宋波　胡敘偉

摘要綬草是我國(guó)重要的藥用植物資源，已被列入國(guó)家二級(jí)保護(hù)植物范疇，目前傳統(tǒng)的方法對(duì)其利用很有限。本文總結(jié)歸納了綬草內(nèi)生真菌和提取物的生物多樣性和生物活性以及綬草內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物的研究情況，以更好地了解綬草內(nèi)生真菌的潛在應(yīng)用價(jià)值;并針對(duì)現(xiàn)有的研究狀況，對(duì)進(jìn)一步的研究提出了一些建議，以期為開(kāi)發(fā)利用綬草內(nèi)生真菌提供參考。

關(guān)鍵詞 綬草;內(nèi)生真菌;生物多樣性;生物活性;次生代謝產(chǎn)物

中圖分類號(hào) S567.239

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 1007-5739（2019）05-0063-03

綬草（Spiranthes?sinensis）又名盤(pán)龍參、清明草等，為蘭科綬草屬多年生宿根草本植物，生于海拔200～3400m的濕草地溝邊草叢或山坡林下，屬于國(guó)家二級(jí)瀕危保護(hù)植物，被收錄在原國(guó)家林業(yè)部頒布的《野生植物保護(hù)名錄》中。綬草植株低矮，花序造型奇特，花色艷麗，花朵密集，可馴化為觀花園藝植物，用于花壇及湖畔池邊、河岸等濕地的綠化，觀賞期長(zhǎng)，具有很高的觀賞價(jià)值，被稱為“世界上最小的蘭花”，適合布置成花壇花境觀賞地被、小品盆栽等形式。綬草也是珍貴的藥用植物，最早見(jiàn)于《滇南本草》，其根或者全株人藥，具有滋陰益氣涼血解毒、澀精、潤(rùn)肺止咳等功效。主治病后體虛、神經(jīng)衰弱、肺結(jié)核咳血咽喉腫痛、小兒夏季熱、糖尿病、白帶等癥;外用治毒蛇咬傷1-2。.

綬草的根、莖、葉中都含有藥用功能的提取物，但主要的藥用功能提取物還是在根中。而且多數(shù)情況下植物體本身富集的這些成分很少，當(dāng)有內(nèi)生菌共同作用時(shí)就能夠有效富集。綬草具有非常好的藥用價(jià)值，而目前對(duì)于綬草及其內(nèi)生菌的研究并不多。

本文對(duì)綬草內(nèi)生真菌多樣性、提取物、次生代謝產(chǎn)物與生物活性進(jìn)行簡(jiǎn)要的綜述，以期為綬草和綬草內(nèi)生真菌的利用與開(kāi)發(fā)以及后續(xù)研究提供參考，為綬草類藥物的新來(lái)源或獲得其生物活性物質(zhì)帶來(lái)新的途徑。

1綬草內(nèi)生真菌及生物活性

1.1內(nèi)生真菌的種類

綬草內(nèi)生菌存在于綬草的根、莖、葉等組織的不同部位。在自然條件下，綬草的種子于春季開(kāi)始發(fā)芽，隨后長(zhǎng)出新葉，生長(zhǎng)至4-5月肝花，花朵自下而上逐次開(kāi)放，待6-7月成熟的種子從蒴果中彈出，借助風(fēng)力傳播，并于翌年春季開(kāi)始出土冒芽。綬草在盛花期后，地上部分凋謝，而地下部分于8-9月再次萌發(fā)，秋苗出土，10-11月消苗，最后進(jìn)入休眠期。

內(nèi)生真菌的分布隨季節(jié)變化性較大。綬草在我國(guó)南北各省幾乎都有分布4，目前的研究取材僅有黑龍江、河北、江蘇和江西等地，如劉紫英5-對(duì)采自江西宜春學(xué)院校園的綬草菌根真菌進(jìn)行分離及鑒定，從根中分離出7屬18菌株，其中優(yōu)勢(shì)菌株為鐮刀霉屬（Fusarium）、曲霉屬（Asperillus）;從莖中分離得到的內(nèi)生真菌多樣性最豐富，有12個(gè)屬，幾乎覆蓋了所有從綬草中分離出的菌屬種類，但是優(yōu)勢(shì)菌群不明顯;而從葉中分離得到的內(nèi)生真菌并不豐富，主要是鏈格孢屬（Alternaria?Nees?ex Wallr.），而且其種群優(yōu)勢(shì)極其明顯程玉鵬等17-8針對(duì)黑龍江地區(qū)采集的綬草鑒定出了柱格孢屬（Ramularia Sacc.）、鐮刀孢屬（Fusarium?Linkex?Fr.）、曲霉屬（Asprillus?Mich.）Link）、青霉屬（Penicillium Linkex?Fr.）、瘤菌根菌屬（Epulorhiza）、小尾孢屬（Cercosporella?Sace.）、鏈格孢屬（Alternaria?Nees?ex Wallr.）、長(zhǎng)蠕孢屬（Helminthosporium Linkex?Fr.）、枝孢屬（Cladosporium Link）以及其他若干未知菌屬。且其分析發(fā)現(xiàn)，莖中分離得到的綬草內(nèi)生真菌在各極性提取物中均未表現(xiàn)出趨同的情況，即各菌種散布于整個(gè)聚類分析結(jié)果的各個(gè)分支。分析其原因，可能是由于不同于根與葉中形成的長(zhǎng)期穩(wěn)定的“宿主-真菌”共生體系所導(dǎo)致的，綬草的莖每年僅在開(kāi)花時(shí)生長(zhǎng)，隨后枯萎，生長(zhǎng)時(shí)間短，因而其各菌之間相互作用時(shí)間短、影響小、沒(méi)有一個(gè)穩(wěn)定的共生體。曲霉屬、鐮刀孢屬和絲核菌屬這3屬的真菌在綬草的根、莖、葉中均有分布，表明這3屬的真菌在綬草植株內(nèi)屬于優(yōu)勢(shì)種群。這些都表明綬草內(nèi)生菌具豐富性，但是地區(qū)差異性還有待研究。

1.2抗菌活性

相對(duì)于其他植物如銀杏的內(nèi)生真菌來(lái)說(shuō)，綬草內(nèi)生真菌的抗菌活性較廣泛，包括抗植物病原菌和人體病原菌。從黑龍江的綬草9中分離得到32株內(nèi)生真菌，通過(guò)測(cè)量浸有內(nèi)生真菌濾紙片對(duì)多種供試菌種的抑菌圈直徑來(lái)判定其對(duì)病原菌的抑制作用，初步判斷，65.3%的內(nèi)生真菌至少對(duì)1種病原菌菌種具有抑制作用。其中，一部分內(nèi)生真菌對(duì)常見(jiàn)細(xì)菌，如葡萄球菌、大腸埃希菌枯草芽孢桿菌有抑制效果;一部分內(nèi)生真菌對(duì)致病性較強(qiáng)的病原菌，如肺炎桿菌、銅綠假單胞菌、傷寒桿菌、乙型副傷寒桿菌、福氏痢疾桿菌、變形桿菌有抑制效果。這些具有抗菌作用的內(nèi)生真菌在綬草的根、莖、葉中均有分布，其中莖和葉中的內(nèi)生真菌的抑菌作用較強(qiáng)，而根中的抑菌作用就相對(duì)較弱，并且其中有一種真菌的抗菌效果接近青霉素鈉，故有望從綬草的內(nèi)生真菌中分離得到具有較高抑菌效果的新化合物10，并且有可能研究出新抗菌藥物。

1.3抗氧化活性

嚴(yán)鑫等"用采于安徽毫州的帶根全草作試材，以DPPH自由基和ABTS自由基清除率為指標(biāo)，以水溶性VE為陽(yáng)性對(duì)照，測(cè)定綬草不同有機(jī)溶劑萃取物的體外抗氧化活性，結(jié)果顯示，綬草的石油醚.乙酸乙酯及正丁醇萃取物對(duì)DPPH和ABTS自由基均有清除能力，具體分析為Z酸乙酯萃取物的抗氧化活性最大（但是略小于陽(yáng)性對(duì)照VE的抗氧化活性），石油醚萃取物的抗氧化活性最小。值得指出的是，該研究還測(cè)定了不同萃取物的總酚含量，結(jié)果表明，綬草不同萃取物體外抗氧化活性與總酚含量成正相關(guān)性。但是該研究沒(méi)有明確這些萃取物的具體化學(xué)成分，以及其來(lái)自于綬草植物體還是與其共生的內(nèi)生真菌，又或者它們二者是相輔相成的。