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        海葵基底附生酵母的分離鑒定與乙醇發(fā)酵效率研究

        2019-09-03 01:28:40張本旭于紅霞李夏云
        釀酒科技 2019年8期
        關(guān)鍵詞:酵母菌效率

        張本旭 ,于紅霞 ,李夏云,邢 翔

        (1.山東大學(xué)海洋學(xué)院,山東威海 264209;2.山東頤陽集團(tuán),山東威海 264400)

        隨著石化資源的枯竭,人們的環(huán)保意識不斷增強(qiáng)。乙醇被譽(yù)為可再生綠色能源燃料,由于其燃燒污染小、容易運(yùn)輸和貯藏,在價(jià)格上乙醇也可與汽油相競爭,因此具有巨大的開發(fā)前景。目前我們的工業(yè)釀酒酵母菌大都來自于陸地環(huán)境。2000 年出版的《YEASTS,Characteristics and Identification,Third Edition》中,Barnett 等人描述了678 種酵母菌,其中51 種來自海洋環(huán)境。海洋占整個(gè)地球面積的70%,其中有豐富的生物資源,包括酵母菌和酵母菌基因資源[1]。

        近些年來研究表明,海洋微生物可與多種海洋無脊椎動(dòng)物形成共附生關(guān)系而且可能是某些天然產(chǎn)物最初的合成者[2]。??植紡V泛,從潮間帶到深淵海底、從熱帶水域到兩極海域的多種海洋環(huán)境中(包括海底熱液和冷泉)都有它們的蹤跡,而且在一些海域中生物量很大,為優(yōu)勢種[3]。與??纬晒哺缴P(guān)系的部分海洋酵母種類具有發(fā)酵乙醇的功能,由于海洋的高滲環(huán)境,海洋酵母菌與淡水酵母菌相比有耐鹽性好、抗逆性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)將對從??街鴮又蝎@得的4 株酵母菌的發(fā)酵性能進(jìn)行比較,并選取發(fā)酵性能較好、有較大提升潛力的1 株酵母菌,優(yōu)化其發(fā)酵條件,通過正交試驗(yàn)找到最優(yōu)發(fā)酵條件,以提升酵母菌的發(fā)酵效率。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        菌種:本實(shí)驗(yàn)從黃海、渤海海域麻子港(37.534014,122.066834),南山咀(37.522151,122.163179)中采集到若干株??案街鴮訕颖?,分離篩選獲得4 株海洋酵母菌。在試驗(yàn)中分別命名為S4、ZE、DB、A1。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 酵母菌生長曲線測定[4]

        取20 個(gè)100 mL 三角瓶分別裝入30 mL 的YPD液體培養(yǎng)基,滅菌后編號其中一個(gè)標(biāo)注為空白對照,以0.5%的接種量接種,置于28 ℃,120 r/min的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每間隔4 h取出三角瓶,測定該瓶中的菌懸液OD值[5]。

        按照空白對照調(diào)節(jié)分光光度計(jì)0 位,在600 nm波長下測定酵母菌不同生長時(shí)間培養(yǎng)液的OD600值,測定3 次取其平均值。若菌懸液濃度太高,應(yīng)當(dāng)適當(dāng)稀釋使OD 值在0.1~0.8 之間,并記錄相應(yīng)培養(yǎng)液的培養(yǎng)時(shí)間、稀釋倍數(shù)、OD600值,繪制生長曲線。

        1.2.2 酵母菌發(fā)酵性能測定

        1.2.2.1 CO2釋放量測定實(shí)驗(yàn)

        酵母菌在無氧條件下通過呼吸作用,將糖類轉(zhuǎn)化為乙醇,并放出二氧化碳,以上過程可表示為。由此式可知,通過記錄發(fā)酵過程中產(chǎn)生的CO2含量可計(jì)算發(fā)酵產(chǎn)生乙醇的含量,繼而表征發(fā)酵效率。

        配制100 mL YPD 發(fā)酵培養(yǎng)基,按10%的接種量接入種子液,同時(shí)將未接種的發(fā)酵培養(yǎng)基作為對照,稱重后放入搖床培養(yǎng)箱中,在28 ℃、120 r/min的條件下培養(yǎng)。發(fā)酵過程中每隔24 h 取出稱重,直至發(fā)酵液前后質(zhì)量差與對照組質(zhì)量差相當(dāng),即認(rèn)為發(fā)酵終止。計(jì)算排氣前后重量差,即CO2釋放量。由方程式計(jì)算可知,CO2釋放量∶乙醇=22∶23,可間接計(jì)算出乙醇產(chǎn)生量。

        1.2.2.2 發(fā)酵液酒精度測定(酒精計(jì)法)

        將發(fā)酵完成的發(fā)酵液轉(zhuǎn)移至500 mL 蒸餾瓶中,加入50 mL 蒸餾水,用減壓蒸餾裝置蒸餾出100 mL 溶液,用酒精比重計(jì)測定所得溶液的乙醇度,以及溶液溫度,換算得20 ℃時(shí)的酒精度。1.2.2.3 發(fā)酵液酒精度測定(重鉻酸鉀比色法)

        酒精計(jì)法測定乙醇含量較為粗略,故選用重鉻酸鉀比色法來精確測定樣品中的乙醇濃度,此方法通過乙醇在酸性條件下與重鉻酸鉀反應(yīng)生成三價(jià)鉻離子(Cr3+),鉻離子在600 nm 處有吸收峰,可利用吸光度值計(jì)算溶液中的乙醇含量。公式:

        重鉻酸鉀比色法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取0.2 g 無水乙醇加入100 mL 容量瓶中配制為體積分?jǐn)?shù)為0.25%的乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液,由乙醇密度計(jì)算得每毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液中有約2.0 mg乙醇。另取5 g重鉻酸鉀溶于蒸餾水中,加入10 mL 濃硫酸放置至室溫后加蒸餾水定容至100 mL,得到5 %重鉻酸鉀酸性溶液。分別向1~8號試管中加入乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液0~7.0 mL后,加入2.0 mL 的5 %重鉻酸鉀酸性溶液,最終定容至10 mL。將準(zhǔn)備好的試管放置于沸水浴中加熱反應(yīng)10 min,取出并冷卻至室溫,將1號管作為空白對照將分光光度計(jì)調(diào)零,其余試管于波長600 nm處測定吸光度,每組重復(fù)一次取平均值,以乙醇濃度與對應(yīng)的吸光度作標(biāo)準(zhǔn)曲線[6]。

        發(fā)酵液樣品乙醇含量測定:取蒸餾后產(chǎn)物0.25 mL 于試管中,加入2.0 mL 的5 %重鉻酸鉀酸性溶液,加水定容至10 mL,沸水浴加熱10 min 后冷卻至室溫,于波長600 nm 處測定吸光度,每組樣品平行測定3 次求平均值,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出樣品中的乙醇含量。

        1.2.3 單因素試驗(yàn)[7]

        通過生長曲線的測定和發(fā)酵性能的測定,選取生長狀況較好、發(fā)酵性能較優(yōu)的1 株酵母菌ZE,對影響其發(fā)酵效率的因素進(jìn)行單因素條件優(yōu)化。

        1.2.3.1 發(fā)酵溫度的影響

        菌種活化后,按照體積分?jǐn)?shù)10.0%的接種量接種5 瓶YPD 發(fā)酵培養(yǎng)基,分別將其放置于25~38 ℃5 個(gè)發(fā)酵溫度下,以120 r/min 搖床培養(yǎng)24 h,每個(gè)溫度梯度做1 次平行。記錄發(fā)酵前后錐形瓶重量變化,計(jì)算CO2釋放量及乙醇產(chǎn)生量。

        1.2.3.2 發(fā)酵碳源的影響

        將葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露糖、麥芽糖、阿拉伯糖、半乳糖以2%的濃度分別加入基礎(chǔ)氮源培養(yǎng)基中配制成發(fā)酵培養(yǎng)基,并裝液于帶杜氏管的試管中。將活化后的菌液以1 %的接種量接種于試管中培養(yǎng)24 h,每組重復(fù)兩次,記錄杜氏管中產(chǎn)氣情況。

        1.2.3.3 發(fā)酵氮源的影響

        將培養(yǎng)基中的氮源分別替換為硫酸銨、硝酸鉀、尿素、蛋白胨、酵母粉以制備不同氮源的發(fā)酵培養(yǎng)基。菌種活化后,將它們以10.0%的體積分?jǐn)?shù)接種,并置于28 ℃、120 r/min搖床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。記錄發(fā)酵前后錐形瓶重量變化,并計(jì)算CO2排放量及乙醇產(chǎn)生量。

        1.2.3.4 發(fā)酵培養(yǎng)基pH值的影響

        調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)液pH4.5~6.5。菌種活化后,將其以10.0%的體積分?jǐn)?shù)接種,置于28 ℃、120 r/min搖床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,每組做1 次重復(fù)。記錄發(fā)酵前后錐形瓶重量變化,計(jì)算CO2釋放量及乙醇產(chǎn)生量。

        1.2.3.5 發(fā)酵氮源濃度的影響

        根據(jù)氮源實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選擇最適氮源,制備氮源濃度分別為1 %~5 %的發(fā)酵培養(yǎng)基。菌株活化后,將它們以10.0 %的體積分?jǐn)?shù)接種,并置于28 ℃、120 r/min搖床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。記錄發(fā)酵前后錐形瓶重量變化,計(jì)算CO2排放量及乙醇產(chǎn)生量。

        1.2.3.6 發(fā)酵碳源濃度的影響

        根據(jù)碳源發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最適的碳源,配制碳源濃度分別為16%~28%的發(fā)酵培養(yǎng)基。菌種活化后,將它們以10.0 %體積分?jǐn)?shù)接種,置于28 ℃、120 r/min 搖床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,每組做1次平行。記錄發(fā)酵前后錐形瓶重量變化,計(jì)算CO2釋放量及乙醇產(chǎn)生量。

        1.2.4 正交試驗(yàn)

        根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,選取發(fā)酵溫度、氮源濃度、發(fā)酵液pH 值3 個(gè)對發(fā)酵產(chǎn)量有明顯影響的因素,設(shè)計(jì)3 因素3 水平的正交試驗(yàn),采用L9(34)的正交表對酵母菌發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化[8],見表1。

        表1 發(fā)酵優(yōu)化正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)(一)

        2 結(jié)果與分析

        2.1 生長曲線的測定OD600(圖1)

        圖1 4種酵母菌的生長曲線

        由圖1 可知,對于菌株A1,在培養(yǎng)0~4 h 為延滯期,4~28 h 為對數(shù)生長期,28~72 h 為穩(wěn)定期,在試驗(yàn)階段中未觀測到衰亡期。對于菌株ZE、S4、DB,在培養(yǎng)0~8 h 為延滯期,8~42 h 為對數(shù)生長期,42~72 h 為穩(wěn)定期,未見明顯衰亡期。菌株DB、S4、ZE 相比菌株A1 在達(dá)到穩(wěn)定期時(shí)的菌種數(shù)量占有明顯的優(yōu)勢。

        2.2 CO2釋放量測定(圖2)

        圖2 CO2釋放量變化曲線

        由圖2 可知,4 種酵母菌的CO2釋放量均隨著發(fā)酵時(shí)間的延長逐漸減少,即在發(fā)酵的前24 h 時(shí),發(fā)酵效率最大,隨后產(chǎn)生的CO2含量減少,即單位時(shí)間發(fā)酵產(chǎn)生的乙醇含量減少??赏茢嘤捎诎l(fā)酵產(chǎn)生的乙醇在發(fā)酵液中積累,隨著發(fā)酵時(shí)間的延長,發(fā)酵液中的乙醇濃度逐漸升高,而乙醇濃度的升高會抑制酵母菌的生長及其發(fā)酵過程,整個(gè)發(fā)酵過程中的CO2釋放量隨發(fā)酵時(shí)間的延長逐漸減少,因此在后續(xù)試驗(yàn)中選取前24 h 的CO2釋放量作為發(fā)酵效率高低的比較指標(biāo)。

        在發(fā)酵開始后7 d,A1 和ZE 菌株的CO2釋放量接近0 g,在發(fā)酵開始后10 d的S4和DB菌株的CO2釋放量接近0 g,其微小的數(shù)值可能為搖瓶時(shí)的水蒸汽蒸發(fā)所致,因此可推斷A1 與ZE 在發(fā)酵后第7天、S4 與DB 在發(fā)酵后第10 天,錐形瓶重量基本不發(fā)生變化,判定認(rèn)為發(fā)酵完成。

        由圖2 可知,CO2日釋放量在發(fā)酵開始后5 d 時(shí)間 內(nèi)ZE>A1>DB>S4,之 后 有S4>DB>ZE=A1。另將每24 h 的CO2釋放量相加可得CO2總釋放量,其中ZE 在發(fā)酵過程中共釋放CO244.1 g、A1共釋放CO236.2 g、S4 共釋放CO231.0 g、DB 共釋放CO232.1 g,ZE 在發(fā)酵過程中釋放的CO2明顯高于其他3株酵母菌。

        2.3 乙醇含量測定

        由實(shí)驗(yàn)測得每組試管中的乙醇含量及其在600 nm波長處的OD600值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,見圖3。

        圖3 分光光度法測定乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

        圖3結(jié)果表明,反應(yīng)中乙醇濃度在0~14 mg/10 mL范圍內(nèi),乙醇濃度與相應(yīng)的OD600呈良好的線性關(guān)系,線性回歸方程為y=0.0512x,其相關(guān)系數(shù)R2為0.9948。將測量所得樣品OD600取平均值后計(jì)算得到相應(yīng)的乙醇含量A,換算成20 ℃的酒精度X,按下式計(jì)算:

        式中:X為酒精度(100 mL溶液中所含的乙醇體積數(shù));A 為通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得樣品中乙醇含量(mg);V 為取酒樣體積(mL);ρ乙醇為20 ℃時(shí)乙醇密度(g/mL)。

        圖4 4種酵母菌的發(fā)酵液酒精度測定值

        相比較酒精計(jì)測量蒸餾液酒精度和重鉻酸鉀分光光度法測量酒精度法,兩種方法所測得數(shù)值稍有偏差(圖4),可能由于酒精計(jì)測量的誤差大導(dǎo)致。但從數(shù)據(jù)趨勢來看,均有ZE>S4>DB>A1,其中ZE 在發(fā)酵完成時(shí)的酒精度為3.676 %vol,明顯高于其他3 種酵母菌,可判斷在28 ℃、120 r/min培養(yǎng)條件下ZE 發(fā)酵乙醇效率較高。結(jié)合生長曲線以及CO2釋放實(shí)驗(yàn),選取生長狀況較好、發(fā)酵產(chǎn)量較高的ZE 菌株進(jìn)行其發(fā)酵條件的優(yōu)化選擇、以找到發(fā)酵的最優(yōu)條件搭配。

        2.4 單因素條件優(yōu)化

        2.4.1 發(fā)酵溫度對發(fā)酵效率的影響(圖5)

        圖5 發(fā)酵溫度對ZE發(fā)酵效率的影響

        溫度是菌內(nèi)酶反應(yīng)的速度以及菌體生長速度的重要影響因素。由圖5 可知,溫度對于菌種發(fā)酵產(chǎn)率有明顯的影響,當(dāng)發(fā)酵溫度為33 ℃時(shí),CO2釋放量最高,且相較其他溫度差異顯著,可推斷菌種在25~38 ℃溫度范圍內(nèi),發(fā)酵效率先升高后下降,在33 ℃附近達(dá)到峰值,因此選擇33 ℃作為最優(yōu)發(fā)酵溫度。

        2.4.2 發(fā)酵培養(yǎng)基中氮源對發(fā)酵效率的影響(圖6)

        圖6 氮源種類對ZE發(fā)酵效率的影響

        氮源是酵母菌合成自身所需蛋白質(zhì)、核酸等含氮物質(zhì)的重要原材料,不同的氮源對微生物有不同的生理學(xué)效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)測試了6 種不同氮源進(jìn)行發(fā)酵,其中硫酸銨、硝酸鉀、尿素為無機(jī)氮源,蛋白胨、酵母浸粉以及兩者以2∶1 的配比混合所得的混合氮源為有機(jī)氮源。由圖6 數(shù)據(jù)可知,菌種對蛋白胨和酵母浸粉以及兩者的混合氮源即3 種有機(jī)氮源較為適應(yīng),有較高的CO2釋放量即較高的發(fā)酵產(chǎn)量,相較硫酸銨、硝酸鉀和尿素有明顯差異。當(dāng)采用混合氮源進(jìn)行發(fā)酵時(shí),CO2釋放量最高,但相較其他兩種單一氮源差異不明顯。

        圖7 氮源濃度對ZE發(fā)酵效率的影響

        由圖7 可知,隨著氮源濃度逐漸增加,CO2釋放量先增加后減少,在氮源濃度為3 %時(shí)達(dá)到最大,相較其他濃度下的釋放量差異明顯,因此選擇3%的氮源濃度且為蛋白胨∶酵母浸粉為2∶1 的混合氮源作為最優(yōu)氮源進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

        2.4.3 發(fā)酵培養(yǎng)基中碳源對發(fā)酵效率的影響

        碳源是指微生物生長繁殖的營養(yǎng)源,為微生物提供所需的碳元素,由于不同微生物所產(chǎn)生酶系不同,因此利用不同碳源的程度也存在差異[9]。通過糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)可得,在杜氏管中產(chǎn)生氣泡的僅葡萄糖,蔗糖、乳糖、甘露糖、半乳糖、麥芽糖、阿拉伯糖杜氏管中均無氣泡。未產(chǎn)生氣泡的幾組實(shí)驗(yàn)說明,該菌種可能缺少利用此類糖類的酶系,無法在該培養(yǎng)基中發(fā)酵產(chǎn)生乙醇并放出CO2,實(shí)驗(yàn)中菌種可利用的碳源僅為葡萄糖,均無法將其他碳源轉(zhuǎn)化為乙醇。將碳源濃度設(shè)置為16 %~28 %,再測量每組減重。

        由圖8 可知,當(dāng)碳源濃度在22 %以下時(shí),該菌種的CO2釋放量相近無明顯差異,當(dāng)碳源濃度達(dá)24 %時(shí),CO2釋放量有所下降,當(dāng)碳源濃度上升至26%、28%時(shí),該菌種CO2釋放量顯著降低,發(fā)酵效率下降。碳源濃度增高意味著培養(yǎng)液黏度增大、滲透壓增高、培養(yǎng)液中氧含量下降等物理變化,可能會影響到酵母菌的生長以及發(fā)酵效率,因此過高的

        圖8 碳源濃度對ZE發(fā)酵效率的影響

        碳源濃度會導(dǎo)致發(fā)酵效率下降。而碳源濃度在22 %以下時(shí),未對菌種的生長及發(fā)酵產(chǎn)生明顯影響,而碳源作為發(fā)酵過程的底物在濃度未影響酵母菌生長及發(fā)酵時(shí),底物濃度越大,則底物質(zhì)量越大,在一定范圍內(nèi)能夠使菌種發(fā)酵完全,因此選擇碳源為葡萄糖,濃度為20%進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

        2.4.4 發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH 值對發(fā)酵效率的影響(見圖9)

        圖9 發(fā)酵液初始pH值對ZE發(fā)酵效率的影響

        發(fā)酵液的pH 值會對酵母的生命活動(dòng)及酶的活性產(chǎn)生影響,酵母菌的適宜生長條件為弱酸性,pH值過低會增加酵母細(xì)胞排除質(zhì)子的能量消耗并降低酵母細(xì)胞活度以及酵母對基質(zhì)的利用速率[7]。從圖9 可知,隨著發(fā)酵液初始pH 值的升高,CO2釋放量即發(fā)酵效率呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢,當(dāng)pH 值為5.5 時(shí),發(fā)酵效率最高,因此選取pH5.5 進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

        2.5 酵母菌發(fā)酵條件優(yōu)化結(jié)果(表2)

        正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2,發(fā)酵溫度、發(fā)酵液pH值、氮源濃度3 個(gè)因素對CO2釋放量的影響數(shù)值R 可判斷各因素對發(fā)酵效率的影響主次順序?yàn)锳>C>B,即發(fā)酵溫度>氮源濃度>發(fā)酵液pH 值。較優(yōu)因素組合為A3B2C1即發(fā)酵溫度為38 ℃,發(fā)酵液pH值為5.0,氮源濃度為2%,理論最優(yōu)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果最優(yōu)一致。

        表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

        2.6 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果

        經(jīng)鑒定,4 株菌株分別為A1:Hanseniaspora pseudoguilliermondi;S4、ZE:[Candida]duobushaemulonis;DB:Sporobolomyces carnicolor。

        3 小結(jié)

        本實(shí)驗(yàn)從??鷮又蟹蛛x出4 株酵母菌,測定其生長曲線。并對4 株菌進(jìn)行發(fā)酵性能的簡單測定,選取生長狀況較好、發(fā)酵產(chǎn)量較高的ZE 菌株進(jìn)行其發(fā)酵條件的優(yōu)化選擇。對其從溫度、pH、氮源、碳源等因素進(jìn)行優(yōu)化。最終選取發(fā)酵溫度、氮源濃度、發(fā)酵液pH 值3 個(gè)對發(fā)酵產(chǎn)量有明顯影響的因素,設(shè)計(jì)3因素3水平的正交試驗(yàn)。結(jié)果表明,實(shí)驗(yàn)菌株在發(fā)酵溫度為38 ℃、發(fā)酵液pH 為5.0、氮源濃度為2 %,葡萄糖濃度為20 %時(shí),乙醇發(fā)酵效率較高,24 h CO2釋放量為1.826 g。上述發(fā)酵液繼續(xù)發(fā)酵7 d 至發(fā)酵終止,蒸餾發(fā)酵液采用重鉻酸鉀分光光度法測定發(fā)酵液酒精度為4.056%vol,相比原發(fā)酵配方酒精度提高了10.3%。

        ZE 菌株在發(fā)酵溫度為38 ℃、發(fā)酵液pH5.0、氮源濃度為2 %,葡萄糖濃度為20 %時(shí),發(fā)酵液乙醇濃度可達(dá)到4.056 %vol,具有良好的乙醇發(fā)酵能力。鄭虹、杜可[10]在其對高產(chǎn)乙醇的酵母發(fā)酵特性研究中發(fā)現(xiàn),當(dāng)發(fā)酵液中葡萄糖初始濃度為200 g/L,用于研究的菌株的生物量和乙醇度達(dá)到最大值,菌株的生物量在2.0 左右,而乙醇產(chǎn)量在8.5%左右;Oshoma[11]在其研究中,酵母對氮的最適利用濃度為0.80 gN/L,并且硫酸銨為最適氮源;Mbajiuka[12]在發(fā)酵蔗糖實(shí)驗(yàn)中測定所用酵母菌最適初始溫度25 ℃、24 °Bx、pH 值4.0 時(shí),發(fā)酵后酒精度達(dá)到10.5 %vol;而張莉、張?zhí)m[13]在其研究中也得到相似的結(jié)論,這與本實(shí)驗(yàn)中酵母的最適發(fā)酵條件有較大差別,推測是由于酵母菌的種類不同,其最適發(fā)酵條件也有所改變;鄧永東,李靜紅[14]在對1株熱帶假絲酵母菌發(fā)酵條件的研究中,其為發(fā)酵時(shí)間72 h,發(fā)酵溫度36 ℃,初始pH4,葡萄糖乙醇發(fā)酵理論得率為0.51 g 乙醇/g 葡萄糖,與本實(shí)驗(yàn)結(jié)論接近。通過與其他實(shí)驗(yàn)室的研究證明了本實(shí)驗(yàn)的菌株有良好的發(fā)酵乙醇的能力。該菌種來源于海洋環(huán)境下分離得到的野生菌種、在未來的實(shí)驗(yàn)中還可對其進(jìn)行遺傳改造進(jìn)一步提高其乙醇發(fā)酵能力,具有巨大的開發(fā)潛力。

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