龍昌權(quán)　劉倩　楊琴　羅斌　楊綱

【摘? 要】初步研究劑量濃度不同的芹菜素對(duì)雌性小鼠性激素中雌二醇含量的影響，對(duì)進(jìn)一步發(fā)掘其劑量效應(yīng)提供一定的實(shí)驗(yàn)科學(xué)依據(jù)。將48只4～6周齡的雌性小鼠分為4組，即低、中、高劑量組以及空白對(duì)照組，每組12只，對(duì)照組給予0.01ml/g生理鹽水灌胃，實(shí)驗(yàn)組給予0.01 ml/g 不同劑量（低劑量組252mg/L，中劑量組504mg/L，高劑量組1008mg/L）的芹菜素懸濁液進(jìn)行灌胃。實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)連續(xù)分批的7d、14d、21d進(jìn)行芹菜素以及生理鹽水灌胃后將小鼠分批次處死進(jìn)行眥靜脈叢取血。采用ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行血清中雌二醇（Estradiol，E2）的測(cè)定。將獲取數(shù)據(jù)錄入SPSS17.0軟件，利用x±s多組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析;檢驗(yàn)水平α= 0.05。結(jié)果為P<0.05，再經(jīng)過(guò)圖表分析可知，芹菜素對(duì)雌二醇的分泌有促進(jìn)作用，成正相關(guān)關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】芹菜素;雌性小鼠;雌二醇;性激素

【中圖分類號(hào)】R249???? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A?? ????【文章編號(hào)】1004-7484（2019）10-0026-02

Dose Effect of Apigenin on Sex Hormones in Female Mice

LONG Chang-quan LIU-Qian YANG-Qin LUO-Bin TAN-Yi Yang-Gang*

college of basic medical sciences， changsha medical university，Hunan Changsha410219，China

Abstract：Preliminary study on the effect of apigenin with different dose concentration on estradiol content in female mice sex hormones provides certain experimental scientific basis for further exploring its dose effect. Forty-eight 4-to 6-week-old female mice were divided into 4 groups， i.e. low， medium， high dose group and blank control group， with 12 mice in each group. the control group was given 0.01ml/g normal saline and the experimental group was given 0.01 ml/g apigenin suspension of different doses （252mg/L in low dose group， 504mg/L in medium dose group and 1008mg/L in high dose group） for gastric perfusion. The researchers administered apigenin and normal saline to mice for 7 days， 14 days and 21 days， and then executed the mice in batches to collect blood from canthus venous plexus. Estradiol （E2） in serum was determined by ELISA kit. The acquired data were entered into SPSS17.0 software， and the homogeneity of variance test and one-way analysis of variance were used for comparison among groups. Test level α= 0.05. The result was p < 0.05， and the chart analysis showed that apigenin had a positive correlation with estradiol secretion.

Key words：apigenin;female mice;estradiol;sex hormone

芹菜素，又名芹黃素，是地中海沼澤區(qū)域馴化而來(lái)的一種半天然生成素，它的蛋白成分遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于栽培的芹菜[1]。經(jīng)研究，芹菜素有抑制癌細(xì)胞活性生長(zhǎng)的功能，且能作為抗HIV和其他抗病毒藥物，還具有抗炎癥、老化、帕金森綜合征，活性血管等作用[2]。

目前，據(jù)以往的研究資料來(lái)看，有關(guān)于芹菜素對(duì)生殖系統(tǒng)作用的研究資料較少，而近年來(lái)科學(xué)研究參與了對(duì)女性雌激素分泌的調(diào)節(jié)作用的研究。Zand RS等研究了72種黃酮類化合物及其結(jié)構(gòu)相似的化合物，發(fā)現(xiàn)芹菜素具有較強(qiáng)的孕前激素樣活性[3]。芹菜素單獨(dú)作為用藥價(jià)值時(shí)體現(xiàn)出雌激素的性質(zhì)，但是它與其它化學(xué)物質(zhì)如乙炔共同用藥時(shí)，表現(xiàn)出抗雌激素分泌的性質(zhì)[4]。田原等推測(cè)芹菜素對(duì)雌二醇及孕酮分泌的抑制是通過(guò)抑制芳香化酶的活性實(shí)現(xiàn)的，并且有一定的量效關(guān)系[5]。936mg/kg.bwAP降低大鼠精子質(zhì)量，降低精子運(yùn)動(dòng)速度，升高精子畸形率，損傷睪丸組織結(jié)構(gòu)和精子尾部線粒體超微結(jié)構(gòu)。AP可引起血清性激素水平變化[7]。芹菜素能夠明顯干擾雌性大鼠的生殖內(nèi)分泌， 縮短其性周期[11]。本研究進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)對(duì)發(fā)情期大鼠進(jìn)行分組，分別用不同濃度的芹菜素進(jìn)行處理，再檢測(cè)血清中雌二醇含量變化，研究其劑量效應(yīng)。不同濃度的芹菜素和血清中雌二醇之間的相關(guān)性。為臨床上女性不孕不育的治療提供新方向。同時(shí)以期能夠進(jìn)一步發(fā)掘芹菜素的藥用價(jià)值。

1 材料和方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成年6-8周齡的雌性小鼠48只，體重（平均30.19g）g，周齡6～8周（長(zhǎng)沙市天勤生物科技有限公司）。

每天定時(shí)給予對(duì)照組0.01ml/g生理鹽水灌胃，，實(shí)驗(yàn)組給予0.01 ml/g 不同劑量（低劑量組252mg/L，中劑量組504mg/L，高劑量組1008mg/L）的芹菜素混懸液灌胃。實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)連續(xù)分批的7d、14d、21d進(jìn)行芹菜素以及生理鹽水灌胃后將小鼠分批次處死進(jìn)行眥靜脈叢取血。采用ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行血清中雌二醇（Estradiol，E2）的測(cè)定。

1.2儀器與材料：JA3003N電子秤（上海精密科學(xué)儀器有限公司）;三用恒溫水浴箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。芹菜素購(gòu)于西安玉泉生物科技有限公司，純度為98%，灌胃之前用蒸餾水配置成最高濃度混懸液并進(jìn)行同比稀釋成濃度混懸液。ELISA檢測(cè)血清中雌二醇（Estradiol，E2）試劑盒（武漢純度生物有限公司）。

1.3分組與方法：將48只6-8周齡的雌性小鼠分為4組：空白對(duì)照組（生理鹽水），低劑量組，中劑量組和高劑量組，每組各12只。動(dòng)物飼養(yǎng)在長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室的二級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。每天定時(shí)給予對(duì)照組0.01ml/g生理鹽水灌胃，，實(shí)驗(yàn)組給予0.01 ml/g 不同劑量（低劑量組252mg/L，中劑量組504mg/L，高劑量組1008mg/L）的芹菜素懸濁液灌胃。實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)連續(xù)分批的7d、14d、21d進(jìn)行芹菜素以及生理鹽水灌胃后將小鼠分批次處死進(jìn)行眥靜脈叢取血，所取血液放入離心管采用差速離心機(jī)（3000rpm，5～6min），靜置分層，取上清液采用ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行血清中雌二醇（Estradiol，E2）的測(cè)定。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：將獲取數(shù)據(jù)錄入SPSS17.0軟件，利用x±s多組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析，檢驗(yàn)水平α= 0.05。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3討論

本實(shí)驗(yàn)我們應(yīng)用形態(tài)學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、分子生物學(xué)等技術(shù)全方面檢測(cè)不同濃度的芹菜素處理下，發(fā)情期雌性小鼠血清中雌二醇的變化，乳腺導(dǎo)管發(fā)育是否增生，觀察子宮內(nèi)膜的變化。旨在初步探索芹菜素對(duì)雌性小鼠血清中雌二醇的劑量效應(yīng)，進(jìn)一步發(fā)掘其劑量效應(yīng)。國(guó)內(nèi)外芹菜素對(duì)小鼠性激素影響的研究不多。本研究針對(duì)芹菜素一方面具有雌激素樣作用，另一方面又具有拮抗雌激素作用，檢測(cè)不同濃度的芹菜素對(duì)雌性大鼠血清雌二醇含量的影響，來(lái)研究芹菜素對(duì)雌性小鼠性激素的影響。通過(guò)對(duì)發(fā)情期雌性小鼠灌胃已提純的芹菜素來(lái)建立動(dòng)物模型，通過(guò)采用ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行血清中雌二醇的含量，為臨床上女性不孕不育的治療提供新的方向。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 芹菜素對(duì)雌二醇的分泌有促進(jìn)作用，成正相關(guān)關(guān)系。Shivayogi P.等研究發(fā)現(xiàn)芹菜素對(duì)雌性大鼠有雌激素和抗雌激素的作用，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明雌性小鼠與芹菜素濃度呈正相關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1] 張曉晶，劉子蜻，黨瑜慧，劉佳微，吳雙，汪燕妮，李芝蘭. 芹菜素對(duì)小鼠肇丸標(biāo)志酶活性的影響.2013年11期.

[2] 竇笑菊，周子琪，謝東峰 .芹菜素的生物學(xué)活性研究進(jìn)展.2018-02-09.

[3]李嫻，姜恩魁，封利，張奇芳.側(cè)腦室注射芹菜素對(duì)情期雌性大鼠生殖激素含量影響的研究. 錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2006 Feb.，27 （1）.

[4]Hiremath SP，? Badami S， Hunasagatta SK， et al.Antifertilityand hormonal properties of flavones of Striga orobanchioides [J] Eur J Pharmaco12000， 391? （1一2）：193一197.

[5]汪燕妮，黨瑜慧，劉佳微，吳雙，劉玲飛，李芝蘭. 芹菜素對(duì)小鼠血清性激素和精子活動(dòng)度影響的劑量效應(yīng)研究. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)Nat Prod Re.s Dev? 2013.? 25：1357-1361

[6]Breinholt V，? Larsen JC. Detection of weak estrongenic flavonoids using a recombinant yeast strain and a modified MCF7ce11 proliferation assay[J] .Chem Res Toxicol，1998，? 11 （6）：? 622一629

[7] 劉玲飛. 芹菜素對(duì)雄性大鼠生殖系統(tǒng)功能的影響及其相關(guān)機(jī)制探討 .? 蘭州大學(xué) .? 2015-05-01.

[8]張友源，孫勝楠，金少瑾，朱云峰，徐翠翠，馬鶯，盧衛(wèi)紅. 芹菜中的化學(xué)成分及對(duì)生殖系統(tǒng)影響研究進(jìn)展. 2019-01-10.

[9]Pelletier G， Allen D， Gordon M， et al. Distribution of ER in the rat pituitary as studied by in situ hybridization[J].MolCell Endoorinology，? 1998，? 56：? 29.

[10] 張奇芳，姜恩魁，齊艷紅.側(cè)腦室注射芹菜素對(duì)情期雌性大鼠生殖軸影響的研究.?? 錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2006 Feb.，27 （1）.

[11]張麗波，姜恩魁， 芹菜素對(duì)雌性大鼠性周期的影響. 遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào).? 2007-02-15.

通訊作者：楊綱，職稱：講師;

論文為校級(jí)課題論文，項(xiàng)目編號(hào)：長(zhǎng)醫(yī)教〔2019〕61號(hào)-131