周 燦，王林海，余世榮，陳富超，于慧斌，胡 曉*

0 引言

鹽酸羅沙替丁醋酸酯(Roxatidine acetate hydr-ochloride，ROX)屬于第4代H2受體拮抗劑，可有效治療消化性潰瘍或急性胃黏膜病變引起的上消化道出血[1]?？ńj(luò)磺鈉(Carbazochrome sodium sulfonate，CSS)屬于腎上腺素腙衍生物止血藥，常用于上消化道、呼吸道、泌尿系統(tǒng)和婦產(chǎn)科出血[2]，有較好的安全性[3]。臨床上對于消化內(nèi)科和重癥醫(yī)學(xué)科的患者，常將兩藥以三通或多通管的形式進(jìn)入同一靜脈通道，在此過程中藥物相互混合，其配伍禁忌需嚴(yán)格注意，但《400 種常見藥物配伍禁忌表》并未收錄其配伍情況，配伍后藥物的成分和含量是否改變，如何維持其穩(wěn)定性均有待于研究。因此，本文參照臨床常用劑量，采用聚丙烯離心管在體外模擬兩藥在三通管中的配伍過程，在室溫和高溫下，以藥物含量、pH值、不溶性微粒和外觀變化為指標(biāo)，對ROX與CSS在0.9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖注射液中的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，為臨床安全有效用藥提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津)，STARTER2100 pH計(奧豪斯儀器上海有限公司)，CP214電子天平(奧豪斯儀器上海有限公司)，聚丙烯離心管(江蘇南通理能實驗器材有限公司)，GWJ-4型智能微粒檢測儀(天津天大天發(fā)科技有限公司)。

1.2 試藥 ROX對照品(四川維克奇生物科技有限公司，批號：wkq17010901，純度：99.5%)，CSS對照品(中國食品藥品檢定研究所，批號：100366-200702，純度：98.6%)，注射用ROX(哈藥集團三精加濱藥業(yè)有限公司，批號：20151003，規(guī)格：75 mg)，注射用CSS(湖南五洲通藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：1702231，規(guī)格：40 mg)，0.9%氯化鈉注射液(湖北華仁同濟藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：WA1611001，規(guī)格：250 ml)，5%葡萄糖注射液(湖北華仁同濟藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：WA1612001，規(guī)格：250 ml)，甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑為分析純，去離子水(十堰市人民醫(yī)院制劑室自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 配伍溶液的制備 模擬臨床用藥濃度，精密稱取注射用ROX 10 mg和注射用CSS 4.8 mg 4份于聚丙烯離心管中，分別加入0.9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖注射液各20 ml溶解，稀釋，搖勻，得ROX質(zhì)量濃度為0.5 mg/ml和CSS質(zhì)量濃度為0.24 mg/ml的配伍溶液，貼上標(biāo)簽備用，作為試驗組。

2.2 考察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn) 在室溫(25±1)℃和高溫(40±1)℃，操作間相對濕度55%±5%，自然光照條件下放置，在0 h(混合即刻)、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h觀察溶液外觀變化，測定不溶性微粒數(shù)及pH值，用高效液相色譜法測定ROX和CSS含量變化，以0 h含量為100%參照。凡符合以下情況之一者即判斷為不能配伍[4]：出現(xiàn)變色、氣泡、沉淀、渾濁等明顯外觀變化；混合后pH值RSD>2%；含量變化至少10%；每1 ml靜脈注射液中10 μm及10 μm以上(粒徑≥10 μm)的微粒數(shù)超過25粒，25 μm及25 μm以上(粒徑≥25 μm)的微粒數(shù)超過3粒。

2.3 含量測定

2.3.1 對照品溶液的配制 精密稱取ROX對照品5.16 mg置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為516 μg/ml的對照品溶液；精密稱取CSS對照品1.92 mg置于10 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為1.92 mg/ml的對照品溶液，置4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3.2 色譜條件 色譜柱：Lichrospher C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；ROX流動相：乙腈-0.02%磷酸緩沖液(0.1 ml的磷酸溶液，溶于500 ml的蒸餾水中，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為5.84)=18∶82；CSS流動相：乙腈-0.15 mol/L醋酸銨溶液(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至3.6)=11∶89；流速：1.0 ml/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：ROX與CSS分別為230、363 nm；進(jìn)樣量：20 μl。

2.3.3 色譜專屬性 取“2.3.1”項下2種藥物的對照品溶液、“2.1”項下配伍溶液(0 h)適量，按“2.3.2”項下色譜條件，進(jìn)樣，記錄色譜圖，在此條件下，得出ROX、CSS保留時間分別為11.2、7.6 min，二者色譜峰理論塔板數(shù)均>4 000，兩主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度>1.5，表明專屬性均良好。見圖1。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 分別配制ROX濃度為3.25、6.5、13、26、52、104、208 μg/ml及CSS濃度為1.5、3、6、12、24、48、96 μg/ml的對照品溶液。按“2.1.3”項下色譜條件，以質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果，兩藥標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為A1=26.5 C1-186(r=0.999 5，n=7)，A2=379 C2+ 572.4(r=0.999 7，n=7)。線性范圍分別為3.25～208、1.5～96 μg/ml。

2.3.5 精密度試驗 取“2.3.4”項下ROX濃度為104、26、6.5 μg/ml及CSS濃度為48、12、3 μg/ml的溶液，按“2.1.3”項下色譜條件測定峰面積，1 d內(nèi)每個濃度平行操作5次，得ROX和CSS平均日內(nèi)精密度RSD分別為0.83%、1.06%，結(jié)果表明，儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

2.3.6 重復(fù)性試驗 取“2.1”項下的配伍液適量，用適量流動相稀釋得質(zhì)量濃度為25 μg/ml的ROX溶液和12 μg/ml CSS溶液，重復(fù)配制6份，按“2.3.2”項下色譜條件，進(jìn)樣，記錄峰面積，得兩藥峰面積RSD分別為0.95%、0.71%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.7 加樣回收試驗 精密吸取已知含量的配伍溶液9份，置10 ml量瓶中，再分別加入濃度為20、25、30 μg/ml的ROX對照品溶液和濃度為9.6、12、14.4 μg/ml CSS對照品溶液適量各3份，用流動相稀釋至刻度，搖勻，按“2.3.2”項下色譜條件，記錄峰面積，計算加樣回收率。結(jié)果ROX和CSS平均回收率分別為98.99%和99.28%，RSD分別為0.89%和1.11%，結(jié)果見表1。

2.3.8 含量測定 分別于0、1、2、4、6、8 h精密吸取配伍液1.0 ml至20 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，按“2.3.2”項下色譜條件測定峰面積，以0 h含量為100%，計算各時間點兩藥的相對百分含量，結(jié)果表明，在上述條件下，8 h ROX含量呈下降趨勢，在5%葡萄糖注射液中，分別降低了4.76%、3.59%，在0.9%氯化鈉注射液中，分別降低了1.74%、2.45%；CSS含量相對穩(wěn)定，結(jié)果見表2。

2.4 外觀及pH值變化 配伍液置聚丙烯離心管中，于0、1、2、4、6、8 h分別取適量，加入具塞比色管中，在黑色、白色背景下觀察6 s，記錄溶液外觀，參照《中國藥典》2015版四部pH值測定法測定溶液pH值[5]。結(jié)果顯示，在上述條件下，配伍液的外觀均橙紅色澄明，無氣泡及沉淀產(chǎn)生，8 h內(nèi)各組配伍液pH值均保持穩(wěn)定，RSD<2%，結(jié)果見表3。

2.5 不溶性微粒數(shù) 取配伍液適量，參照《中國藥典》(2015版)四部通則中“不溶性微粒檢查法”[5]，采用光阻法測定上述條件下不同時間點配伍液的不溶性微粒數(shù)，各配伍液重復(fù)測定4次，棄去第1次測定數(shù)據(jù)，取后續(xù)3組數(shù)據(jù)的平均值作為測定結(jié)果。結(jié)果表明，在24 h內(nèi)配伍液的不溶性微粒未明顯增加，均符合規(guī)定，見表4。

2.6 對照組溶液的制備與測定 取0.9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖注射液各20 ml置于聚丙烯離心管中，作為對照組。分別觀察對照組溶液的外觀，測定其pH值及不溶性微粒數(shù)。結(jié)果顯示，對照組中0.9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖注射液的外觀、pH值及不溶性微粒數(shù)均符合《中國藥典》2015版的相關(guān)規(guī)定。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

表2 ROX和CSS在5%葡萄糖注射液和0.9%氯化鈉注射液中的含量變化(n=6)

表3 各配伍液pH值變化(n=6)

表4 各配伍液不溶性微粒變化(n=3)

3 討論

筆者曾考慮篩選理想的流動相同時測定ROX和CSS的含量，但是，在預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)流動相的pH變化對ROX的洗脫影響較大，當(dāng)pH值小于5.2時，該藥在30 min內(nèi)無色譜峰出現(xiàn)，而結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[6-8]，CSS流動相最佳pH為3.0左右。同時，由于兩藥最大吸收波長分別為230、363 nm，相差較大，在相應(yīng)檢測波長處，另一藥物幾乎無吸收峰，兩藥含量無法同時測定，因此，采用平行實驗分別測定兩藥含量。

輸液中的不溶性顆粒容易引起不良反應(yīng)[9]，對人體造成危害。在實際操作量取液體時，注射器的抽吸會產(chǎn)生一些小氣泡，影響不溶性微粒測定結(jié)果，因此，在操作過程中先用去離子水洗凈容器外壁，取部分配伍液沖洗開啟口及取樣杯，將剩余溶液倒入取樣杯中，靜置2 min，以減少氣泡對測定結(jié)果的干擾。試驗結(jié)果顯示，24 h內(nèi)配伍液不溶性微粒數(shù)符合藥典規(guī)定。

本實驗結(jié)果顯示兩藥與5%葡萄糖注射液配伍pH值在4.14左右，8 h時ROX含量呈下降趨勢，但含量變化小于10%；而與0.9%氯化鈉注射液配伍pH值在4.96左右，其含量基本保持穩(wěn)定?？赡艿脑驗镽OX對pH值較敏感，酸性條件下其結(jié)構(gòu)中哌啶環(huán)上的胺基給出電子，易被氧化聚合反應(yīng)產(chǎn)生雜質(zhì)，造成藥物含量降低，對雜質(zhì)的定性及該藥在更長時間內(nèi)的含量變化有待進(jìn)一步研究。本研究說明注射用ROX與注射用CSS在5%葡萄糖注射液和0.9%氯化鈉注射液中配伍8 h內(nèi)穩(wěn)定。