邢紅英 付玉環(huán) ?；勖?周 娜

膀胱癌為泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤，好發(fā)于老年男性，在男性泌尿系惡性腫瘤中占首位。據(jù)報(bào)道，膀胱癌在我國的發(fā)病率達(dá)到8.05/10萬，死亡率達(dá)到3.29/10萬[1]。按國際抗癌協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)，Ta～T1期膀胱癌為非肌層浸潤型膀胱癌、T2～T4期膀胱癌為肌層浸潤型膀胱癌。臨床上絕大多數(shù)患者屬于非肌層浸潤性膀胱癌，不過相當(dāng)一部分的患者術(shù)后會(huì)復(fù)發(fā)，而復(fù)發(fā)患者中有10%～15%會(huì)進(jìn)展為肌層浸潤性膀胱癌，而肌層浸潤型膀胱癌患者即使行根治性手術(shù)與各項(xiàng)輔助治療，5年生存率也不足50%[2]。目前國外常采用EORTC 評分系統(tǒng)預(yù)測非肌層浸潤性膀胱癌的復(fù)發(fā)及進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)，但存在一定的局限。近些年，腫瘤標(biāo)志物的預(yù)后預(yù)測價(jià)值越來越得到人們的重視。Ki67為細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原，是反映細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)。研究表明，Ki67表達(dá)水平可能與腫瘤的性質(zhì)、侵襲、轉(zhuǎn)移及生存預(yù)后有關(guān)[3]。為此，本研究分析了Ki67蛋白水平與膀胱癌臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2011年3月至2016年7月我院收治的73例經(jīng)病理證實(shí)的膀胱癌患者的組織標(biāo)本，其中32例有癌旁組織標(biāo)本(距癌灶2 cm以上)。同時(shí)收集同期44例男性開放前列腺摘除手術(shù)患者的膀胱黏膜組織作為正常膀胱標(biāo)本。所有患者均有完整的臨床資料，術(shù)前均未接受過放、化療及免疫治療，標(biāo)本一經(jīng)離體，即經(jīng)福爾馬林固定，并包埋入石蠟，4 μm連續(xù)切片，備用。

1.2 檢測方法

采用免疫組化SP法檢測標(biāo)本中Ki67蛋白的表達(dá)。SP試劑盒為北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；鼠抗人Ki67 單抗為Santa Cruz 公司產(chǎn)品，以1∶1 000稀釋。操作按試劑盒說明進(jìn)行，包括脫蠟、水化，高壓抗原修復(fù)，3%H2O2孵育，山羊血清封閉，滴加一抗室溫孵育1 h，二抗室溫孵育0.5 h，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，鹽酸乙醇分化，脫水、二甲苯透明、封片等操作。

1.3 結(jié)果判定

由兩位觀察者采用雙盲法對結(jié)果進(jìn)行判定，顯微鏡400倍視野下，20個(gè)視野，Ki67為細(xì)胞核染色，計(jì)數(shù)500～1 000個(gè)細(xì)胞中的陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)所占的比例為0～5%為(-)，占>5%～25%為(+)，占>25%～50%為(++)，>50%為(+++)；按 Fromowitz標(biāo)準(zhǔn)，(-)、(+)為低表達(dá)，(++)、(+++)為高表達(dá)。

1.4 隨訪

膀胱癌患者術(shù)后隨訪，術(shù)后第1年每月進(jìn)行1次隨訪，之后每3個(gè)月進(jìn)行1次隨訪。無進(jìn)展生存時(shí)間(PFS)定義為手術(shù)日至疾病復(fù)發(fā)的時(shí)間，本研究隨訪15～24個(gè)月，平均(18.63±2.16)個(gè)月。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 Ki67蛋白在不同組織中的表達(dá)情況比較

Ki67蛋白在46例膀胱癌組織中呈高表達(dá)，在27例膀胱癌組織中呈低表達(dá)，在癌旁組織與正常組織中均呈低表達(dá)，組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 Ki67蛋白在不同組織中的表達(dá)/例

2.2 Ki67蛋白與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系

Ki67蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)水平與患者的性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤數(shù)量無關(guān)(P>0.05)，與臨床分期有關(guān)(P<0.05)，見表2。

表2 Ki67蛋白與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

2.3 Ki67蛋白不同表達(dá)水平的無進(jìn)展生存率比較

本次隨訪截止時(shí)間為2018年8月，隨訪終點(diǎn)為復(fù)發(fā)或進(jìn)展，本次隨訪15～24個(gè)月，平均(18.63±2.16)個(gè)月。Ki67蛋白高表達(dá)組的無進(jìn)展生存率為45.65%(21/46)，低表達(dá)組的無進(jìn)展生存率為55.56%(15/27)，比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.668，P=0.414)。

2.4 Ki67蛋白在預(yù)測膀胱癌預(yù)后中的價(jià)值

選取性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤數(shù)量、臨床分期、Ki67蛋白表達(dá)水平作為可能影響膀胱癌預(yù)后的因素，采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行分析，結(jié)果表明，Ki67蛋白表達(dá)水平與膀胱癌患者的預(yù)后無關(guān)，而臨床分期與膀胱癌患者的預(yù)后有關(guān)，見表3。

表3 Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果

3 討論

目前，膀胱癌術(shù)后主要依靠膀胱鏡、液基細(xì)胞學(xué)等檢查手段進(jìn)行隨訪監(jiān)測，但具有一定的局限性，而一些腫瘤標(biāo)志物，如可溶性Fas因子、趨化因子1、核基質(zhì)蛋白-22等，雖然被證明可用于膀胱癌的預(yù)后監(jiān)測，但其敏感性與特異性均不是很理想。

細(xì)胞的增殖與分裂是腫瘤發(fā)生進(jìn)展的先決條件之一。Ki67最初是由L428細(xì)胞系中獲得的位于10號(hào)染色體上的單克隆抗體，被認(rèn)為是目前反映細(xì)胞增殖活性最為準(zhǔn)確可靠的抗原，其表達(dá)水平與細(xì)胞增殖呈正相關(guān)[4]。研究發(fā)現(xiàn)，Ki67在細(xì)胞周期的G0期不表達(dá)，而在G1后期、S期、G2期、M期中表達(dá)，特別是高度表達(dá)于G2期。Ki67標(biāo)記于細(xì)胞核，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞有絲分裂，隨著惡性腫瘤細(xì)胞的快速增殖，Ki67陽性細(xì)胞增加，而隨著腫瘤分期的增高，分化程度降低，細(xì)胞增殖更快，Ki67的表達(dá)更高。既往多項(xiàng)研究表明，Ki67蛋白在多種惡性腫瘤中的表達(dá)陽性率較高，在判斷腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)及預(yù)后預(yù)測方面顯示出了一定的價(jià)值[5-6]。

膀胱癌組織代謝旺盛，細(xì)胞增殖較正常組織快，Ki67的表達(dá)相應(yīng)提高。本研究結(jié)果顯示，Ki67蛋白在癌旁組織與正常組織中均呈陰性或弱陽性表達(dá)，而在膀胱癌組織中大部分呈強(qiáng)陽性表達(dá)，與目前的研究結(jié)論相符。目前國內(nèi)對于Ki67蛋白表達(dá)與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系尚存在爭議，陳雪磊等[7]研究表明，Ki67蛋白的表達(dá)與膀胱癌的臨床分期、病理學(xué)分級(jí)、腫瘤大小有關(guān)，與性別、年齡無關(guān)。楊國良等[8]研究表明，Ki67蛋白表達(dá)與膀胱癌的病理分級(jí)、復(fù)發(fā)及進(jìn)展有關(guān)，與年齡、性別、腫瘤數(shù)目及腫瘤大小無關(guān)。本研究結(jié)果顯示，Ki67蛋白的表達(dá)水平與患者的性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤數(shù)量無關(guān)，與臨床分期有關(guān)。但無論如何，Ki67在膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展中有著重要作用，Ki67表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、分裂，從而加速膀胱癌浸潤，其表達(dá)水平越高，反映腫瘤惡性程度越高。

國外一些研究認(rèn)為，增殖細(xì)胞的數(shù)量、增殖程度對腫瘤預(yù)后具有預(yù)測價(jià)值。一項(xiàng)有關(guān)上皮性卵巢癌的研究表明，Ki67蛋白增殖指數(shù)對預(yù)測生存預(yù)后有良好的效用，然而另有研究卻顯示，在卵巢透明細(xì)胞癌患者中，Ki67高表達(dá)組的生存率卻較低表達(dá)組高[9]。故Ki67對腫瘤預(yù)后預(yù)測的價(jià)值尚待更多的證明。既往有研究表明，Ki67可作為膀胱癌的預(yù)后判斷因子，但本研究結(jié)果顯示，Ki67蛋白高表達(dá)組的無進(jìn)展生存率為45.2%，低表達(dá)組的無進(jìn)展生存率為57.3%，比較差異尚未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示，Ki67蛋白表達(dá)水平與膀胱癌患者的預(yù)后并無明顯關(guān)系，提示單獨(dú)依靠Ki67蛋白對預(yù)測膀胱癌預(yù)后的價(jià)值有限，應(yīng)結(jié)合臨床分期、病理分級(jí)及其它腫瘤標(biāo)志物等綜合預(yù)測膀胱癌患者的生存預(yù)后，以提高預(yù)后判斷的準(zhǔn)確性。