王占娣，邱樂，劉美竹，王詩琪，李太良，史云東

(玉溪師范學(xué)院 化學(xué)生物與環(huán)境學(xué)院，云南 玉溪 653100)

斜紋夜蛾又名蓮紋夜蛾、斜紋夜盜蛾，為鱗翅目夜蛾科斜紋夜蛾屬完全變態(tài)昆蟲，其寄主植物包括十字花科、茄科、豆類、花卉等109個(gè)科300多種植物[1]，世代重疊，具有遷飛性、暴食性和間歇性爆發(fā)的特點(diǎn)，成為農(nóng)業(yè)上危害嚴(yán)重、難以防治的害蟲之一。目前斜紋夜蛾的防治方法主要有農(nóng)業(yè)防治[2]、物理防治、生物防治[3]及化學(xué)防治[4]等。農(nóng)業(yè)防治以增設(shè)農(nóng)業(yè)設(shè)施為主，物理防治主要以人為摘除卵塊和幼蟲、拔除周圍雜草為主，這兩種方式投資量較大，且耗時(shí)耗力，效率低?；瘜W(xué)防治雖在一定程度上有效控制了蟲口數(shù)量，但對環(huán)境污染大，易引起抗性。因此，斜紋夜蛾的防治亟待尋找一種安全、有效、綠色的防控方法和技術(shù)。

在植物與昆蟲的協(xié)同進(jìn)化過程中，植物通過釋放信息素與昆蟲建立聯(lián)系，昆蟲會根據(jù)這個(gè)信息素對植物做出“趨向”和“回避”的行為反應(yīng)。通常寄主植物釋放的信息素對昆蟲具有“引誘”效果，可引誘昆蟲取食或產(chǎn)卵，非寄主植物釋放的信息素對昆蟲具有“趨避”效果。目前利用寄主植物對昆蟲行為的調(diào)節(jié)作用，從植物中提取某些成分可有效防治昆蟲對植物的危害，也是農(nóng)業(yè)害蟲的綠色防治技術(shù)開發(fā)的熱點(diǎn)。

白菜和石斛是斜紋夜蛾的寄主植物，其中白菜為十字花科植物，是斜紋夜蛾的主要寄主[5]；石斛為蘭科植物，是一種藥食同源性植物，隨著石斛種植業(yè)的發(fā)展，斜紋夜蛾逐漸成為石斛生長過程中主要的害蟲[6]。為開發(fā)斜紋夜蛾幼蟲綠色防治產(chǎn)品尋找先導(dǎo)化合物，本試驗(yàn)選取白菜、石斛為供試植物，采用不同溶劑提取其活性成分，評價(jià)其提取液對斜紋夜蛾4～5齡幼蟲的引誘效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 斜紋夜蛾與試劑

斜紋夜蛾采自玉溪市江川前衛(wèi)鎮(zhèn)漁村農(nóng)業(yè)種植基地中的芥藍(lán)田，在室內(nèi)采用芥藍(lán)苗進(jìn)行飼養(yǎng)，連續(xù)飼養(yǎng)3代。室內(nèi)飼養(yǎng)條件為溫度(27±1)℃，相對濕度60%～70%，光周期L∶D為12 h∶12 h。白菜由實(shí)驗(yàn)室種植，石斛購買于昆明斗南花卉市場。試劑包括石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇(四川西隴化工有限公司)。

1.1.2 儀器

大氣采樣儀(盛陽儀器儀表商城，QC-1B型)、索氏提取器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠，RE-52系列)、水浴鍋、Y型嗅覺儀。

1.2 方法

1.2.1 提取液的制備

白菜和石斛自然晾干后粉碎，過20目篩，分別稱取10 g，用紗布包裹置于索氏提取器中。根據(jù)溶劑極性由小到大依次加入100 mL的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇和蒸餾水進(jìn)行加熱提取，提取溫度分別為80 ℃、45 ℃、85 ℃、85 ℃、100 ℃，提取時(shí)間以提取液的顏色為準(zhǔn)。索氏提取器側(cè)管內(nèi)溶液的顏色變淡時(shí)，標(biāo)志著提取完成。將提取液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)，回收溶劑，濃縮至10 mL，設(shè)定濃縮液濃度為1 g·mL-1，將濃縮液分別用相應(yīng)的提取液稀釋3和5倍，其濃度分別為0.33和0.20 g·mL-1，備用。

1.2.2 提取液引誘效果評價(jià)

采用風(fēng)洞試驗(yàn)方法測定不同濃度(1.00、0.33、0.20 g·mL-1)提取液對斜紋夜4～5齡幼蟲的引誘效果[7-8]。取2個(gè)直徑為0.8 cm的濾紙片，分別滴加20 μL不同稀釋倍數(shù)的濃縮液和等量的對應(yīng)提取溶劑，使自然晾干。濾紙片分別放在Y型

嗅覺儀的2個(gè)支管內(nèi)，放置提取液的支管作為處理組，放置提取溶劑的支管作為對照組。支管風(fēng)速控制在3～5 cm·min-1，重復(fù)4次，每次引入20頭饑餓6 h以上活躍的4～5齡幼蟲，20 min后記錄各支臂內(nèi)蟲口數(shù)量。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理

反應(yīng)率(%)=處理組蟲量/(處理組蟲量+對照組蟲量)×100。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SAS 8.0軟件進(jìn)行分析，采用X2分析處理組與CK組之間的差異性，采用非均衡資料統(tǒng)計(jì)相同溶劑不同濃度時(shí)二種植物提取液對斜紋夜蛾4～5齡幼蟲的引誘效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 斜紋夜蛾幼蟲對白菜不同提取液的行為反應(yīng)

采用不同極性溶劑提取白菜，采用風(fēng)洞試驗(yàn)評價(jià)提取液對斜紋夜蛾4～5齡幼蟲行為調(diào)節(jié)活性。結(jié)果(圖1)顯示，以二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、無水乙醇和水作為溶劑，提取白菜得到的提取物對斜紋夜蛾的行為具有調(diào)節(jié)作為，在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，處理組昆蟲反應(yīng)率數(shù)量高于CK組。其中，以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和水為溶劑提取白菜得到的提取液隨著給藥濃度的增加，幼蟲的行為反應(yīng)增加，且在所測試的濃度范圍內(nèi)，3個(gè)濃度對幼蟲的行為反應(yīng)差異不顯著。以無水乙醇為溶劑提取白菜得到的提取液，給藥濃度為1.00和0.20 g·mL-1時(shí)，幼蟲的行為反應(yīng)率明顯高于CK組，給藥濃度為0.33 g·mL-1，處理組幼蟲行為反應(yīng)與CK組差異不顯著。試驗(yàn)結(jié)果表明，以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇和蒸餾水為試劑提取白菜得到的提取液對斜紋夜蛾幼蟲具有引誘作用。

*表示處理與CK之間存在顯著差異，不同字母表示處理組間差異顯著，圖2同。圖1 斜紋夜蛾幼蟲對白菜不同提取液的行為反應(yīng)

2.2 斜紋夜蛾幼蟲對石斛不同提取液的行為反應(yīng)

采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇和水溶劑提取石斛，得到的提取液對斜紋夜蛾幼蟲行為具有調(diào)節(jié)作用，其調(diào)節(jié)活性與給藥濃度有關(guān)。隨著石斛的石油醚和二氯甲烷提取液濃度的增加，處理組幼蟲反應(yīng)率增加。石斛石油醚提取液給藥濃度為0.33 g·mL-1和二氯甲烷提取液給藥濃度1.00～0.33 g·mL-1時(shí)，處理組幼蟲反應(yīng)率顯著高于CK組；石斛的乙酸乙酯提取液和無水乙醇提液給藥濃度為0.33 g·mL-1時(shí)，處理組幼蟲反應(yīng)率顯著高于CK組；乙酸乙酯和無水乙醇提取液給藥濃度0.20～0.33 g·mL-1、蒸餾水提取液給藥濃度為1.00和0.20 g·mL-1時(shí)，幼蟲的行為調(diào)節(jié)活性高于CK組，但差異不顯著(圖2)。試驗(yàn)結(jié)果表明，以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇和蒸餾水為試劑提取石斛得到的提取液對斜紋夜蛾幼蟲具有引誘作用。

圖2 斜紋夜蛾幼蟲對石斛不同提取液的行為反應(yīng)

2.3 不同植物提取液對斜紋夜蛾幼蟲引誘效果比較

5種溶劑提取白菜和石斛得到的提取液對斜紋夜蛾幼蟲行為調(diào)節(jié)與濃度有關(guān)。在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，白菜的石油醚、乙酸乙酯和蒸餾水等提取液以及石斛的二氯甲烷提取液均對幼蟲具有行為調(diào)節(jié)作用。

石油醚、乙酸乙酯和蒸餾水提取液濃度為1.00、0.33、0.20 g·mL-1，二氯甲烷提取液濃度為1.00和0.33 g·mL-1，無水乙醇提取液濃度為1.00、0.20 g·mL-1，對斜紋夜蛾4～5齡幼蟲的行為具有明顯的調(diào)節(jié)作用。以石油醚為溶劑提取白菜和石斛，不同濃度的提取液對斜紋夜蛾 4～5齡幼蟲的引誘效果差異不顯著，其引誘率在50%～75%。采用二氯甲烷作為溶劑提取2種植物，石斛提取液母液對斜紋夜蛾幼蟲的引誘效果明顯高于石斛其他濃度以及白菜提取液所測試的濃度，其引誘率75.8%。以乙酸乙酯為溶劑，白菜提取液不同給藥濃度和石斛提取液濃度為0.33 g·mL-1時(shí)對斜紋夜蛾的引誘效果差異不顯著；石斛提取液濃度為0.33 g·mL-1對斜紋夜蛾幼蟲的引誘率最高，為80.1%。無水乙醇為溶劑，相同濃度下，2種植物的提取液對斜紋夜蛾幼蟲的引誘率差異不顯著。其中，白菜無水乙醇提取液濃度為0.20 g·mL-1對斜紋夜蛾幼蟲的引誘率最高，其值為70.6%。以蒸餾水為試劑提取3種植物，相同濃度時(shí)，白菜提取液對斜紋夜蛾的引誘率差異不顯著(表1)。

表1 2種植物提取液對斜紋夜蛾幼蟲的引誘效果

注：引誘率為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。

3 小結(jié)與討論

對植物進(jìn)行提取時(shí)，常采用極性溶劑和非極性溶劑及其混合物作為提取試劑，根據(jù)相似相容原理，提取植物中有效成分。常用于提取植物揮發(fā)性物質(zhì)的溶劑為石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇和蒸餾水，采用的提取方法為加熱回流法。

在昆蟲與植物的進(jìn)化過程中，昆蟲對植物釋放的揮發(fā)性物質(zhì)存在不同喜好。由于不同植物釋放的揮發(fā)性物質(zhì)種類和含量存在差異，導(dǎo)致植物對昆蟲的行為調(diào)節(jié)存在引誘和趨避方式。一般情況下，寄主植物對昆蟲具有引誘效果，非寄主植物對昆蟲具有趨避作用，同一植物對昆蟲不同蟲態(tài)，即可表現(xiàn)為引誘效果又可表現(xiàn)為趨避作用。王桂花等[4]報(bào)道，木瓜、棉花和甜瓜等寄主植物提取物對斜紋夜蛾成蟲具有明顯的引誘效果。紫莖澤蘭為斜紋夜蛾非寄主植物，其提取物對斜紋夜蛾幼蟲具有明顯的拒食，蓖麻提取物對斜紋夜蛾成蟲具有明顯的引誘效果，對幼蟲卻表現(xiàn)出明顯的趨避效果[9-10]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇和蒸餾水五種溶劑提取白菜和石斛，其提取液對斜紋夜蛾4～5齡幼蟲均具有一定程度的引誘效果，其中，白菜提取液對斜紋夜蛾的引誘效果高于石斛，不同植物提取液對斜紋夜蛾幼蟲的最佳引誘效果存在差異。對斜紋夜蛾幼蟲具有最佳引誘效果的白菜和石斛的提取試劑為二氯甲烷，其最佳引誘濃度為提取液母液。綜上所述，白菜和石斛提取液對斜紋夜蛾4～5齡幼蟲具有明顯的引誘效果，可應(yīng)用于斜紋夜蛾綠色防治。