何文秀 陸恩浩 陳依婷 沙先誼

乙酰半胱氨酸是L-半胱氨酸的天然衍生物，其 含有的活性巰基通過破壞黏液蛋白的二硫鍵，分解 痰液中的黏蛋白，還可提高纖毛清除力，利于痰液液化和咳出，是經(jīng)典的化痰藥物[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)乙酰半胱氨酸具有多種藥理學(xué)作用，可通過清除自由基、抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫和抗凋亡等機制，對心、肺、肝、腸和腦等組織器官產(chǎn)生廣泛保護作用[2]，已廣泛應(yīng)用于臨床。吸入用乙酰半胱氨酸溶液是贊邦公司研發(fā)的吸入用祛痰藥物，以乙酰半胱氨酸為主要成分，被世界衛(wèi)生組織、美國心肺血液研究所等組織共同推薦作為治療慢性阻塞性肺疾?。–OPD）和肺纖維化的常規(guī)抗氧化藥物。目前，國內(nèi)已有多家企業(yè)上市該類型產(chǎn)品，但關(guān)于乙酰半胱氨酸吸入制劑的質(zhì)量評價報道較少。本研究參考各國藥典收載情況及原研廠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，評價3 個廠家生產(chǎn)的吸入用乙酰半胱氨酸溶液制劑的有關(guān)物質(zhì)與含量，旨在提供該制劑的關(guān)鍵質(zhì)量評價方法，以期為臨床合理用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品與試劑 吸入用乙酰半胱氨酸溶液（富露施，3 ml:0.3 g，意大利贊邦制藥有限公司，批號28003590）；吸入用乙酰半胱氨酸溶液（B 制劑，3 ml:0.3 g，批號1806075）；吸入用乙酰半胱氨酸溶液（C制劑，3 ml:0.3 g，批號18080602）；乙酰半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)對照品（純度為99.8%，中國食品藥品檢定研究院）；L-胱氨酸對照品（純度＞98%，大連美侖生物技術(shù)有限公司）；L-半胱氨酸對照品（純度＞98%，大連美侖生物技術(shù)有限公司）；甲醇和庚烷磺酸鈉均為色譜純，磷酸、氯化鈉和磷酸二氫鈉均為分析純，水為純水。

1.1.2 儀器 BS210S 和BT25S 分析天平（德國Sartorius 公司）；DiKMA Spursil 5 μm C18 色譜柱（美國DiKMA 公司）；Agilent 1260 高效液相色譜儀、Agilent OpenLab 色譜工作站。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件 據(jù)吸入用乙酰半胱氨酸溶液進口質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中收載的乙酰半胱氨酸測定方法，使用高效液相色譜法測定。色譜柱：C18 反相柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：庚烷磺酸鈉-磷酸二氫鈉緩沖液（pH 2.1）-甲醇（91︰9）；柱溫：40 ℃；檢測波長：210 nm；流速：1.0 ml/min；進樣量：20 μL；分析時間：25 min。

1.2.2 樣品的配制 1）供試品溶液：取富露施1 支，取2.5 ml 置于10 ml 容量瓶，用流動相定容、搖勻；取3 ml 于25 ml 容量瓶，加入20%磷酸0.3 ml，用流動相定容、搖勻，依照有關(guān)物質(zhì)測定色譜條件進樣，作為稀釋前樣品；取適量上述溶液，用流動相稀釋100 倍，依照有關(guān)物質(zhì)測定色譜條件進樣，作為稀釋后樣品。B、C 制劑的含量測定處理方法同富露施。2）對照品溶液（乙酰半胱氨酸）：精密稱取乙酰半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)對照品約7.5 mg，于25 ml容量瓶，用流動相定容，得乙酰半胱氨酸儲備液（0.3 mg/ml）。3）對照品溶液（L-胱氨酸）：精密稱取L-胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)對照品約7.5 mg，于25 ml 容量瓶，用流動相定容，得L-胱氨酸儲備液（0.3 mg/ml）。4）對照品溶液（L-半胱氨酸）：精密稱取L-半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)對照品約7.5 mg，于25 ml 容量瓶，用流動相定容，得L-半胱氨酸儲備液（0.3 mg/ml）。

1.2.3 3種制劑的有關(guān)物質(zhì)測定 按稀釋前后自身峰面積百分比法，計算1.2.2 項3 種供試品溶液中4 種代表性雜質(zhì)含量和總雜含量。平行操作3 份，每份樣品進樣1 次。

1.2.4 不同放置條件下制劑中的有關(guān)物質(zhì)測定 取光照10 d、40 ℃和60 ℃條件下保存10 d 的三種樣品，依照1.2.2 項下方法處理，每種制劑均平行操作2 份，每份進樣3 針，依照稀釋前后自身峰面積百分比法計算各單雜和總雜含量。

2 結(jié)果

2.1 色譜峰定位

乙酰半胱氨酸、半胱氨酸和胱氨酸的相對保留時間（RRT）比值分別為1、1.7～1.8 和2.0～2.1，各成分的色譜峰理論板數(shù)、分離度、對稱性均符合中華人民共和國藥典2015 版藥物分析方法的要求[3]。

2.2 各廠家乙酰半胱氨酸有關(guān)物質(zhì)比較

分別按供試品溶液的配制方法處理各廠家乙酰半胱氨酸溶液，按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，計算有關(guān)物質(zhì)含量，結(jié)果見圖1～3 和表1。采用自身對照法測定制劑中有關(guān)物質(zhì)的結(jié)果表明：富露施、B 制劑與C 制劑中總雜分別為0.72%、1.30%和1.02，P＜0.05；最大單雜（未知雜質(zhì)2）分別為0.27%、0.93%與0.71%，P＜0.05；半胱氨酸的含量分別為0.22%、0.08%與0.09%，P＜0.05；3 種制劑均未檢測到胱氨酸。

圖1 富露施中有關(guān)物質(zhì)測定色譜圖

圖2 B制劑中有關(guān)物質(zhì)測定色譜圖

圖3 C制劑中有關(guān)物質(zhì)測定色譜圖

2.5 不同放置條件下各廠家乙酰半胱氨酸吸入制劑有關(guān)物質(zhì)比較

將3 個廠家的吸入用乙酰半胱酸溶液在不同條件保存10 d 后，分別測定制劑中的有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果表明，不同廠家的乙酰半胱氨酸吸入制劑的各單雜質(zhì)和總雜質(zhì)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。在光照條件放置10 d 時，富露施、B 制劑與C制劑的總雜質(zhì)分別為0.69%、1.65%和0.81%，P＜0.05；未知雜質(zhì)2 分別為0.27%、1.28%與0.05%，P＜0.05；半胱氨酸分別為0.19%、0.07%與0.07%，P＜0.05。在高溫條件放置10 d 時，3 種制劑總雜質(zhì)均有一定程度增加，均會產(chǎn)生雜質(zhì)胱氨酸。

3 討論

乙酸半胱氨酸為白色或類白色結(jié)晶性粉末，有類似蒜的臭味，在生產(chǎn)過程中容易引入胱氨酸、半胱氨酸、N,N’-二乙酰半胱氨酸、N,S-乙酰胱氨酸（本實驗只對前兩種雜質(zhì)進行了確認(rèn)）等相關(guān)雜質(zhì)，因此在其質(zhì)量評價中應(yīng)考慮對其有關(guān)物質(zhì)進行檢測。本實驗以富露施作為參比制劑，評價了不同 廠家生產(chǎn)的吸入用乙酰半胱氨酸制劑的含量和有關(guān)物質(zhì)。研究結(jié)果表明，3 個廠家生產(chǎn)的吸入用乙酰半胱氨酸制劑中有關(guān)物質(zhì)在總雜含量存在明顯差異，富露施的未知雜質(zhì)2 和總雜含量明顯低于另外兩種制劑。

藥物雜質(zhì)是藥物中所含的影響藥物自身純度的物質(zhì)，可能是藥品生產(chǎn)和儲存過程中受污染或藥物理化性質(zhì)發(fā)生改變所致。這些雜質(zhì)一般與治療作用無關(guān)，但卻可能影響藥物的藥理活性或穩(wěn)定性，從而造成藥物效用偏差，甚至導(dǎo)致嚴(yán)重不良反應(yīng)[4]。有研究認(rèn)為，藥品在臨床中產(chǎn)生的不良反應(yīng)與藥品中的雜質(zhì)有密切的關(guān)系[5-6]。各制劑中雜質(zhì)差異的原因可能是不同生產(chǎn)廠家在起始原料、輔料的源頭控制、制備工藝的過程控制、包裝材料的優(yōu)選等方面存在一定的差異[7]。雖然國產(chǎn)仿制藥與原研藥的主藥成分是一致的，但不同仿制藥廠家的原料生產(chǎn)和制劑工藝的不同，因此也會導(dǎo)致雜質(zhì)種類和含量上的差異性。

本研究對不同廠家制劑在光照及高溫條件下保存10 d 后有關(guān)物質(zhì)含量變化進行了檢測，結(jié)果顯示3 個廠家制劑在高溫條件下均有一定程度增加，且均含有胱氨酸。藥品穩(wěn)定性是衡量藥品質(zhì)量的重要標(biāo)準(zhǔn)之一，藥品的安全性和有效性均是以穩(wěn)定性為基礎(chǔ)。在藥品的物理、化學(xué)及生物不穩(wěn)定性中，以化學(xué)不穩(wěn)定性最為常見，其會對臨床用藥的安全性和療效產(chǎn)生不良影響[8]。藥品生產(chǎn)過程中的制劑處方工藝、原輔料控制、包材相容性等因素均可能影響藥品貯存的穩(wěn)定性[9]，且相關(guān)研究表明，改進制備工藝可顯著提高藥品的穩(wěn)定性[10-11]。原研制劑效期確定往往通過主要降解雜質(zhì)臨近限度值時的時間而定，基于三者在不同保存條件下的穩(wěn)定性差異，可推測富露施與B、C 制劑比較保質(zhì)期更長的原因可能是貯存包裝材質(zhì)的密封性、穩(wěn)定性，或輔料的影響[7]。

表1 參比制劑、B 制劑和C 制劑中可能雜質(zhì)比較(%)

表2 不同放置條件下各廠家乙酰半胱氨酸吸入制劑有關(guān)物質(zhì)比較(%)

根據(jù)上述實驗研究結(jié)果，提示制劑研究人員有必要進一步對原研廠家在原輔料質(zhì)量控制、未知雜質(zhì)的確證與制劑工藝進行深入研究，發(fā)現(xiàn)影響制劑質(zhì)量的關(guān)鍵因素，提高產(chǎn)品的整體質(zhì)量，以期達到與原研制劑質(zhì)量和療效一致的目的。