陳漪雯 劉妮龍 姜昊聲 賈 麟 Guo Lin 丁 罡

肺癌是中國(guó)發(fā)病率最高的惡性腫瘤，且多發(fā)現(xiàn)時(shí)已為晚期[1]。PDX模型已被證明可以預(yù)測(cè)臨床結(jié)果，并被用于臨床前藥物評(píng)估、生物標(biāo)志物識(shí)別、生物研究和個(gè)性化藥物策略[2-3]。OncoVee?MiniPDXTM模型(以下簡(jiǎn)稱MiniPDX模型)只需7天左右就可以完成藥物敏感性測(cè)試，比PDX模型更快。本研究對(duì)10例晚期NSCLC患者進(jìn)行了藥物敏感性試驗(yàn)，采用兩種最有效的藥物治療。然后將患者的預(yù)后與20例應(yīng)用常規(guī)化療的肺鱗癌患者進(jìn)行比較。研究結(jié)果表明，藥物敏感性指導(dǎo)下的化療比常規(guī)化療的總生存時(shí)間(OS)和無進(jìn)展生存時(shí)間(PFS)明顯提高，療效更好。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本采集

取上海國(guó)際醫(yī)學(xué)中心2017年6月至2019年5月腫瘤科驅(qū)動(dòng)基因陰性的晚期(Ⅳ期)NSCLC住院患者(年齡≤75歲，KPS評(píng)分高于70分、預(yù)計(jì)生存時(shí)間大于3個(gè)月)的新鮮組織標(biāo)本。

1.2 隨訪

化療期間每2個(gè)月隨訪1次，化療結(jié)束每3個(gè)月隨訪1次。復(fù)查項(xiàng)目包括：病史、體格檢查、胸部CT、頸腹部超聲，必要時(shí)行腦核磁共振成像(MRI)、骨掃描。近期療效評(píng)價(jià)：參照實(shí)體腫瘤評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)，分為完全緩解、部分緩解、病灶穩(wěn)定和疾病進(jìn)展。研究終點(diǎn)：總生存時(shí)間(OS)，從治療之日起至最后一次隨訪或死亡之日止。無進(jìn)展生存時(shí)間(PFS)，從治療之日起至最后一次隨訪或腫瘤進(jìn)展止。最后一次隨訪時(shí)間為2019年5月。

1.3 MiniPDX模型和藥物敏感性測(cè)定

采用10例肺癌原發(fā)病灶(肺穿刺取得)建立MiniPDX模型。采用OncoVeeTM-MiniPDX法檢測(cè)藥物敏感性。簡(jiǎn)要地說，用漢克平衡鹽溶液(HBSS)沖洗肺癌標(biāo)本，去除非腫瘤組織和壞死的腫瘤組織。切片后，用膠原酶37 ℃消化腫瘤組織1～2小時(shí)，收集細(xì)胞，去除血細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。然后，將肺癌細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到HBSS沖洗膠囊中。使用CellTiter-Glo?熒光細(xì)胞活力測(cè)定法，基于相對(duì)熒光單位(RFU)評(píng)估抗腫瘤活性。增殖率計(jì)算公式為：腫瘤細(xì)胞相對(duì)增殖率(%)=(Ⅴ藥物處理組d7-Ⅴ對(duì)照組d0)/(Ⅴ對(duì)照組d7-Ⅴ對(duì)照組d0) ×100%(Ⅴ藥物處理組d7：第7天給藥組熒光值；Ⅴ對(duì)照組d7：第7天對(duì)照組熒光值；Ⅴ對(duì)照組d0：第0天對(duì)照組熒光值)。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)以平均標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示。采用非配對(duì)t檢驗(yàn)分析正態(tài)分布連續(xù)變量。采用Kaplan-Meier法對(duì)OS和PFS進(jìn)行分析。皮爾森卡方檢驗(yàn)是用于分析臨床病理的變量之間的相關(guān)性和藥物敏感性。所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS 20.0軟件。所有分析均以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

MiniPDX模型得出驅(qū)動(dòng)基因陰性的晚期NSCLC患者的藥物敏感性模式細(xì)胞活力測(cè)定顯示，培美曲塞、吉西他濱、白蛋白結(jié)合紫杉醇、多西他賽、長(zhǎng)春瑞濱、依托泊苷、卡鉑、順鉑治療肺癌的細(xì)胞平均增殖率分別為46.1%、59.8%、43.0%、59.7%、69.9%、78.1%、55.3%、48.2%。藥物敏感性差異較大，提示需要個(gè)體化治療。

在延長(zhǎng)驅(qū)動(dòng)基因陰性的NSCLC患者生存期方面，MiniPDX引導(dǎo)化療優(yōu)于常規(guī)化療。隊(duì)列包括19例男性和11例女性，全組患者平均年齡64.5歲(42～75歲)。MiniPDX引導(dǎo)化療組的患者包括男性6例(60%)，女性4例(40%)，平均年齡66歲(51～75歲)。常規(guī)化療組的患者包括男性13例(65%)，女性7例(35%)，平均年齡63.8歲(42～74歲)。MiniPDX引導(dǎo)化療組與常規(guī)化療組具有相似的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和基線特征(表1)。采用Kaplan-Meier法分析顯示(圖1)：MiniPDX引導(dǎo)化療組患者中位OS明顯延長(zhǎng)(18.2個(gè)月;95% CI 17.4～19.0個(gè)月)，高于常規(guī)化療組(16.1個(gè)月;95% CI 14.7～17.5個(gè)月)(P=0.004)。MiniPDX引導(dǎo)化療組患者中位PFS也顯著延長(zhǎng)(7.4個(gè)月;95% CI 7.1～7.7個(gè)月)，優(yōu)于常規(guī)化療組(5.4個(gè)月;95% CI 4.5～6.2個(gè)月)(P=0.000)。

表1 兩組患者臨床病理特征比較(例，%)

圖1 Kaplan-Meier法 生存函數(shù)圖

3 討論

由于缺乏能夠可靠預(yù)測(cè)新型藥物對(duì)癌癥患者療效的臨床前模型，癌癥藥物開發(fā)一直受到阻礙。近年來，PDX模型在預(yù)測(cè)各種腫瘤的化學(xué)敏感性方面比傳統(tǒng)模型更受歡迎[4]。在此，我們提出了優(yōu)化的MiniPDX模型在指導(dǎo)驅(qū)動(dòng)基因陰性的NSCLC患者輔助化療中的臨床前和臨床證據(jù)。此外，在前瞻性比較PDX引導(dǎo)化療與常規(guī)化療的療效時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)PDX引導(dǎo)化療顯著提高了驅(qū)動(dòng)基因陰性的晚期NSCLC患者的生存結(jié)局。

大多數(shù)轉(zhuǎn)化性癌癥研究需要有效的臨床前模型。在傳統(tǒng)細(xì)胞系的幫助下，用于藥物篩選的人類癌癥模型始于上世紀(jì)70年代。雖然方便易用，這些基于細(xì)胞系的研究缺乏特定癌癥類型的臨床應(yīng)用預(yù)測(cè)價(jià)值。臨床前PDX模型克服了傳統(tǒng)細(xì)胞系模型的局限性，現(xiàn)在更常用。這些模型可以提供藥物敏感性，模擬癌癥患者對(duì)細(xì)胞毒性藥物的臨床反應(yīng)[5]。此外，由于PDX模型與個(gè)體患者腫瘤的病理特征和遺傳特征具有良好的相關(guān)性，它們正成為改善藥物開發(fā)過程的首選臨床前工具。然而，建立PDX模型的時(shí)間較長(zhǎng)，限制了其在惡性腫瘤中的應(yīng)用，更不用說在PDX模型中，腫瘤異種移植形成需要幾個(gè)移植周期，這可能會(huì)改變?cè)浦材[瘤的性質(zhì)。報(bào)道顯示，最終形成的腫瘤異種移植瘤隨后具有更強(qiáng)的侵襲性表型，表現(xiàn)更像轉(zhuǎn)移性腫瘤。大多數(shù)肺癌患者在晚期被診斷，因此需要立即開始抗腫瘤治療。從這個(gè)角度來看，MiniPDX模型是更合適的選擇。

目前，培美曲塞、吉西他濱、白蛋白結(jié)合紫杉醇、多西他賽、長(zhǎng)春瑞濱、依托泊苷、卡鉑和順鉑是治療非小細(xì)胞肺癌最有效的八種細(xì)胞毒藥物[6]。這些藥物的單一或聯(lián)合化療已顯示出改善非小細(xì)胞肺癌患者的中位生存率。在本研究中，使用MiniPDX模型分別檢測(cè)8種化療藥物的療效，并對(duì)其中兩種最有效的藥物進(jìn)行前瞻性處方，觀察到預(yù)后改善。這種個(gè)性化治療為臨床治療提供了科學(xué)依據(jù)，避免了臨床經(jīng)驗(yàn)指導(dǎo)用藥的副作用。除了細(xì)胞毒化療藥物外，一些針對(duì)VEGF的靶向藥物或免疫點(diǎn)抑制劑也被在治療驅(qū)動(dòng)基因陰性的NSCLC患者中有用[7]。因此，我們的MiniPDX模型可以在未來的臨床前測(cè)試這些藥物的有效性。

我們的結(jié)果表明，MiniPDX模型是指導(dǎo)驅(qū)動(dòng)基因陰性的NSCLC患者化療方案選擇的有效工具，與常規(guī)化療相比，pdx引導(dǎo)化療能顯著提高驅(qū)動(dòng)基因陰性的NSCLC患者的生存率。然而，需更大樣本研究的進(jìn)一步證實(shí)。