邱 艷，陳 蓮，劉建霞，郭美仙，劉曉波

（大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南，大理 671000）

痛引腰骶或周期性小腹疼痛是經(jīng)期或經(jīng)期前后婦女常見的痛經(jīng)表現(xiàn)，痛經(jīng)嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致昏厥。根據(jù)有無盆腔器質(zhì)性病變，痛經(jīng)可分為原發(fā)性痛經(jīng)和繼發(fā)性痛經(jīng)[1]。據(jù)報(bào)道，約有30%～80%的青春期女性發(fā)生痛經(jīng)，13.6%極大地影響正常生活和工作[2]。目前，原發(fā)性痛經(jīng)的病因尚不明確，體內(nèi)的雌激素、縮宮素、前列腺素、血管加壓素等因子水平改變是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)普遍認(rèn)為的原因。中醫(yī)證型最多見的是氣滯血瘀和寒濕凝滯[3]。西醫(yī)臨床治療藥物有：非甾體抗炎藥、鈣離子拮抗藥、β-受體激動(dòng)藥[4]。但這些藥物均有不同程度的不良反應(yīng)和臨床應(yīng)用局限性，且有文獻(xiàn)報(bào)道常規(guī)治療約有 20%～25%的患者無效[5]。中醫(yī)治療痛經(jīng)不僅方法多樣且副作用少，有明顯的優(yōu)勢(shì)，因此研制預(yù)防和治療痛經(jīng)不同證型的系列中藥顯得意義重大。

西歸，為傘形科凹乳芹屬植物西藏凹乳芹（Vicatiathibetica deboiss）的根[6]。它是典型的白族藥材，民間用于胃寒痛、腎虛腰痛、痰涎、風(fēng)濕等疾病的治療，也可作為滋補(bǔ)菜蔬食用，其風(fēng)味獨(dú)特[7]。目前研究表明西歸提取物具有抗疲勞[8-9]、抗氧化[10]、調(diào)節(jié)免疫[11-12]、助消化[13]等作用。西歸在治療痛經(jīng)方面也有潛在價(jià)值[14]，但西歸揮發(fā)油抗痛經(jīng)作用尚不清楚。本研究通過離體子宮實(shí)驗(yàn)、在體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，探索西歸揮發(fā)油抗痛經(jīng)作用，為研制具有抗痛經(jīng)作用的中藥提供基礎(chǔ)研究資料。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雌性未妊娠KM小鼠，體重18～22 g；健康雌性未妊娠SD大鼠，體重180～220 g，均由湖南斯萊達(dá)景實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，生產(chǎn)許可證均為SYXK(湘) 2016-0002。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

西歸，生藥采自云南省大理州鶴慶縣馬廠鄉(xiāng)，由大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院生藥教研室楊月娥高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為傘形科凹乳芹屬植物西藏凹乳芹的干燥根；西歸揮發(fā)油（自制）；石油醚（購(gòu)于云南省大理州博源化工）；痛經(jīng)寶顆粒（仲景宛西制藥股份有限公司，批號(hào)：161202）；己烯雌酚注射液2 mg/mL （上海第九制藥廠，批號(hào)960405）；縮宮素注射液10 U/mL（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：09170102）；苯甲酸雌二醇注射液4 mg/2mL（吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司，批號(hào)：170213）；吐溫-80（上海大眾制藥廠，批號(hào)：910418）。

1.3 儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠，RE52- 05）；張力換能器（北京航天藥學(xué)工程研究所）；恒溫水浴鍋（上海市實(shí)驗(yàn)儀器廠）；BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（上海益聯(lián)科教設(shè)備有限公司）；HW-400 恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）；電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司，AE200) 。

2 方法

2.1 西歸揮發(fā)油的提?。ɑ亓魈崛》ǎ?/h3>

將西歸研碎，取粉末300 g，置于5 L圓底燒瓶中，按1:5比例加入適量的石油醚（1500 mL）浸泡過夜，回流提取3 h（溫度55～60 ℃），得到黃褐色透明油狀混合物。將餾出液至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，回收石油醚（溫度 30～60 ℃），當(dāng)餾到少量時(shí)，放到水浴鍋（溫度50～55 ℃）讓石油醚揮干，得到無石油醚味只具有濃郁中藥香味的黑褐色油狀物即為西歸揮發(fā)油，收集揮發(fā)油密封保存并稱重，得1.56 g揮發(fā)油，計(jì)算其產(chǎn)率為：0.52 g/100 g。將提取好的西歸揮發(fā)油用1%吐溫-80助溶，配制成0.2、0.1、0.05、0.0256、0.0128、0.0064 g/mL 6個(gè)濃度的溶液。

2.2 離體痛經(jīng)模型的制備[14-15]

2.2.1 正常離體子宮平滑肌標(biāo)本的制作

在實(shí)驗(yàn)前 45 h，每只大鼠肌肉注射己烯雌酚 0.5 mL，使動(dòng)物的子宮受體密度增加，提高子宮對(duì)藥物的敏感性。實(shí)驗(yàn)時(shí)處死大鼠，迅速剖取子宮，去除子宮壁上的結(jié)締組織和脂肪，將子宮迅速放入裝有洛氏液的培養(yǎng)皿中。用手術(shù)剪剪成2 cm制成子宮標(biāo)本。將制備好的子宮標(biāo)本，一端穿線固定在通氣鉤上，另一端用蛙心夾夾住，并連接張力換能器及BL-420F系統(tǒng)，置于盛有19 mL、32 ℃洛氏液的恒溫平滑肌槽中，向肌槽中通入連續(xù)穩(wěn)定的氣泡（1～2氣泡/s），給予2 g負(fù)荷張力，待子宮平滑肌平衡后，記錄給藥前10 min 內(nèi)正常離體子宮平滑肌自發(fā)收縮的收縮曲線；分別向肌槽中加入32 ℃的1 %吐溫-80溶液1 mL，記錄10 min 內(nèi)正常離體子宮平滑肌在溶劑中的自發(fā)收縮的收縮曲線；之后分別向給藥筒中加入32 ℃的6個(gè)不同濃度西歸揮發(fā)油溶液，使之在肌槽中終質(zhì)量濃度分別為 0.2、0.1、0.05、0.0256、0.0128、0.0064 g/mL，記錄給藥后10 min離體子宮平滑肌的運(yùn)動(dòng)曲線。統(tǒng)計(jì)分析子宮平滑肌收縮曲線的頻率、振幅、峰面積、持續(xù)時(shí)間。2.2.2 縮宮素誘導(dǎo)離體痛經(jīng)模型的制備

按上述方法，將制備好的子宮標(biāo)本分別置于盛有19 mL 32 ℃洛氏液恒溫平滑肌槽中，向每個(gè)肌槽中通入連續(xù)穩(wěn)定的氣泡（1～2 氣泡/ s），給予2 g負(fù)荷張力。待子宮平滑肌的自發(fā)收縮平穩(wěn)后，記錄給藥前10 min正常離體子宮平滑肌的收縮曲線；向肌槽中加32 ℃、0.1 U/mL的縮宮素100 μL，記錄加縮宮素后10 min子宮平滑肌的收縮曲線；分別向給藥筒中加入32 ℃ 3個(gè)不同濃度的西歸揮發(fā)油溶液，使之在肌槽中終質(zhì)量濃度分別為0.2、0.1、0.05 g/mL，記錄給藥后10 min內(nèi)離體子宮平滑肌的收縮曲線。統(tǒng)計(jì)分析離體子宮平滑肌收縮曲線的頻率、振幅、峰面積、持續(xù)時(shí)間。

2.3 在體痛經(jīng)模型的制備[16-17]

2.3.1 苯甲酸雌二醇與縮宮素聯(lián)用制備大鼠痛經(jīng)模型

取體重180～ 220 g的健康雌性未妊娠SD大鼠60 只，稱重后隨機(jī)分為6 組，每組10只；分別為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，痛經(jīng)寶顆粒組（2.0 g/kg），西歸揮發(fā)油高、中、低（3.0、1.5、0.75 g/kg）劑量組。除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠每天皮下注射苯甲酸雌二醇注射液1次，連續(xù)注射10 d，第1 d、第10 d每只皮下給藥劑量為2.5 mg/kg，余日每只劑量均為1.25 mg/kg。從注射苯甲酸雌二醇的第8 d起，各組分別灌胃給予相應(yīng)藥物，每天兩次連續(xù)給藥3 d。末次注射苯甲酸雌二醇間隔40 h，且末次灌胃給藥1 h后，各組大鼠均按劑量10 U/kg腹腔注入縮宮素，制成大鼠痛經(jīng)模型。

觀察各組大鼠的毛色，毛發(fā)光澤度，精神狀態(tài)，活躍性，對(duì)外界環(huán)境刺激的反應(yīng)記下注射縮宮素后30 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期（注：不發(fā)生扭體反應(yīng)的潛伏期按30 min計(jì)）和扭體反應(yīng)（腹部?jī)?nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高）次數(shù)[18-19]，并計(jì)算扭體發(fā)生率和抑制率。

扭體發(fā)生率（%）=發(fā)生扭體動(dòng)物數(shù)/總實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)×100%

抑制率（%）=(模型組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù))/模型組扭體次數(shù)均值×100 %[20]。

觀察完扭體反應(yīng)后，立即取出各組大鼠的子宮及卵巢，觀察子宮體積大小、子宮壁厚薄程度、卵巢體積大小的變化、子宮質(zhì)量的變化。

2.3.2 苯甲酸雌二醇、冰水浴、縮宮素聯(lián)用制備小鼠寒凝血瘀型痛經(jīng)模型

取體重18～22 g的健康雌性未妊娠KM小鼠60只，稱重后隨機(jī)分為6 組，每組10只；分別為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，痛經(jīng)寶顆粒組（0.1 g/kg），西揮發(fā)油高、中、低（0.15、0.075、0.0375 g/kg）劑量組。除正常對(duì)照組外，其余各組小鼠每天皮下注射苯甲酸雌二醇注射液1次，劑量為10 mg/kg，連續(xù)注射 10 d，同時(shí)每天將小鼠置于冰水浴中10～30 min連續(xù)10 d；從注射苯甲酸雌二醇的第8 d起，各組分別灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥 3 d。末次注射苯甲酸雌二醇間隔40 h，且末次灌胃給藥1 h后，各組小鼠均按劑量10 U/kg腹腔注入縮宮素，制備成小鼠寒凝血瘀型痛經(jīng)模型。

觀察各組小鼠的狀態(tài)，記下注射縮宮素后 30 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期（注：不發(fā)生扭體反應(yīng)的潛伏期按 30 min 計(jì)）和扭體反應(yīng)（腹部?jī)?nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高）次數(shù)，計(jì)算扭體發(fā)生率和扭體抑制率。觀察完扭體反應(yīng)后，立即取出各組小鼠的子宮及卵巢，觀察子宮體積大小、子宮壁厚薄程度、卵巢體積大小的變化、子宮質(zhì)量的變化。

2.4 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，并應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因數(shù)方差，以P＜ 0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 西歸揮發(fā)油對(duì)大鼠離體子宮的影響

3.1.1 對(duì)自發(fā)性收縮的影響

與正常組相比，吐溫-80對(duì)子宮平滑肌沒有抑制作用，故用吐溫-80作溶劑不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。與正常組、溶劑組比較，西歸揮發(fā)油溶液組的收縮頻率、振幅降低、持續(xù)時(shí)間增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05或P＜ 0.01）；0.0128、0.0064 g/mL的西歸揮發(fā)油溶液也能降低收縮曲線的峰面積，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明西歸揮發(fā)油各濃度均能不同程度地抑制大鼠離體子宮的收縮，且 0.2、0.1、0.05、0.0256 g/mL的西歸揮發(fā)油溶液作用較明顯，結(jié)果見表1。

表1 西歸揮發(fā)油對(duì)大鼠正常離體子宮自發(fā)性收縮的影響（, n =10）Table 1 Effect of volatile oil from Xigui on spontaneous contraction of normal isolated uterus in rats

表1 西歸揮發(fā)油對(duì)大鼠正常離體子宮自發(fā)性收縮的影響（, n =10）Table 1 Effect of volatile oil from Xigui on spontaneous contraction of normal isolated uterus in rats

注：與正常組比較，★P ＜ 0.05，★★P ＜ 0.01；與溶劑組比較，▲P ＜ 0.05，▲▲P ＜ 0.01

收縮曲線分組劑量（g /mL） 頻率(次/10min) 振幅(mm) 面積(g.s) 持續(xù)時(shí)間(s)正常組-7.08 ± 0.030 6.20 ± 0.22 1411.84 ± 63.32 182.89 ± 7.12 1%吐溫-80 組-6.85 ± 0.35 6.04 ± 0.65 1389.71 ± 42.85 183.96 ± 6.30 0.0064 6.65 ± 0.38★★▲ 5.35 ± 0.79★ 1343.75 ± 70.67 188.79 ± 2.81 0.0128 6.62 ± 0.45★★▲▲ 5.15 ± 0.83★ 1330.32 ± 58.05 193.19 ± 3.40★★▲▲0.0256 4.61 ± 0.45★★▲▲ 3.09 ± 0.44★★▲▲ 1178.74 ± 106.91★★▲▲ 195.53 ± 4.46★★▲▲0.05 4.30 ± 0.50★★▲▲ 2.14 ± 0.66★★▲▲ 1149.32 ± 127.86★★▲▲ 200.94 ± 6.08★★▲▲0.1 4.06 ± 0.29★★▲▲ 2.06 ± 0.36★★▲▲ 1065.50 ± 61.85★★▲▲ 205.16 ± 4.28★★▲▲西歸揮發(fā)油0.2 6.65 ± 0.38★★▲▲ 2.81 ± 0.52★★▲▲ 1172.59 ± 141.67★★▲▲ 196.08 ± 4.15★★▲▲

3.1.2 對(duì)縮宮素誘發(fā)痙攣收縮的影響

與正常組、吐溫-80組相比，縮宮素組（模型組）子宮平滑肌收縮頻率、振幅、面積升高，持續(xù)時(shí)間明顯降低（P＜0.01），說明造模成功。與模型組相比，西歸揮發(fā)油0.2、0.1、0.05 g/m L組子宮平滑肌收縮頻率、振幅、面積顯著降低，持續(xù)時(shí)間明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與20 %痛經(jīng)寶組比較，差異無顯著性。西歸揮發(fā)油能顯著抑制縮宮素誘發(fā)的大鼠離體子宮痙攣性收縮，作用明顯，故以西歸揮發(fā)油0.2、0.1、0.05 g/mL作為高、中、低劑量組，結(jié)果見表2。西歸揮發(fā)油0.2、0.1、0.05 g/mL，痛經(jīng)寶對(duì)收縮波均有較好的抑制程度，結(jié)果見圖1-4。

表2 西歸揮發(fā)油對(duì)縮宮素誘發(fā)離體子宮平滑肌痙攣收縮的影響（x ±s, n=10）Table 2 Effect of volatile oil from Xigui on the contraction of uterine smooth muscle tendon induced by oxytocin

圖1 0.05 g/mL西歸揮發(fā)油對(duì)縮宮素所致收縮波的影響Fig.1 Effect of 0.05 g/mL Xigui volatile oil on contraction wave induced by oxytocin

圖2 0.1 g/mL西歸揮發(fā)油對(duì)縮宮素所致收縮波的影響Fig.2 Effect of 0.1 g/mL Xigui volatile oil on contraction wave induced by oxytocin

圖3 0.2 g/mL西歸揮發(fā)油對(duì)縮宮素所致收縮波的影響Fig.3 Effect of 0.2 g/mL Xigui volatile oil on contraction wave induced by oxytocin

圖4 0.2 g/mL痛經(jīng)寶對(duì)縮宮素所致收縮波的影響Fig.4 Effect of 0.2 g/mL Tongjingbao on contraction wave caused by oxytocin

3.2 西歸揮發(fā)油對(duì)在體痛經(jīng)模型的影響

3.2.1 動(dòng)物活動(dòng)情況的比較

空白組大小鼠毛色又白又有光澤、雙目有神、精神充沛、活潑、反應(yīng)靈敏、飲食及兩便正常。

造模大鼠毛色粗糙、目光無神、反應(yīng)遲鈍、安靜、少動(dòng)、喜蜷縮、喜扎堆、大小便正常、給予適當(dāng)刺激反應(yīng)低下；連續(xù)灌胃給藥3天高、中、低劑量的西歸揮發(fā)油和痛經(jīng)寶均不同程度改善了造模大鼠出現(xiàn)的上述癥狀。

造模小鼠在冰水刺激后先多動(dòng)、煩躁、掙扎，隨后出現(xiàn)寒戰(zhàn)、安靜、少動(dòng)、喜蜷縮、喜扎堆、毛色無光澤、目光無神、目欲畢、朦朧欲睡、行動(dòng)遲緩、爪尾部色紫暗、耳色暗紅、呼吸微弱、飲水量少、小便色清、大便濕爛等寒證的癥狀，對(duì)外界刺激反應(yīng)低下。連續(xù)灌胃給藥3天高、中、低劑量的西歸揮發(fā)油和痛經(jīng)寶后小鼠上述癥狀都有不同程度的改善。

3.2.2 對(duì)痛經(jīng)大鼠扭體反應(yīng)的影響

發(fā)生扭體反應(yīng)的大鼠表現(xiàn)為腹部（子宮處）內(nèi)凹，軀干與后肢伸展，臀部抬高并與一側(cè)肢體內(nèi)旋，即注射縮宮素導(dǎo)致子宮平滑肌痙攣性收縮。與正常組相比，模型組大鼠的扭體潛伏期明顯縮短、扭體次數(shù)顯著增加(P＜ 0.01)，說明痛經(jīng)模型制備成功。與模型組比較，西歸揮發(fā)油3個(gè)劑量組都能顯著延長(zhǎng)大鼠30 min內(nèi)平均潛伏期(P＜ 0.05或P＜0.01)。西歸揮發(fā)油中、低劑量組可顯著減少扭體次數(shù)(P＜ 0.05或P＜ 0.01)，西歸揮發(fā)油高劑量組也能減少大鼠的扭體次數(shù)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與痛經(jīng)寶組比較，差異無顯著性。西歸揮發(fā)油能對(duì)縮宮素誘發(fā)的子宮痙攣性收縮所致扭體反應(yīng)有較好的對(duì)抗作用，說明西歸揮發(fā)油有一定的抗痛經(jīng)作用，結(jié)果見表3。

表3 西歸揮發(fā)油對(duì)縮宮素誘發(fā)大鼠扭體反應(yīng)的影響（，n =10）Table 3 Effect of volatile oil from Xigui on writhing response induced by oxytocin in rats

表3 西歸揮發(fā)油對(duì)縮宮素誘發(fā)大鼠扭體反應(yīng)的影響（，n =10）Table 3 Effect of volatile oil from Xigui on writhing response induced by oxytocin in rats

注：與正常組比較，★P ＜ 0.05，★★P ＜ 0.01；與模型組比較，▲P ＜ 0.05，▲▲P ＜ 0.01

分組 劑量（g/kg） 扭體潛伏期(min) 30 min內(nèi)扭體的次數(shù)(次) 扭體發(fā)生率(%) 扭體抑制率(%)扭體反應(yīng)正常組-30.00 ± 0.00▲▲ 0.00 ± 0.00▲▲ 0 -模型組-5.91 ± 4.19★★ 25.75 ± 10.12★★ 100 -西歸揮發(fā)油 0.75 11.31 ± 3.45★★▲ 15.50 ± 7.95★★▲▲ 100 39.81 1.5 12.82 ± 5.66★★▲▲ 13.03 ± 5.07★★▲▲ 100 48.35痛經(jīng)寶組 3.0 10.65 ± 4.25★★▲ 18.63 ± 8.48★★ 100 27.65 2.0 11.35 ± 3.94★★▲▲ 16.88 ± 7.59★★▲ 100 42.21

3.2.3 對(duì)寒凝血瘀型痛經(jīng)小鼠扭體反應(yīng)的影響

注射縮宮素后的小鼠表現(xiàn)為腹部（子宮處）內(nèi)凹軀干與后肢伸展，臀部抬高并與一側(cè)肢體內(nèi)旋，即注射縮宮素導(dǎo)致子宮平滑肌痙攣性收縮。與正常組相比，模型組小鼠的扭體潛伏期明顯縮短、扭體次數(shù)顯著增加（P＜0.01），說明寒凝血瘀型痛經(jīng)模型制備成功。與模型組比較，西歸揮發(fā)油3個(gè)劑量組都能延長(zhǎng)小鼠30 min內(nèi)平均潛伏期、減少扭體次數(shù)，但無顯著差異。與痛經(jīng)寶組比較，差異無顯著性。說明西歸揮發(fā)油能對(duì)寒凝血瘀型痛經(jīng)小鼠扭體反應(yīng)有一定的對(duì)抗作用，但西歸揮發(fā)油抗寒凝血瘀型痛經(jīng)作用不是很明顯，結(jié)果見表4。

表4 西歸揮發(fā)油對(duì)縮宮素誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)的影響（，n=10）Table 4 Effect of volatile oil from Xigui on writhing response induced by oxytocin

表4 西歸揮發(fā)油對(duì)縮宮素誘發(fā)小鼠扭體反應(yīng)的影響（，n=10）Table 4 Effect of volatile oil from Xigui on writhing response induced by oxytocin

注：與正常組比較，★P ＜ 0.05，★★P ＜ 0.01；與模型組比較，▲P ＜ 0.05，▲▲P ＜ 0.01

分組 劑量（g/kg） 扭體潛伏期(min) 30 min內(nèi)扭體的次數(shù)(次) 扭體發(fā)生率(%) 扭體抑制率(%)扭體反應(yīng)正常組-30.00 ± 0.00▲▲ 0.00 ± 0.00▲▲ 0 -模型組-1.56 ± 2.31★★ 36.50 ± 14.46★★ 100 -0.0375 3.07 ± 1.71★★ 28.25 ± 13.84★★ 100 22.60 0.075 3.45 ± 2.97★★ 26.88 ± 13.70★★ 100 26.36西歸揮發(fā)油0.15 3.55 ± 2.39★★ 25.38 ± 15.45★★ 100 30.47痛經(jīng)寶組 0.1 4.04 ± 2.36★★▲ 22.13 ± 16.46★★ 100 39.10

3.2.4 子宮及卵巢的變化

通過對(duì)各組子宮及卵巢的觀察發(fā)現(xiàn)。無論是大鼠還是小鼠，與正常組相比，模型組的子宮體積顯著變大質(zhì)量增加，子宮壁變薄，內(nèi)膜上腺體增多，卵巢體積變大，模型組出現(xiàn)了明顯的病理變化，說明痛經(jīng)造模成功；經(jīng)灌胃給藥的西歸揮發(fā)油組以及痛經(jīng)寶顆粒組子宮體積和質(zhì)量變大不明顯，子宮壁稍變薄，卵巢體積沒有明顯變大，結(jié)果見表5、表6。西歸揮發(fā)油組以及痛經(jīng)寶顆粒組的子宮和卵巢沒有出現(xiàn)明顯的病理變化，說明西歸揮發(fā)油以及痛經(jīng)寶顆粒對(duì)痛經(jīng)所致的病變有一定的治療和改善作用。

表5 西歸揮發(fā)油對(duì)痛經(jīng)大鼠子宮變化的影響（，n=8）Table 5 Effect of volatile oil from Xigui on uterine changes in dysmenorrhea rats

表5 西歸揮發(fā)油對(duì)痛經(jīng)大鼠子宮變化的影響（，n=8）Table 5 Effect of volatile oil from Xigui on uterine changes in dysmenorrhea rats

注：與正常組比較，★P ＜ 0.05，★★P ＜ 0.01；與模型組比較，▲ P ＜ 0.05，▲▲P ＜ 0.01

大鼠分組 劑量(g/kg) 子宮體重(g) 動(dòng)物體重(g)正常組-0.4875 ± 0.1002▲▲ 204.75 ± 7.81西歸揮發(fā)油模型組-3.5038 ± 1.6763★★ 201.63 ± 5.26 0.75 1.8236 ± 0.4622★★▲▲ 207.75 ± 6.76 1.5 1.0187 ± 0.0883▲▲ 207.25 ± 7.62 3 1.0407 ± 0.1771▲▲ 205.75 ± 7.01痛經(jīng)寶組 2 0.7735 ± 0.1333▲▲ 208.38 ± 6.32

表6 西歸揮發(fā)油對(duì)痛經(jīng)小鼠子宮變化的影響（，n=8）Table 6 Effect of volatile oil from Xigui on uterine changes in dysmenorrhea mice

表6 西歸揮發(fā)油對(duì)痛經(jīng)小鼠子宮變化的影響（，n=8）Table 6 Effect of volatile oil from Xigui on uterine changes in dysmenorrhea mice

注：與正常組比較，★P ＜ 0.05，★★P ＜ 0.01；與模型組比較，▲P ＜ 0.05，▲▲P ＜ 0.01

小鼠分組 劑量（g/kg） 子宮體重（g) 動(dòng)物體重（g）正常組-0.0509 ± 0.0180▲▲ 19.68 ± 1.93模型組-0.1260 ± 0.0420★★ 19.36 ± 1.88 0.0375 0.0966 ± 0.0169★★▲ 18.93 ± 2.50 0.075 0.0864 ± 0.0147★★▲▲ 19.16 ± 0.91西歸揮發(fā)油0.15 0.0843 ± 0.0103★★▲▲ 19.61 ± 1.14痛經(jīng)寶組 0.1 0.0746 ± 0.0181★▲▲ 19.75 ± 1.25

4 討論

痛經(jīng)是婦科臨床上的常見病、多發(fā)病，青年婦女尤為多見，子宮平滑肌痙攣、子宮炎癥和子宮供血不足與痛經(jīng)密切相關(guān)[21]。近年來原發(fā)性痛經(jīng)由于其發(fā)病率較高而備受關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，西歸揮發(fā)油無論對(duì)正常未孕離體子宮平滑肌的自發(fā)性收縮，還是對(duì)經(jīng)縮宮素處理的離體子宮平滑肌強(qiáng)直收縮，都可顯著降低收縮曲線的頻率、振幅、峰面積，并增加持續(xù)時(shí)間，說明西歸揮發(fā)油在抗子宮平滑肌痙攣方面有良好的治療作用，并呈劑量依賴性。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)該病主癥之“疼痛”、主要病機(jī)之“瘀”、主要病因之“氣質(zhì)寒凝”而設(shè)大鼠痛經(jīng)模型和小鼠寒凝血瘀型痛經(jīng)模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，西歸揮發(fā)油能明顯減少大鼠痛經(jīng)模型扭體次數(shù)并延長(zhǎng)潛伏期，對(duì)寒凝血瘀型小鼠的扭體反應(yīng)也有一定的抑制作用，但作用不明顯。

我們同期的研究結(jié)果表明，西歸揮發(fā)油中含有：Z-雙氫蒿苯內(nèi)酯、3-丁烯基-2-苯并（C）呋喃酮、E-雙氫蒿苯內(nèi)酯、苯氧基乙酸2-丙烯脂等成分，其中Z-雙氫蒿苯內(nèi)酯的含量高達(dá)70.552%。研究表明 Z-雙氫蒿苯內(nèi)酯對(duì)不同平滑肌具有明顯的調(diào)節(jié)作用、鎮(zhèn)痛作用[22]，因此推測(cè)西歸揮發(fā)油抗痛經(jīng)作用也可能與Z-雙氫蒿苯內(nèi)酯有關(guān)系。但目前我們還未對(duì)西歸揮發(fā)油中的這些化學(xué)成分進(jìn)行單獨(dú)的抗痛經(jīng)作用測(cè)試，這將是下一步研究的目標(biāo)。

綜上所述，研究結(jié)果提示，西歸揮發(fā)油具有一定的抗痛經(jīng)作用，其作用機(jī)制可能與抑制子宮痙攣和調(diào)節(jié)子宮平滑肌使其興奮作用減弱相關(guān)；其抗痛經(jīng)的主要成分可能是Z-雙氫蒿苯內(nèi)酯。本研究為將西歸開發(fā)成有抗痛經(jīng)作用的新藥提供了藥理學(xué)依據(jù)。