chē)M織內(nèi)皮依賴(lài)性擴(kuò)張（EDD%）和內(nèi)皮獨(dú)立擴(kuò)張（EID%）評(píng)價(jià)主動(dòng)脈內(nèi)皮功能;采用RT-PCR法、Western blot方法對(duì)胸主動(dòng)脈組織細(xì)胞eNOS mRNA表達(dá)水平及eNOS在不同處理組細(xì)胞中蛋白表達(dá)情況進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：MD組（MD組）與正常對(duì)照組（CON組）比較，其主動(dòng)脈內(nèi)膜破壞嚴(yán)重，內(nèi)皮細(xì)胞的體積增大，甚至部分脫落和間隙增大，中膜平滑肌細(xì)胞排列紊亂。與MD組比較，MD+TUDCA組（MD+牛磺酸）組主動(dòng)脈壁各層細(xì)胞的排列較整齊，病變減輕。MD+?；撬峤M小鼠體質(zhì)量及空腹血清胰島素水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而空腹血糖升高至（22.4±4.6）mmol/L，ISI降低（P<0.05）;且APV、API和AIX均減輕或降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與MD比較，MD+?；撬峤MeNOS mRNA表達(dá)上調(diào)，?；撬峥商岣遝NOS蛋白水平的表達(dá)（P<0.01）。結(jié)論：長(zhǎng)期服用牛磺酸對(duì)1型糖尿病小鼠主動(dòng)脈僵硬度有改善作用，還可以通過(guò)增加機(jī)體一氧化氮活性和提高機(jī)體抗氧化能力從而預(yù)防小鼠內(nèi)皮功能障礙，其可能是治療及預(yù)防糖尿病血管功能障礙的有效藥物。

關(guān)鍵詞??；撬?1型糖尿病;內(nèi)皮功能;主動(dòng)脈硬化;脈搏波速度;血管周?chē)M織

Effects of Taurine on Aortic Stiffness and Endothelial Dysfunction in Type 1 Diabetic Mice

Liu Feng， Ma Yanfang， Zhang Jing

（Department of Pediatrics， Affiliated Hospital of Shaanxi University of Chinese Medicine， Xianyang 712083，China）

Abstract?Objective：To study the effects of the main component of Calculus Bovis， Taurine on aortic stiffness and endothelial dysfunction in type 1 diabetic mice.Methods：A total of 30 healthy male C57BL/6J mice were randomly divided into a CON group（n=10）， a MD group（n=10）and a MD+ Taurine group（n=10）.Aortic pulse velocity（APV）m/s， aortic pulse wave enhancement index（API）and aortic pulse wave enhancement index（AIX）were analyzed by SphygmoCor pulse analysis system to reflect aortic stiffness.Oxidase and radioimmunoassay were used to measure serum glucose levels and insulin levels， respectively.According to the endothelial-dependent dilation（EDD%）and endothelial-independent dilation（EID%）， the endothelial functionob in peripheral tissues was evaluated.The expression level of eNOS mRNA in aortic tissue and expression of eNOS protein in cells of different treatment groups were measured by RT-PCR and Western blot.Results：Compared with the normal control group（CON group）， the model group（MD group）mice showed more serious aortic intima destruction， the volume of endothelial cells was significantly increased， even partial shedding， and the arrangement of mesangial smooth muscle cells was disordered.Compared with the MD group， cells in the aortic wall of the sulfonated deoxycholic acid intervention group（MD+Taurine）were arranged orderly and the lesions were significantly reduced.There was no significant difference in body weight and fasting serum insulin level（P>0.05）.However， fasting blood glucose was significantly increased to （22.4±4.6）mmol/L， while ISI， APV， API and AIX were reduced or decreased， with statistically significant differences（P<0.05）.Compared with MD group， eNOS mRNA expression in MD+Taurine group was significantly increased.The results indicated that the expression level of eNOS protein was significantly increased by sulphuric deoxycholic acid and the difference was statistically significant（P<0.01）.Conclusion：Sulfonic deoxycholic acid has an effect on aortic stiffness in type 1 diabetic mice， and it can prevent endothelial dysfunction in mice by increasing nitric oxide activities and increasing antioxidant capacity.It may be an effective medicine for the prevention and treatment of diabetic vascular dysfunction.

Key Words?Taurine; Diabetes mellitus type 1; Endothelial function; Arteriosclerosis; Aorta pulse wave velocity; Perivascular tissue

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.12.018

目前，1型糖尿?。═ype 1 Diabetes Mellitus，T1DM）患者的數(shù)量有增無(wú)減，在美國(guó)2 500多萬(wàn)人患有T1DM，另外，還有5 000萬(wàn)人診斷屬于糖尿病前期[1]。在眾多與T1DM相關(guān)的疾病中，心血管疾?。–ardiovascular Disease，CVD）是最常見(jiàn)和最嚴(yán)重的。T1DM患者一生中發(fā)生CVD的可能性是非糖尿病患者的兩倍多，CVD是糖尿病患者最常見(jiàn)的死亡原因，占糖尿病相關(guān)死亡的近70%[2-3]。連接T1DM和CVD的關(guān)鍵之一是血管功能障礙的發(fā)展，尤其是血管功能障礙的2個(gè)組成部分導(dǎo)致與糖尿病相關(guān)的CVD，包括動(dòng)脈硬化和內(nèi)皮功能障礙。動(dòng)脈硬化和內(nèi)皮功能障礙都是心血管疾病的臨床表現(xiàn)，兩者都是未來(lái)T1DM心血管事件的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子[4-6]。因此，許多專(zhuān)家學(xué)者為確定糖尿病動(dòng)脈硬化和內(nèi)皮功能障礙的潛在原因已經(jīng)作出了相當(dāng)大的努力。盡管付出很大的努力，但導(dǎo)致其發(fā)展的起始事件仍不清楚。

一氧化氮合成酶（Nitric Oxide Synthase，eNOS）首次由Forstermann和Poiiock在內(nèi)皮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，其廣泛有于血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、腎小管上皮細(xì)胞和一些能產(chǎn)生少量一氧化氮的其他類(lèi)型細(xì)胞，一種旨在恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)[7]的自適應(yīng)通路。雖然eNOS是防御內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的第一道防線，但eNOS的慢性激活會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙和死亡，它已被牽連到心包代謝疾病的病理生理學(xué)[8-9]。eNOS應(yīng)激的治療方法，如化學(xué)伴侶牛磺酸（?；撬幔?，已被證明可以緩解與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的幾種心血管代謝疾病[10-11]。

中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為動(dòng)脈僵硬度的增加和痰濁與瘀血密不可分，心主血脈，肺朝百脈，肝藏血，腎藏精，精血同源，因此痰濁與瘀血的發(fā)生同肺脾腎三臟功能的失常具有重要關(guān)系，痰濁和瘀血是動(dòng)脈粥樣硬化引發(fā)的臨床表現(xiàn)。牛黃（Calculus Bovis）有益氣強(qiáng)心、溫通化濕的功效。牛黃的主要成分?；撬峥梢栽黾有募〉娜毖跄褪苄?，增強(qiáng)冠狀動(dòng)脈的血液流量減少冠脈痙攣的發(fā)生;能清除體內(nèi)自由基，減少炎性反應(yīng)性反應(yīng)的發(fā)生，有效減少心肌的耗氧量;可提高心肌的收縮能力。因此，本研究旨在探討?；撬幔═aurine）對(duì)T1DM小鼠主動(dòng)脈僵硬度和內(nèi)皮功能障礙的影響。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?動(dòng)物?健康的雄性C57BL/6J小鼠30只，體質(zhì)量（200～250）g，飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)的動(dòng)物房，光照周期12 h，溫度（25±3）℃，相對(duì)濕度55%～60%。所有大鼠正?；顒?dòng)，每天自由飲水及進(jìn)食。所有的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物程序都符合動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)的審查和批準(zhǔn)。

1.1.2?藥物?牛磺酸注射液（重慶制藥六廠，生產(chǎn)批號(hào)018254）;生理鹽水（上海信誼藥廠，生產(chǎn)批號(hào)：019433）。

1.1.3?試劑與儀器?Trizol（Life Technologies，Grand Island，NY，USA）;SphygmoCor脈搏分析系統(tǒng);壓力肌電室（DMT Inc.，亞特蘭大，GA，美國(guó)）;小動(dòng)物監(jiān)護(hù)儀（MouseMonitor S，Indus Instruments，美國(guó)）;iScript（美國(guó)Bio-Rad大力神，CA）;二辛可寧酸蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒（Pierce Biotechnology，USA）。

1.2?方法

1.2.1?分組與模型制備?T1DM模型NOD小鼠（動(dòng)物的來(lái)源：中國(guó)嚙齒類(lèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心上海分公司;體質(zhì)量18～22 g;8周齡）。生物學(xué)特性：NOD小鼠自身免疫性胰島炎最早發(fā)生于4周齡，于12周齡時(shí)出現(xiàn)明顯糖尿病癥狀。發(fā)病后，在幾周的時(shí)間內(nèi)，血糖迅速升高，飲水量劇增，大量地排尿，體質(zhì)量迅速下降，在這個(gè)過(guò)程中，患鼠血糖呈先迅速上升，后逐步下降，但仍維持高于正常值的狀態(tài)，體質(zhì)量直線下降，最后昏迷而死亡。判定指標(biāo)：NOD糖尿病小鼠與同周齡正常NOD小鼠比較，體質(zhì)量明顯減輕，血糖明顯升高。采尾血檢測(cè)小鼠空腹血糖，空腹血糖≥16.7 mmol/L則模型成功。將制備成功的T1DM小鼠20只隨機(jī)分為MD組（10只）;經(jīng)腹腔注射?；撬峤M（10只）于STZ用藥1周后開(kāi)始每日250 mg/kg，連續(xù)4周。在4周的干預(yù)后，所有小鼠大約6個(gè)月大時(shí)被處死。小鼠分為3組：1）CON組;2）MD組;3）MD+TUDCA組，每組小鼠10只。

1.2.2?干預(yù)方法?用異氟醚麻醉小鼠，心臟穿刺抽血處死小鼠。在冰冷生理鹽水（PSS：0.288 g NaH2PO4，1.802 g葡萄糖，0.44 g丙酮酸鈉，20.0 g BSA，21.48 g NaCl，0.875 g KCl，0.7195 g MgSO4·7H2O，13.9 g MOPS鈉鹽在pH值7.4下，每升溶液EDTA為0.185 g，并在液氮中閃凍，以供日后分析。簡(jiǎn)單地說(shuō)，頸動(dòng)脈和二級(jí)腸系膜動(dòng)脈在冰冷的PSS中切除，放置在裝有熱PSS的壓力肌電室（DMT Inc.，亞特蘭大，GA，美國(guó)）中，置入玻璃微管，用縫合線固定。

1.2.3?檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.3.1?血清生化指標(biāo)測(cè)定?小鼠檢測(cè)體質(zhì)量/周和空腹血糖/周。小鼠于喂養(yǎng)4周后，采剪尾血檢空腹血糖，以放射免疫法測(cè)定空腹血清胰島素水平，并計(jì)算胰島素敏感指數(shù)（Insulin Sensitivity In-dex，ISI）進(jìn)而評(píng)價(jià)模型優(yōu)劣，小鼠體質(zhì)量、血糖、血清胰島素水平和胰島素抵抗指數(shù)的測(cè)定，計(jì)算公式：ISI=In[1/（空腹血糖×空腹血清胰島素）]。

1.2.3.2?主動(dòng)脈僵硬度分析?采用SphygmoCor脈搏分析系統(tǒng)分析主動(dòng)脈脈搏流速（m/s）、主動(dòng)脈脈搏波增強(qiáng)指數(shù)（API）和主動(dòng)脈脈搏波增強(qiáng)指數(shù)（AIX）等指標(biāo)反映主動(dòng)脈僵硬度，比較2組患者治療前后上述諸指標(biāo)變化間差異。用2%異氟醚和氧在2 L/min時(shí)對(duì)小鼠進(jìn)行麻醉，仰臥在加熱板上，腿固定在心電圖電極上，通過(guò)調(diào)整異氟醚濃度，維持目標(biāo)心率約為450次/min。多普勒探針（20 mhz;鼠標(biāo)多普勒數(shù)據(jù)采集系統(tǒng);在橫斷主動(dòng)脈弓和腹主動(dòng)脈放置小動(dòng)物監(jiān)護(hù)儀（Indus Instruments，美國(guó)），用精密卡尺測(cè)量探針之間的距離。預(yù)射時(shí)間，即心電圖的r波和多普勒信號(hào)的腳之間的時(shí)間，被確定為每個(gè)位點(diǎn)。主動(dòng)脈脈搏波速度（aPWV）的計(jì)算方法是將探針之間的距離（cm）除以胸腔和腹腔區(qū)域的預(yù)射時(shí)間（s）差。

1.2.3.3?血管超聲檢測(cè)血管內(nèi)皮功能?Accuson 128×P/10超聲儀在肘關(guān)節(jié)上2～10 cm描記右肱動(dòng)脈長(zhǎng)軸二維圖像，調(diào)節(jié)深度及增益得到最清晰的動(dòng)脈壁與腔的分界面，所有的圖像均錄像在VHS錄像帶上，同時(shí)通過(guò)CVI acquirsion軟件，每3 s輸入計(jì)算機(jī)1幅舒張期圖像。第1 min的掃描后，袖帶充氣至300 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），持續(xù)5 min后放氣并誘發(fā)反應(yīng)性高血流，再持續(xù)記錄3 min的圖像，休息10 min后，再描記1 min基礎(chǔ)圖像后，舌下給予0.4 mg硝酸甘油噴霧劑，再記錄5 min。圖像分析：用CVI分析軟件，測(cè)量動(dòng)脈內(nèi)膜面至內(nèi)膜面。內(nèi)皮依賴(lài)性擴(kuò)張（EDD%）：內(nèi)皮依賴(lài)的血流量介導(dǎo)的擴(kuò)張反應(yīng)[FMD（%）]=100×（D最大值-D基礎(chǔ)值）/D基礎(chǔ)值。內(nèi)皮獨(dú)立擴(kuò)張（EID%）：硝酸甘油介導(dǎo)的擴(kuò)張反應(yīng)[GTN-MD（%）]=100×（D最大值-D基礎(chǔ)值）/D基礎(chǔ)值。

1.2.3.4?總RNA分離提取，cDNA合成和實(shí)時(shí)熒光PCR?使用Trizol（Life Technologies，Grand Island，NY，USA）進(jìn)行主動(dòng)脈和PVAT RNA的分離?；パa(bǔ)脫氧核糖核酸合成使用iScript（美國(guó)Bio-Rad大力神，CA）從0.25 μg/μL RNA 20 μL反應(yīng)。引物序列見(jiàn)表1。樣本運(yùn)行在重復(fù)使用一個(gè)iCycler和智商SYBR綠色Supermix（Bio-Rad）兩步放大（95 ℃ 10 min，其次是退火30 min 60 ℃）總共40循環(huán)?；虻谋磉_(dá)模式是標(biāo)準(zhǔn)化的持續(xù)表達(dá)β2微球蛋白基因作為參考。數(shù)據(jù)歸一化，計(jì)算每個(gè)樣本的△Cq派生的減去Cq參考基因的基因的興趣。相對(duì)定量（△△Cq）被減去派生的△Cq實(shí)驗(yàn)樣本的平均△Cq對(duì)照組。計(jì)算2△△Cq褶皺變化差異。

1.2.3.5?eNOS蛋白表達(dá)水平的測(cè)定?秤取小鼠主動(dòng)脈以提取總蛋白，使用二辛可寧酸蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒（Pierce Biotechnology，USA）通過(guò)BCA方法定量蛋白質(zhì)濃度。然后，將30 μg蛋白質(zhì)加載到6%～10%聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行電泳，然后電轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。在室溫下用5%脫脂乳封閉印跡1 h，并在4 ℃下在以下（1∶200稀釋?zhuān)┮豢怪蟹跤^(guò)夜。用Tris-bu加入鹽水沖洗后0.1%吐溫-20，將印跡（1∶500稀釋?zhuān)┡c二抗在室溫下孵育1 h。然后使免疫印跡與SuperSignal West Pico Substrate反應(yīng)，使用成像系統(tǒng)檢測(cè)化學(xué)發(fā)光，并使用Quantity One軟件進(jìn)行光密度分析，測(cè)定與β-肌動(dòng)蛋白的各條帶灰度比值，以反映目的蛋白表達(dá)水平。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法?采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析;計(jì)量資料采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析或者重復(fù)測(cè)量的方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用百分率（%）表示，組間比較采用χ2分析;以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1??；撬釋?duì)小鼠胸主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)?HE染色后在放大200倍的光學(xué)顯微鏡下觀察，結(jié)果如圖1所示。CON組小鼠的主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑，內(nèi)皮細(xì)胞組織完整，無(wú)缺損和增厚現(xiàn)象;且中膜層的平滑肌細(xì)胞清晰可見(jiàn)，排列整齊，無(wú)增生。MD組（MD組）與正常對(duì)照組（CON組）比較，其主動(dòng)脈內(nèi)膜破壞嚴(yán)重，內(nèi)皮細(xì)胞的體積增大，甚至部分脫落和間隙增大，中膜平滑肌細(xì)胞排列紊亂。與MD組比較，MD+TUDCA組（MD+?；撬幔┙M主動(dòng)脈壁各層細(xì)胞的排列較整齊，病變減輕。

2.2?小鼠體質(zhì)量、血糖、血清胰島素水平和胰島素抵抗指數(shù)的測(cè)定?與正常對(duì)照組比較，MD+TUDCA組（MD+TUDCA組）小鼠體質(zhì)量及空腹血清胰島素水平均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而空腹血糖升高至（22.4±4.6）mmol/L，ISI降低（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3?各組反映主動(dòng)脈僵硬度指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果?結(jié)果比較分析表明，與MD組比較，MD+TUDCA組（MD+TUDCA組）主動(dòng)脈脈波流速、主動(dòng)脈脈搏波增強(qiáng)指數(shù)及主動(dòng)脈膨脹度均減輕或降低（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

2.4?各組血管內(nèi)皮功能評(píng)估結(jié)果?為了檢查動(dòng)脈血管內(nèi)皮功能的區(qū)域差異，我們?cè)u(píng)估了CON組和MD組小鼠的EDD。MD組小鼠動(dòng)脈EDD受損，與ER應(yīng)激抑制劑牛磺酸一起孵育1 h后，從同一小鼠分離出的其他腸系膜動(dòng)脈EDD增加（35.12±6.13）%差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），MD和MD+?；撬峤M動(dòng)脈EID差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表4。

2.5?實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定mRNA相關(guān)基因表達(dá)?各組小鼠eNOS mRNA表達(dá)的水平。與CON組（CON組）比較，MD組中eNOS mRNA表達(dá)水平下降（P<0.01）;與MD比較，MD+牛磺酸組eNOS mRNA表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見(jiàn)表5，圖2。

2.6?Western blot法檢測(cè)蛋白水平表達(dá)?Western blot法檢測(cè)eNOS蛋白水平表達(dá)結(jié)果顯示，與CON組（CON組）比較，MD組中eNOS蛋白水平表達(dá)降低（P<0.05）。由此可知，?；撬峥芍岣遝NOS蛋白水平的表達(dá)。見(jiàn)表6，圖3。

3?討論

糖尿病是一種嚴(yán)重影響人類(lèi)健康的常見(jiàn)和多發(fā)病，具有致殘和病死的危險(xiǎn)。會(huì)快速發(fā)展的動(dòng)脈粥樣硬化（Athrosclero-sis，As）導(dǎo)致糖尿病[12]。以前的研究證實(shí)[13]急性動(dòng)脈內(nèi)注射5-甲基四氫葉酸（C-5-methyltetrahydrofolate，5-NTTHF）可提高T1DM患者的局部血管內(nèi)皮功能。此外，長(zhǎng)期口服葉酸對(duì)T1DM血管內(nèi)皮功能的研究表明[14]，其可預(yù)防和改善T1DM內(nèi)功能的損傷。但是牛磺酸對(duì)T1DM主動(dòng)脈僵硬度和內(nèi)皮功能的影響未見(jiàn)報(bào)道。本文用T1DM小鼠模型研究?；撬釋?duì)T1DM內(nèi)皮功能影響及機(jī)制進(jìn)行了探究。

“中焦受氣取汁，變化而赤是為血”（《靈樞·決氣》），血行脈中，“血載氣，氣行血”，“氣為血之帥”，“血為氣之母”。而“血?dú)獠缓?，百病乃變化而生”（《素?wèn)·調(diào)經(jīng)論》）。絡(luò)病學(xué)說(shuō)講絡(luò)氣郁滯或虛氣留滯與神經(jīng)內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)功能異常及血管內(nèi)皮功能障礙機(jī)制相類(lèi)似。牛黃是脊索動(dòng)物門(mén)哺乳綱?？苿?dòng)物牛膽囊的膽結(jié)石，?；撬崾桥｜S的主要活性成分。牛黃（Calculus Bovis）有益氣強(qiáng)心、溫通化濕的作用。?；撬峋哂袃?nèi)皮保護(hù)、抗氧化、抗內(nèi)源性損傷、降低高膽固醇血癥、抗平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡等作用。?；撬嵴{(diào)節(jié)多種細(xì)胞的功能，包括抗氧化作用、離子運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)、神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)及與膽汁酸的結(jié)合等。研究證實(shí)，?；撬釋?duì)胰島素依賴(lài)性、非胰島素依賴(lài)性以及胰島素耐受性的1型早發(fā)型糖尿病的有效性。?；撬嵊欣诜乐蜹1DM患兒的并發(fā)癥，包括視網(wǎng)膜病變、腎病、神經(jīng)病變、動(dòng)脈粥樣硬化和心肌病。

糖尿病患者由于基質(zhì)發(fā)生退化并出現(xiàn)彈力層破碎與斷裂，使得膠原與鈣質(zhì)發(fā)生沉積，主動(dòng)脈與大動(dòng)脈的擴(kuò)張?jiān)斐蓜?dòng)脈僵硬度的增加，而對(duì)于病程較長(zhǎng)的患者還會(huì)由于糖基化的終產(chǎn)物通過(guò)血管的內(nèi)皮功能修復(fù)劑炎性反應(yīng)性反應(yīng)造成動(dòng)脈僵硬度的增加。本研究首次證明?；撬釋?duì)動(dòng)脈硬化具有保護(hù)作用。結(jié)果顯示，MD組（MD組）與正常對(duì)照組（CON組）比較，其主動(dòng)脈內(nèi)膜破壞嚴(yán)重，內(nèi)皮細(xì)胞的體積增大，中膜平滑肌細(xì)胞排列紊亂。MD+?；撬峤M主動(dòng)脈壁各層細(xì)胞的排列較整齊，病變減輕。MD+?；撬峤M小鼠空腹血糖升高，ISI降低;且APV、API和AIX減輕或降低。eNOS mRNA表達(dá)上調(diào)，表明牛磺酸提高eNOS蛋白水平的表達(dá)。MD小鼠腸系膜動(dòng)脈EDD受損，而頸動(dòng)脈未發(fā)現(xiàn)損傷。沿著動(dòng)脈差異功能的這一發(fā)現(xiàn)證實(shí)腸系膜動(dòng)脈比頸動(dòng)脈更容易受到代謝紊亂的影響。Kozakova M[15]發(fā)現(xiàn)，?；撬峤o藥可以逆轉(zhuǎn)高脂飲食引起的內(nèi)皮功能障礙和主動(dòng)脈內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。eNOS酶是二聚體結(jié)構(gòu)，含有相同的2個(gè)亞基，每個(gè)亞基分為2個(gè)區(qū)，C-端為還原酶區(qū)，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）及鈣調(diào)蛋白（CaM）結(jié)合位點(diǎn);N-端為氧化酶區(qū)，含四氫生物蝶呤（BH4）、血紅素和L-精氨酸等結(jié)合位點(diǎn)。eNOS可催化黃素介導(dǎo)的電子從結(jié)合NADPH的C末端轉(zhuǎn)移至N末端氧化酶區(qū)的血紅素。最近，F(xiàn)ountoulakis N等[16]人報(bào)道牛磺酸恢復(fù)了轉(zhuǎn)基因MD小鼠對(duì)乙酰膽堿的反應(yīng)。除了Fountoulakis N等報(bào)道的?；撬釋?duì)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮功能的有益作用外，Camila M等[17]對(duì)?；撬岣纳屏送庵苎軆?nèi)的內(nèi)皮功能（即血管內(nèi)皮功能）。DB小鼠的EID被削弱，這些小鼠的內(nèi)皮細(xì)胞和底層平滑肌細(xì)胞都有廣泛的血管功能障礙。然而，?；撬釋?duì)EID反應(yīng)沒(méi)有影響，說(shuō)明?；撬岬谋Ｗo(hù)作用是針對(duì)EDD的。與之前的研究一致，Ikonomidis I等[18]研究發(fā)現(xiàn)慢性牛磺酸治療降低了DB小鼠的動(dòng)脈硬化。這與其他證明MD小鼠aPWV比CON小鼠升高的研究結(jié)果一致。

研究表明[18-20]急性牛磺酸治療和慢性?；撬嶂委熅赐耆孓D(zhuǎn)血管功能障礙。這可能是由于?；撬釋?duì)ER應(yīng)激的不完全抑制，而ER應(yīng)激標(biāo)志物在主動(dòng)脈和PVAT中的部分減少支持了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。另外，它可能表明其他因素，獨(dú)立于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，導(dǎo)致DB小鼠的血管損傷。研究表明[21-24]在被檢測(cè)的4種UPR遞質(zhì)中，eNOS mRNA通常是在基因水平而不是蛋白水平上確定的，因?yàn)槿コ?6個(gè)核苷酸內(nèi)含子會(huì)導(dǎo)致eNO翻譯。在剩余的UPR標(biāo)記中缺乏蛋白質(zhì)表達(dá)量有限制作用。MD/mb小鼠菌株是T1DM研究中經(jīng)常使用的菌株;然而，動(dòng)物模型在代謝紊亂的嚴(yán)重程度和對(duì)人類(lèi)疾病的適用性方面并非沒(méi)有一定的局限性。

總之，盡管仍有許多問(wèn)題沒(méi)有得到解答，但?；撬峥梢愿纳芃D小鼠的EDD，降低動(dòng)脈硬化，其可能是治療及預(yù)防糖尿病血管功能障礙的新藥物。

參考文獻(xiàn)

[1]Lee DM，Battson ML，Jarrell DK，et al.SGLT2 inhibition via dapagliflozin improves generalized vascular dysfunction and alters the gut microbiota in type 2 diabetic mice[J].Cardiovasc Diabetol，2018，17（1）：62.

[2]Oikonomou E，Antonopoulos A，Gouliopoulos N，et al.Arteriosclerosis and endothelial function are used to assess the risk of new diabetic retinopathy in type 2 diabetes[J].Journal of the American College of Cardiology，2018，71（11）：A2085.

[3]Moreno B，de Faria AP，AMV R，et al.Glycated hemoglobin correlates with arterial stiffness and endothelial dysfunction in patients with resistant hypertension and uncontrolled diabetes mellitus[J].J Clin Hypertens（Greenwich），2018，20（5）：910-917.

[4]CRL C，Leite NC，Salles GC，et al.Aortic stiffness and ambulatory blood pressure as predictors of diabetic kidney disease：a competing risks analysis from the Rio de Janeiro Type 2 Diabetes Cohort Study[J].Diabetologia，2018，61（2）：455-465.

[5]Abdu F，Mai A.Effect of Conjugated Bile Salt Taurine on Mice Colonic Motor Activity[J].Periodicum Biologorum，2016，118（2）：124-126.

[6]James L，Yan K，Pence L，et al.Comparison of Bile Acids and Acetaminophen Protein Adducts in Children and Adolescents with Acetaminophen Toxicity[J].PLoS One，2015，10（7）：e0131010.

[7]Dos SKM，Vieira AD，Salles HO，et al.Safety，beneficial and technological properties of Enterococcus faecium isolated from Brazilian cheeses[J].Braz J Microbiol，2015，46（1）：237-249.

[8]Gray DW，Welsh MD，Doherty S，et al.Identification of systemic immune response markers through metabolomic profiling of plasma from calves given an intra-nasally delivered respiratory vaccine[J].Vet Res，2015，46（14）：7-8.

[9]Aguiari P，Iop L，F(xiàn)avaretto F，et al.In vitro comparative assessment of decellularized bovine pericardial patches and commercial bioprosthetic heart valves[J].Biomed Mater，2017，12（1）：015021.

[10]Boncelj SM，Eren B，Kanc K，et al.Impaired endothelial function and arterial stiffness in patients with type 2 diabetes-The effect of a very low-dose combination of fluvastatin and valsartan[J].J Diabetes Complications，2017，31（3）：544-550.

[11]Solini A，Giannini L，Seghieri M，et al.Dapagliflozin acutely improves endothelial dysfunction，reduces aortic stiffness and renal resistive index in type 2 diabetic patients：a pilot study[J].Cardiovasc Diabetol，2017，16（1）：138.

[12]Tuttolomondo A，Casuccio A，Guercio G，et al.Arterial stiffness，endothelial and cognitive function in subjects with type 2 diabetes in accordance with absence or presence of diabetic foot syndrome[J].Cardiovasc Diabetol，2017，16（1）：2.

[13]Hanis CL，Redline S，Cade BE，et al.Beyond type 2 diabetes，obesity and hypertension：an axis including sleep apnea，left ventricular hypertrophy，endothelial dysfunction，and aortic stiffness among Mexican Americans in Starr County，Texas[J].Cardiovasc Diabetol，2016，15（8）：86.

[14]Ayta MB，Deveci M，Bek K，et al.Effect of cholecalciferol on local arterial stiffness and endothelial dysfunction in children with chronic kidney disease[J].Pediatr Nephrol，2016，31（2）：267-77.

[15]Kozakova M，Morizzo C，F(xiàn)raser AG，et al.Impact of glycemic control on aortic stiffness，left ventricular mass and diastolic longitudinal function in type 2 diabetes mellitus[J].Cardiovasc Diabetol，2017，16（1）：78.

[16]Fountoulakis N，Thakrar C，Patel K，et al.Increased Arterial Stiffness is an Independent Predictor of Renal Function Decline in Patients With Type 2 Diabetes Mellitus Younger Than 60 Years[J].J Am Heart Assoc，2017，6（4）.

[17]Manrique C，Habibi J，Aroor AR，et al.Dipeptidyl peptidase-4 inhibition with linagliptin prevents western diet-induced vascular abnormalities in female mice[J].Cardiovasc Diabetol，2016，15（8）：94.

[18]Ikonomidis I，Pavlidis G，Lambadiari V，et al.P673Improvement of arterial stiffness and myocardial deformation in patients with poorly controlled diabetes mellitus type 2 after optimization of antidiabetic medication[J].Eur Heart J Cardiovasc Imaging，2016，17（2）：ii136-ii143.

[19]Hegyi I，Szabo T，Szele E，et al.Association between increased arterial stiffness and HbA1c and LDL cholesterol level in type 2 diabetes patients[J].Artery Research，2016，16（6）：60.

[20]Jennersj P，Ludvigsson J，Lnne T，et al.Pedometer-determined physical activity level and change in arterial stiffness in Type 2 diabetes over 4 years[J].Diabet Med，2016，33（7）：992-997.

[21]Guo L I，Lan J W，Zheng W，et al.Synthesis and Characterization of Novel Copolyesters Poly（ethylene-2，5-thiophenedicarboxylate-co-terephthalate）[J].China Plastics Industry，2018，5（1）：28-29.

[22]Chen J，Shi M，Wang N，et al.TSH inhibits eNOS expression in HMEC-1 cells through the TSHR/PI3K/AKT signaling pathway[J].Ann Endocrinol（Paris），2019，80（5）：273-279.

[23]Shang W，Cai T，Zhang Y，et al.Facile one pot pyrolysis synthesis of carbon quantum dots and graphene oxide nanomaterials：All carbon hybrids as eco-environmental lubricants for low friction and remarkable wear-resistance[J].Tribology International，2017，118（2）：56-58.

[24]Schadt HS，Wolf A，Mahl JA，et al.Bile Acid Sequestration by Cholestyramine Mitigates FGFR4 Inhibition-Induced ALT Elevation[J].Toxicol Sci，2018，163（1）：265-278.

[25]Silva RO，Bingana RD，TMAL S，et al.Role of TRPV1 receptor in inflammation and impairment of esophageal mucosal integrity in a murine model of nonerosive reflux disease[J].Neurogastroenterol Motil，2018，3（23）：13340-13341.

（2019-04-30收稿?責(zé)任編輯：王明）