許惠娟　宋梅　林釗釩

[摘要] 目的 分析支氣管哮喘患者血清中白細胞介素-33（IL-33）及1-磷酸鞘氨醇（S1P）的水平及臨床意義。 方法 選擇2015年9月～2017年5月汕頭大學醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院（以下簡稱“我院”）就診的83例支氣管哮喘患者，根據(jù)喘息控制情況分為急性期組（n = 48）和緩解組（n = 35）;選取我院同期40名健康體檢者為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清中IL-33及S1P水平。測定肺功能指標：第一秒用力呼氣量（FEV1）、最大呼氣峰流速值（PEF）以及第一秒用力呼氣量/用力肺活量（FEV1/FVC）值。應用Pearson相關系數(shù)分析患者血清IL-33及S1P水平與肺功能指標的相關性。 結果 急性期組及緩解組患者的血清IL-33、S1P水平均高于對照組，急性期組患者亦高于緩解組患者，差異有統(tǒng)計學意義（均P < 0.05）;急性期組及緩解組患者的肺功能指標FEV1、PEF以及FEV1/FVC均低于對照組，而急性期組患者亦低于緩解組患者，差異有統(tǒng)計學意義（均P < 0.05）。Pearson相關性分析發(fā)現(xiàn)，急性期組及緩解組患者的血清IL-33及S1P水平與肺功能指標均呈負相關（r < 0，P < 0.05）。 結論 支氣管哮喘患者血清IL-33、S1P水平顯著上升，與肺功能呈負相關，檢測血清IL-33、S1P水平有助于支氣管哮喘的病情判定。

[關鍵詞] 支氣管哮喘;白細胞介素-33;肺功能;1-磷酸鞘氨醇

[中圖分類號] R562.2? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）06（a）-0087-04

Serum levels of IL-33 and S1P in patients with bronchial asthma and their clinical significance

XU Huijuan? ?SONG Mei? ?LIN Zhaofan

Respiratory Department， the Second Affiliated Hospital of Shantou University Medical College， Guangdong Province， Shantou? ?515000， China

[Abstracts] Objective To analyze the levels of interleukin 33 （IL-33） and 1- phosphosphingosine （S1P） in serum of patients with bronchial asthma and their clinical significance. Methods From September 2015 to May 2017， 83 patients with bronchial asthma admitted to the Second Affiliated Hospital of Shantou University School of Medicine （"our hospital" for short） were selected and divided into acute stage group （n = 48） and relief group （n = 35） according to the control of wheeze， 40 healthy subjects in our hospital in the same period were selected as the control group. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to detect the levels of IL-33 and S1P in serum. Lung function measures， forced expiratory volume in the first second （FEV1）， maximum peak expiratory flow rate （PEF）， and forced expiratory volume/forced vital capacity in the first second （FEV1/FVC）. Pearson correlation coefficient was used to analyze the correlation between serum IL-33 and S1P and pulmonary function indexes. Results Serum IL-33 and S1P levels in the acute stage group and the relief group were higher than those in the control group， and the levels in the acute stage group were also higher than those in the relief group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Lung function indexes FEV1， PEF and FEV1/FVC in the acute stage group and the relief group were all lower than those in the control group， while those in the acute stage group were also lower than those in the relief group， with statistically significant differences （all P < 0.05）. Pearson correlief coefficient analysis results showed that the serum IL-33 and S1P levels in the acute phase group and the remission group were negatively correlated with lung function indicators （r < 0， P < 0.05）. Conclusion Serum IL-33 and S1P levels are significantly increased in patients with bronchial asthma， which is negatively correlated with lung function. The detection of serum IL-33 and S1P levels is helpful for the diagnosis of bronchial asthma.

[Key words] Bronchial asthma; IL-33; Pulmonary function indices; 1- phosphosphingosine

支氣管哮喘簡稱哮喘，是由多種細胞如嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T淋巴細胞、氣道上皮細胞等和細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾患，該慢性炎癥易導致氣道高反應性的產(chǎn)生，通常出現(xiàn)多變的可逆性氣流受限，并引起反復發(fā)作的喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀，常發(fā)生于夜間和/或凌晨，是一種發(fā)病機制復雜、多因素參與的疾病[1]。白細胞介素-33（IL-33）是Th2型免疫反應的關鍵活化因子，其與位于細胞膜表面的受體模型生長刺激表達基因2蛋白（ST2）結合，ST2的高表達與Th2細胞、嗜酸性粒細胞、肥大細胞、T淋巴細胞、中性粒細胞等免疫細胞及氣道上皮細胞密切相關[2]。其通過相關信號傳導蛋白Acp受體復合物，進行信號傳遞，活化核轉錄因子（NF）-κB和促分裂原活化蛋白激酶（MAPK），進而促進支氣管哮喘的發(fā)作[3-4]。而1-磷酸鞘氨醇（S1P）是一種具有生物活性的細胞膜的重要組成部分，也是調節(jié)細胞內外多種生物學功能的重要信號分子，其可通過誘導肥大細胞活化脫顆粒、誘導應力纖維形成、促使氣道平滑肌和氣道纖維細胞的生長以及向肌成纖維細胞分化，最終導致氣道炎性滲出或氣道高反應性來參與支氣管哮喘發(fā)作[5]。有研究[6-7]證實，支氣管哮喘患者致敏可導致支氣管肺泡灌洗液中的S1P水平顯著升高，而支氣管哮喘發(fā)作緩解后支氣管肺泡灌洗液中S1P可降至正常水平。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA）檢測受試者血清中IL-33、S1P水平，并分析其臨床意義，現(xiàn)報道如下：

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2015年9月～2017年5月汕頭大學醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院（以下簡稱“我院”）就診的83例支氣管哮喘患者，所有患者均采取對癥治療。納入標準：①均符合《中國支氣管哮喘防治指南》的診斷標準[1];②均有支氣管哮喘典型的咳嗽、喘息的癥狀;③支氣管舒張試驗陽性。排除標準：患有其他慢性肺部疾病如肺結核、各型肝炎、慢性腎臟疾病、嚴重神經(jīng)系統(tǒng)疾病、嚴重血液病、腫瘤等疾病、3個月內有使用糖皮質激素、慢性阻塞性肺疾病、系統(tǒng)炎癥性疾病的患者。根據(jù)喘息控制情況將符合納入標準的患者分為急性期組和緩解組，其中急性期組48例，緩解組35例。另隨機選擇我院同期門診健康體檢者40例為對照組。分期標準：急性發(fā)作期是指喘息、氣促、咳嗽、胸悶等癥狀突然發(fā)生或原有癥狀急劇加重，常有呼吸困難，以呼氣流量降低為其特征，常因接觸變應原、刺激物或呼吸道感染誘發(fā)，可在數(shù)小時或數(shù)天內出現(xiàn)。緩解期系指經(jīng)過治療或未經(jīng)治療，癥狀、體征消失，肺功能恢復到急性發(fā)作前水平，并維持3個月以上。

急性期組、緩解組及對照組間年齡、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），具有可比性，見表1。本研究納入的所有研究對象及其家屬均簽署知情同意書，同時本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 血清IL-33、S1P水平檢查? 采集所有研究對象外周靜脈血10 mL，肝素抗凝，采用LD4-2型離心機（北京醫(yī)用離心機廠），以3000 r/min離心10 min（離心半徑10 cm），分離血清置于EP管中，并保存于-20℃冰箱中待檢，采用ELISA檢測血清IL-33、S1P水平。具體操作嚴格按照各試劑盒SOP進行。所有檢測試劑盒均購于MuhiSciences公司。

1.2.2 觀察指標? 采用MS-PTF型呼吸功能監(jiān)護儀（購自德國耶格公司）測定研究對象肺功能指標：第一秒用力呼氣量（FEV1）、用力肺活量（FVC）、最大呼氣峰流速值（PEF）變化情況。所有測定指標均重復測定2次，取最高值。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0軟件對所有檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。計量資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組獨立樣本計量資料采用t檢驗，多組樣本間比較采用F檢驗進;計數(shù)資料用百分率表示，組間比較用χ2檢驗;采用Pearson相關系數(shù)分析IL-33、S1P與肺功能指標的相關性。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 三組血清IL-33水平及S1P水平比較

急性期組及緩解組患者血清IL-33、S1P水平分別高于對照組，而急性期組患者亦高于緩解組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P < 0.05）。見表2。

2.2 三組肺功能指標比較

急性期組及緩解組患者的肺功能相關指標（FEV1、PEF以及FEV1/FVC）均顯著低于對照組，同時急性期組患者也顯著低于緩解組，差異均有高度統(tǒng)計學意義（均P < 0.01）。見表3。

2.3 患者血清IL-33、S1P水平與肺功能指標的相關性

急性期組及緩解組患者的血清IL-33水平與肺功能指標FEV1、PEF以及FEV/FVC均呈負相關（r = -0.623、-0.645、-0.724;-0.427、-0.528、-0.621;均P < 0.05）;兩組S1P水平分別與肺功能指標FEV1、PEF以及FEV/FVC均呈負相關（r = -0.713、-0.702、-0.694;-0.542、-0.516、-0.635;均P < 0.05）。

3 討論

支氣管哮喘是一種是常見的慢性呼吸道疾病之一，急性發(fā)作時多以喘息、氣急、胸悶或咳嗽為主要臨床表現(xiàn)，嚴重影響患者的生活質量[8-9]。有研究資料[10]顯示，目前全球支氣管哮喘患者已達3億且發(fā)病率不斷上升，其中我國支氣管哮喘患者則高達3000萬。雖然治療及診斷技術不斷發(fā)展，然而當前國內外對支氣管哮喘的診斷、評估并不樂觀[11-12]。因此，明確評估、診斷支氣管哮喘的嚴重程度，對于診治支氣管哮喘具有重要的臨床意義。

Th1/Th2的功能失衡是支氣管哮喘最重要的發(fā)病機制之一，主要表現(xiàn)為Th2優(yōu)勢分化，使該亞群功能亢進而Th1亞群功能低下。另外，Th2細胞的優(yōu)勢分化進一步促進相關的促炎細胞因子的分泌，而炎性抑制因子的相對減少是導致Th1/Th2功能失衡的關鍵環(huán)節(jié)[13-14]。支氣管哮喘的發(fā)生可由多種細胞因子和細胞參與，而細胞因子（如IgE、白細胞介素、TNF等）是參與氣道炎癥形成的關鍵因素，這些細胞因子之間通過級聯(lián)放大作用發(fā)揮抗炎、促炎作用[15]。在過敏性和非過敏性兩種支氣管哮喘類型中，氣道中均可發(fā)現(xiàn)浸潤的Th2細胞，Th2細胞可以分泌參與支氣管哮喘的重要炎性因子。另外，Th2細胞的執(zhí)行因子包括IL-4、IL-15、IL-13，但主要為IL-4所驅動誘發(fā)，其最重要的執(zhí)行細胞為嗜酸性粒細胞、肥大細胞、及嗜堿性粒細胞。因此過多的Th2細胞因子將激活肥大細胞和嗜酸性粒細胞[16]參與哮喘的發(fā)生。另外IL-33是一種促炎細胞因子且是Th2細胞炎性反應的關鍵活化因子，可誘導Th2細胞活化產(chǎn)生炎性反應。IL-33不僅可以通過結合Th2細胞膜表面的ST2將活化細胞進行傳遞，亦可通過相關信號傳導蛋白Acp受體復合物進行信號傳遞[17]。同時嗜酸性粒細胞、肥大細胞和嗜堿性粒細胞以及結構的細胞等是ST2受體高表達的過敏相關免疫細胞。本研究統(tǒng)計結果顯示，急性期組患者的血清IL-33水平顯著高于緩解組患者（P < 0.05），與相關研究[4，18]結果一致。由于IL-33是Th2細胞炎性反應的關鍵活化因子，因此，高表達的IL-33可通過刺激相關細胞活化，進而促進Th2型細胞因子的釋放，參與支氣管哮喘的發(fā)生與發(fā)展[16]。提示IL-33在評估支氣管哮喘嚴重程度、預測支氣管哮喘的預后方面具有重要的臨床意義。

S1P是一類具有生物活性的鞘脂類代謝物，由鞘氨醇激酶（SPHK）催化而成，主要來源于肥大細胞、巨噬細胞等，可參與細胞的生長、存活、增殖分化等生物學過程[8，18-19]。S1P在支氣管哮喘的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮關鍵的作用。S1P是誘導肥大細胞脫顆粒的強效激動劑，肥大細胞的活化可產(chǎn)生和釋放多種能夠影響上皮細胞、內皮細胞、平滑肌細胞等的炎癥介質，其可引起氣道炎性滲出及氣道高原反應，進而參與支氣管哮喘的發(fā)生[5]。有研究[20-21]顯示，S1P能夠誘導應力纖維形成，促使支氣管平滑肌產(chǎn)生一種時間-劑量依賴性收縮，導致氣道高原反應。另外，值得關注的是，S1P不僅能夠促進氣道平滑肌細胞以及纖維母細胞的生長，其亦能促進肺纖維母細胞向肌成纖維細胞的分化[8]。而氣道重構的主要原因之一為肺纖維細胞肌纖維化和氣道平滑肌增生。有研究[19，22]表明，S1P在正常的氣道中不產(chǎn)生任何作用，但在小鼠支氣管模型卵白蛋白致敏實驗中，其可引起氣道平滑肌收縮。本研究結果顯示，急性期組患者的血清S1P水平顯著高于緩解組（P < 0.05），可見S1P在支氣管哮喘發(fā)病機制中發(fā)揮著重要作用，進一步提示S1P可作為評估支氣管哮喘嚴重程度的指標，也可以用于預測預后，對支氣管哮喘患者的診斷、預后評估同樣具有重要的臨床意義。

肺功能指標FEV1、PEF以及FEV/FVC測定是評價支氣管哮喘患者氣道通氣障礙嚴重程度的常用指標。本研究顯示，急性期組患者上述指標低于緩解組和對照組，提示支氣管哮喘患者的肺功能相關指標FEV1、PEF以及FEV/FVC隨著支氣管哮喘嚴重程度的增加而逐漸降低，通過相關性分析顯示，支氣管哮喘患者血清IL-33、S1P水平與肺功能指標呈負相關，進一步表明血清中IL-33及S1P水平對支氣管哮喘嚴重程度具有很高的評估價值。

綜上所述，支氣管哮喘患者血清IL-33、S1P水平隨著支氣管哮喘嚴重程度的增加而顯著上升，同時其與肺功能呈負相關。檢測血清IL-33、S1P水平有助于支氣管哮喘的病情判定，具有重要的臨床意義。

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（收稿日期：2018-10-19? 本文編輯：封? ?華）