周妍　李巖

摘要：目的：建立以HPLC法檢測乙肝解毒膠囊中鹽酸小檗堿的含量測定。方法： 色譜柱為迪馬C18柱;流動相為乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（24：76）;流速為0.8mL/min;柱溫：25℃;檢測波長：265nm。結(jié)果：鹽酸小檗堿濃度在0.0240～0.2160?g/mL范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好，r=1.0000;平均回收率為100.33%，RSD=0.57%（n=6）。結(jié)論：本法快速、簡便、準(zhǔn)確，可用于乙肝解毒膠囊質(zhì)量控制的方法。

關(guān)鍵詞：乙肝解毒膠囊;鹽酸小檗堿;高效液相色譜法

【中圖分類號】R821.4+2???? 【文獻標(biāo)識碼】A?????? 【文章編號】1004-7484（2019）10-0072-02

Determination of Berberine in Yiganjiedu Capsules by HPLC

Zhang jin，Li wenjun

Tonghua Institute for Food and Drug Control，Jilin Province，Tonghua 134000

ABSTRACT：Objective To establish an HPLC method for determination of berberine in Yiganjiedu Capsules.Methods? HPLC analysis was carried out on a Diamonsil C18 column;Using acetonitrile-0.05mol·L-1 potassium dihydrogen phosphate solution（24：76）; the flow rate was 0.8 mL·min-1;the column temperature was set at 25℃;the detection wavelength was 265nm.Results A good linear correlation of berberine was observed within the range of 0.0240～0.2160?g·mL-1，r=1.0000;The average recovery was 100.33%，RSD =0.57%（n=6）.Conclusion The method is rapid，simple and accurate，which can be used for the quality control of Yiganjiedu Capsules.

KEY WORDS： Yiganjiedu Capsules;berberine;HPLC

乙肝解毒膠囊是由黃柏、拳參、黃芩等八味藥材組成，具有清熱解毒，疏肝利膽的功效，用于治療乙型肝炎[1-8]。黃柏為方中主藥，主要含有鹽酸小檗堿、巴馬亭（palmatine）、藥根堿（jatrorrhizine）、黃柏堿（phellodendrine）等。具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡與本品的功能主治有密切關(guān)系[9-12]。為了有效地控制乙肝解毒膠囊的內(nèi)在質(zhì)量，我們以黃柏中的鹽酸小檗堿作為指標(biāo)性成分，采用高效液相色譜法測定鹽酸小檗堿的含量，方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，專屬性強[13-16]。

1? 儀器與試藥

日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀;賽多利斯電子分析天平;日本島津UV1700型紫外分光光度計。

鹽酸小檗堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號： 110713-201814）;乙肝解毒膠囊（市售，批號：20180920.20181102。181101）乙腈為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2? 方法與結(jié)果

2.1? 色譜條件：色譜柱為迪馬C18（4.6×250mm，5?m）;流動相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（24：76）;流速為0.8mL/min;柱溫為25℃;檢測波長為265nm;進樣量為10?l，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于4000。

2.2? 對照品溶液的制備：精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加1%鹽酸甲醇溶液制成每1ml含10?g的溶液，即得。

2.3? 供試品溶液的制備：取本品裝量差異項下的內(nèi)容物，混勻，研細，取約1g，精密稱定，置錐形瓶中，加入1%鹽酸甲醇溶液80ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液置100ml容量瓶中，用少量1%鹽酸甲醇溶液洗滌容器及殘渣，洗液濾于同一容量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4? 陰性對照溶液的制備：按處方比例配成不含黃柏的陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。按上述液相色譜條件進行測定，結(jié)果表明，陰性對照溶液色譜圖中與對照品相同保留時間處無干擾見圖1。

2.5? 線性關(guān)系考察：精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加1%鹽酸甲醇溶液溶解并稀釋，制得濃度為12.0?g/ml的對照品溶液，分別精密吸取2、6、10、14、18?l測定（平行兩次），以峰面積對鹽酸小檗堿濃度回歸，得回歸方程：Y=4843052.083x-4404.05? （r=1.0000），結(jié)果表明鹽酸小檗堿在0.0240～0.2160?g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6? 精密度試驗：精密吸取同一供試品溶液10?l，注入液相色譜儀，重復(fù)進樣6次，結(jié)果鹽酸小檗堿峰面積平均值為576525，RSD為0.25%（n=6）。

2.7? 重復(fù)性試驗：取同一批樣品，按“2.3”項下操作方法獨立測定六次，用外標(biāo)法計算鹽酸小檗堿含量，平均值為0.3mg/粒;RSD為0.31%（n=6）。

2.8? 穩(wěn)定性試驗：取同一批樣品的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12h，按上述色譜條件測定，鹽酸小檗堿峰面積平均值為576867，RSD為0.17%。結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9? 回收率試驗：精密稱取已知含量為0.30mg/粒的樣品適量（6份），分別精密加入對照品溶液（0.0131mg/ml）20ml，按“2.3”項下操作，作為試驗溶液;按“2.1”項下色譜條件，分別測定，結(jié)果見表1

2.10? 樣品測定：取3批樣品，按“2.3” 項下操作，進樣10?l，按外標(biāo)法計算鹽酸小檗堿含量，結(jié)果見表2。

3? 討論

3.1? 檢測波長的選擇

取鹽酸小檗堿對照品的甲醇溶液，經(jīng)UV-1700紫外分光光度計200～400nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果鹽酸小檗堿在265.0nm波長處，有最大吸收，故選擇265nm作為測試波長。

3.2? 提取時間的考察

參照有關(guān)資料對提取方法、時間進行考察，先采用取本品加1%鹽酸甲醇溶液超聲30，40，60min，結(jié)果表明超聲40min時的含量比30min時高，與60min時含量相近。又采用加熱回流的40，60min，結(jié)果其含量與超聲40min相近。因此采用加1%鹽酸甲醇溶液超聲40min制備供試品溶液。

3.3 樣品提取方法的考察：我們采用了三氯甲烷50ml與濃氨試液1ml，密塞，輕輕振搖，稱定重量，放置24小時及精密加入氫氧化鈉試液3ml，放置30分鐘，再精密加入三氯甲烷20ml，稱定重量，加熱回流2小時。結(jié)果后者提取方法即節(jié)省時間又提取充分，因此我們采用正文所述的供試品溶液的制備方法。

參考文獻

[1]佘金燕，任平遠，馬小兵，等.乙肝解毒膠囊的微生物限度檢查方法驗證[J].中國民族民間醫(yī)藥，2016，25（11）：10-11.

[2]蔣永海，朱輝.乙肝解毒膠囊中非法成分土大黃苷的檢測[J].華西藥學(xué)雜志，2011，26（04）：397.

[3]趙曉波，丁紅強，袁銳利，等.HPLC法測定乙肝清熱解毒膠囊中大黃素的含量[J].中醫(yī)學(xué)報，2010，25（06）：1136-1138.

[4]宮淑枝，貢慶欣.HPLC法測定乙肝解毒膠囊中黃芩苷的含量[J].中國醫(yī)藥指南，2010，8（26）：50-51.

[5]曾永芳，黃麗涵，徐遠金.乙肝解毒膠囊中5種有效成分的膠束電動色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定[J].分析測試學(xué)報，2010，29（03）：262-266.

[6]徐菁，葛風(fēng)芹，黃桂芹，等.乙肝清熱解毒膠囊聯(lián)合拉米夫定治療活動性肝炎肝硬化102例分析[J].中國誤診學(xué)雜志，2009，9（34）：8470-8471.

[7]秦慧清.乙肝清熱解毒膠囊治療乙型肝炎（濕熱中阻證）療效觀察[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2009（34）：72-73.

[8]徐菁，黃桂芹，耿建洪.乙肝清熱解毒膠囊聯(lián)合拉米夫定治療活動性肝炎肝硬化臨床研究[J].河北中醫(yī)，2009，31（10）：1508-1510.

[9]陸鳳琪，周海嬪，陳文成，等.HPLC同時測定翻黃合劑中芍藥苷和鹽酸小檗堿含量[J].中國獸藥雜志，2019，53（07）：25-29.

[10]朱云.HPLC法同時測定消炎止痛洗劑中大黃酚和鹽酸小檗堿的含量[J].中國處方藥，2019，17（07）：48-49.

[11]蔡勇科，吳俊賢，黎曉曲.高效液相色譜法測定外科舒筋洗劑中鹽酸小檗堿的含量[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2019，13（13）：233-236.

[12]張葦葦.HPLC法同時測定黃柴安胃膠囊中鹽酸小檗堿和黃芩素的含量[J].中國處方藥，2019，17（06）：38-39.

[13]岑志芳，吳曉純，鄭昊圳，等.HPLC法測定雙黃水凝膠中鹽酸小檗堿的含量[J].佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2018，36（04）：75-78.

[14]黃傳俊，梅勇，楊莉，等.HPLC法同時測定金蟬止癢膠囊中鹽酸小檗堿、黃芩苷和蛇床子素的含量[J].中國藥房，2018，29（12）：1621-1624.

[15]邵文濤，孫海東，王起晗，等.鹽酸小檗堿緩解高膽固醇所致肝臟損傷的機制體外及動物實驗研究[J].診斷學(xué)理論與實踐，2018，17（03）：311-317.

[16]黃傳俊，楊莉，梅勇，等.HPLC切換波長法同時測定健脾止瀉寧顆粒中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量[J].中國藥房，2018，29（10）：1324-1327.

作者簡介：張進，男，副主任藥師，研究方向：藥品檢驗。