王爽,張鑫

(1.鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院，河南 鄭州 450000;2.河南省腫瘤醫(yī)院，河南 鄭州 450000)

蓼科第二大屬酸模屬(Rumex L.)植物-巴天酸模RumexpatientiaL.，在我國長江以北地區(qū)廣泛分布，是較常用中草藥，根部入藥[1]?，F(xiàn)代藥理研究其根具較高的生物活性：如抗結(jié)核，抗腫瘤及抗炎等活性[2-3]；但其嫩莖或葉中也含有較為豐富的營養(yǎng)物質(zhì)[4]。近些年藥學(xué)界過多的關(guān)注其根部位的研究，但對其葉是否也具有較好的藥用前景還尚未可知，本課題通過對巴天酸模葉進(jìn)行系統(tǒng)分離純化，從而闡明其化學(xué)成分填補(bǔ)其藥用機(jī)理研究的不足，揭示其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)，尋找藥物及藥物先導(dǎo)化合物，進(jìn)一步充分開發(fā)巴天酸模資源。我們在其葉乙酸乙酯部位的化學(xué)成分研究中共分離鑒定了15個化合物且均為此部位的首次分離。

1 儀器、試劑和藥材

DRX-500 MHz及Bruker AM-400核磁共振儀(TMS作為內(nèi)標(biāo)，δ為ppm，J為Hz)；Finnigan MAT 90及VGAUTO Spec-3000質(zhì)譜儀；硅膠 (80～100目) 和層析用硅膠(200～300目)(青島海洋化工廠生產(chǎn))；RP-18為40～60 mm(由Merk公司生產(chǎn))；MCI-gel CHP 20P(日本三菱公司產(chǎn)品)；Sephadex LH-20(GE公司產(chǎn)品)等。

顯色劑為10% H2SO4乙醇溶液，試劑均為工業(yè)級經(jīng)重蒸后使用。

巴天酸模葉采自甘肅，經(jīng)鑒定為蓼科酸模屬(Rumex L.)巴天酸模RumexpatientiaL.葉。

2 提取與分離

巴天酸模葉13 kg，經(jīng)80%工業(yè)乙醇(已重蒸)，熱回流提取3次(2 h,2 h,1 h/次)，合并提取液并濃縮至無醇味。濃縮液加蒸餾水分散，依次采用同體積石油醚、乙酸乙酯分別萃取3次，隨后共得到乙酸乙酯部位浸膏150 g。取乙酸乙酯部位浸膏，用氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，反復(fù)硅膠柱層析、MCI-gel CHP 20P、RP-18、Sephadex LH-20等柱色譜法及重結(jié)晶等方法共分離純化得到15個化合物：1～15。

3 結(jié)果及結(jié)論

3.1 化合物的結(jié)構(gòu)

見圖1。

圖1 化合物結(jié)構(gòu)

3.2 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色針狀結(jié)晶：易溶于吡啶，可溶于CHCl3, Me2CO，遇FeCl3-K3[Fe( CN)6] 試劑顯色，說明分子中含有酚羥基，茴香醛-濃硫酸噴霧后加熱顯黃色，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，判定為黃銅類化合物。1HNMR(500 MHz,Pyridine-d5)δ(ppm):13.31(1H,s,4-OH),12.62(1H,br.s,3-OH),8.20(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,5′),7.30(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,6′),6.78(1H,s,H-8),4.00(3H,s,-OCH3),3.98(3H,s,OCH3),3.90(3H,s,OCH3)。13CNMR(125 MHz,Pyridine-d5)δ(ppm):179.3(C-4),162.0(C-4′),159.4(C-7),156.7(C-9),153.3(C-5),152.7(C-2),138.7(C-3),131.1(C-2′,6′),132.9(C-6),121.7(C-1′),116.6(C-3′,5′),106.9(C-10),91.4(C-8),60.7(OCH3),60.0(OCH3),56.5(OCH3)。對比以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]數(shù)據(jù)基本一致，故化合物1鑒定為mikanin。

化合物2：黃色針晶，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，初步判定為黃銅類化合物。1HNMR(400MHz,Acetone-d6),δ(ppm):12.72(1H,s,3-OH),8.45(1H,br.s,5-OH),7.70(1H,dd,J=2.1,8.4Hz,6′-H),7.80(1H,d,J=2.1,2′-H),7.00(1H,d,J=8.4Hz,5′-H),6.82(1H,s,8-H),3.97(3H,s,OMe),3.94(3H,s,OMe),3.90(3H,s,OMe),3.80(3H,s,OMe),13CNMR(100MHz,Acetone-d6),δ(ppm):179.7(4-C),160.0(7-C),91.6(8-C),156.8(2-C),153.5(5-C),153.1(9-C),150.5(4′-C),148.2(3′-C),139.2(3-C),133.1(6-C),106.9(10-C),112.6(2′-C),116.0(5′-C),122.7(1′-C),123.3(6′-C),60.5(-OMe),60.2(-OMe),56.7(-OMe),56.3(-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]中數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物2為3，5-二羥基-6，7，3′，4′-四甲氧基黃酮。

化合物3：淡黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性。1HNMR(500MHz,Pyridine-d5),δ(ppm):13.16(1H,s,5-OH),8.50(1H,d,J=1.6Hz,6′-H),8.09(1H,s,5′-H),7.27(1H,d,J=8.3Hz,5′-H),6.70(1H,d,J=1.6Hz,8-H),6.65(1H,d,J=1.6Hz,6-H),6.10(1H,d,J=7.8Hz,Glc-1″H),4.17～4.81(6H,Glc-2″～6″H)。13CNMR(100MHz,Pyridine-d5)δ(ppm):179.0(C-4),166.2(C-7),162.8(C-5),157.9(C-9),157.7(C-2),150.9(C-4′),146.9(C-3′),135.6(C-3),122.9(C-6′),122.4(C-1′),118.0(C-5′),116.5(C-2′),105.4(C-1″),105.3(C-10),100.0(C-6),94.8(C-8),77.8(C-5″),75.6(C-3″),73.6(C-2″),69.9(C-4″),62.0(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]中數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物3為異槲皮苷。

化合物4：mp:179～182 ℃,黃色針晶,鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性。ESI-MS:m/z447[M-H+]-,C21H20O11。1HNMR(500 MHz,Pyridine-d5)δ(ppm):8.04(1H,d,J=2.1 Hz,H-2′),7.73(1H,dd,J=21 Hz, 8.3 Hz,H-6′),7.38 (1H, d, J=8.3 Hz,H-5′),6.70 (1H,d,J=2.1 Hz,H-8),6.73 (1H, d, J=2.1 Hz,H-6),6.23 (1H, d, J=1.5 Hz, H-1″),5.13 (1H,dd,J=1.5,3.1 Hz, H-2″),4.70(1H,dd,J= 3.1 Hz,9.3 Hz,H-3″),4.39(1H,m,H-4″),4.34(1H,m,H-5″),1.48(3H,d,J=5.7 Hz,H-6″)。13CNMR(125 MHz,Pyridine-d5)δ(ppm):179.5(C-4),166.3(C-7),163.3(C-5),158.7(C-2),158.1(C-9),151.0(C-4′),147.6(C-3′),136.4(C-3),122.7(C-1′),122.8(C-6′),117.6(C-2′),117.0(C-5′),105.8(C-10),104.5(C-1"),102.3 (C-6), 95.1 (C-8),72.5 (C-2″),73.0 (C-3″),72.6 (C-4″),73.7(C-5″),18.8(C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]中數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物4為Quercitrin。

化合物5：白色固體，易溶于丙酮，F(xiàn)eCl3-K3[Fe(CN)6]顯陽性，含酚羥基。1HNMR(500 MHz,Acetone-d6)δ(ppm):7.00(1H,d,J=1.7 Hz,H-2),6.83(1H,d,J=8.0 Hz,H-5),6.86(1H,dd,J=8.0,1.5 Hz,H-6),5.23(1H,d,J=3.7 Hz,H-7),3.38(1H,m,H-8),3.81(3H,s,3-OCH3),7.03(1H,d,J=1.6 Hz,H-2′),6.83(1H,d,J=8.0 Hz,H-5′),6.86(1H,dd,J=8.0,1.5 Hz,H-6′),5.39(1H,d,J=4.2 Hz,H-7′),3.68(1H,m,H-8′),4.29(1Ha,dd,J=9.7,7.3 Hz,H-9′),4.02(Hb,dd,J=9.7,4.8 Hz,H-9′),3.83(3H,s,3′-OCH3)。13CNMR(125 MHz,Acetone-d6)δ(ppm):133.0(C-1),110.3(C-2),148.5(C-3),147.6(C-4),115.8(C-5),119.6(C-6),84.2(C-7),50.2(C-8),177.8(C-9),56.1(3-OCH3),132.2(C-1′),110.2(C-2′),148.2(C-3′),146.9(C-4′),115.6(C-5′),119.2(C-6′),85.8(C-7′),53.6(C-8′),73.3(C-9′),56.2(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道[9-10]基本一致，故鑒定化合物5為4-Ketopinoresinol。

化合物6：白色粉末,C42H52O11,ESI-MS:m/z 767[M+Cl-]-,ESI+MS:m/z 755[M+Na+]+,故分子量為732。1HNMR(400MHz ,Acetone-d6)δ(ppm):7.00(2H,s,J=1.8Hz,H-2,2′) ,7.02(2H,d,J=8.4 Hz,H-5,5′),6.85(2H,dd,J=8.4,1.8 Hz,H-6,6′),5.46(2H,d,J=6.3 Hz,H-7,7′),2.30(2H,m,H-8,8′),0.67(6H,d,J=6.7 Hz,H-9,9′),7.09(2H,d,J=1.8 Hz,H-2″,2″′),6.89(2H,d,J=8.2 Hz,H-5″,5″′),6.97(2H,dd,J=8.2,1.8 Hz,H-6″,6″′) ,4.69(2H,d,J=6.5 Hz,H-7″,7″′),4.36(2H,m,H-8″,8″′),1.08(6H,d,J=6.1 Hz,H-9″,9″′),3.88(6H,s,3,3′-OCH3)。13CNMR(100 MHz,Acetone-d6)δ(ppm):136.9(C-1,1′),111.7(C-2,2′),151.3(C-3,3′),147.4(C-4,4′),117.9(C-5,5′),119.5(C-6,6′),84.2(C-7,7′),44.5(C-8,8′),14.9(C-9,9′),134.9(C-1″,1′″),111.9(C-2″,2″′),149.9(C-3″,3″′),149.7(C-4″,4″′),112.1(C-5″,5″′),120.4(C-6″,6″′),77.3(C-7″,7″′),82.1(C-8″,8″′),16.4(C-9″,9″′),56.2(3,3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道基本一致，故鑒定化合物6為Manassantin A。

化合物7：白色固體，溶于丙酮，F(xiàn)eCl3-K3[Fe(CN)6]顯陽性，含酚羥基。1HNMR(400 MHz,CD3COCD3)δ(ppm):3.08(2H,m,H-8,8′),3.83(2H,dd,J=8.7,3.3 Hz,H-9b,9′b),4.21(2H,dd,J=8.9,6.8 Hz,H-9a,9′a),4.65(2H,d,J=4.0 Hz,H-7,7′),7.20(2H,s,2OH),3.81(12H,s,OCH3),6.68(4H,s,H-2,6,2′,6′)。13CNMR(100 MHz,CD3COCD3)δ(ppm):C55.2(C-8,8′),56.5(OCH3),72.3(C-9.9′),86.7(C-7,7′),104.3(C-2,2′,6, 6′),133.1(C-1,1′),136.1(C-4,4′),148.6 (C-3, 3′, 5, 5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]中數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物7為丁香脂素。

化合物8：淡黃色糖漿狀,溶于氯仿-甲醇。1HNMR(500MHz,Pyridine-d5)δ(ppm):11.01(1H,br.s,4′-OH),9.82(1H,d,J=7.79 Hz,H-3″),7.49(1H,s,H-6),7.27(1H,s,H-4),7.09(2H,s,H-2′,6′),7.50(1H,d,J=15.0 Hz,H-1″),6.89(1H,dd,J=15.0,7.5 Hz,H-2″),6.17(1H,d,J=7.1Hz,H-2),4.30(2H,d,J=5.3 Hz,H-1″′),3.85(3H,s,7-OMe),3.72(6H,s,3′,5′-OMe),3.70(1H,t,J=7.8 Hz,H-3)。13CNMR(100 MHz,Pyridine-d5)δ(ppm):135.3(C-1′),105.0(C-2′,6′),149.4(C-3′,5′),138.0(C-4′),90.0(C-2),54.2(C-3),63.8(C-1″′),131.5(C-5),113.6(C-6),145.2(C-7),152.3(C-8),131.8(C-9),119.3(C-4),153.6(C-1″),128.6(C-2″),193.5(C-3″),56.4(3′,5′-OMe),56.2(7-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]中數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物8為2,3-dihydro-7-methoxy-2-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-3′-hydroxymethyl-5-(2-formylvinyl)-benzofuran。

化合物9：淡黃色針晶,溶于氯仿-甲醇。1HNMR(500 MHz,DMSO-d6)δ(ppm): 7.16 (1H, s,H-4)7.33(1H,d,J=8.0 Hz,H-5),7.38(1H,t,J=8.0 Hz,H-6),7.43(1H,d,J=8.0 Hz,H-7),2.23(3H,s,3-CH3),2.52(3H,s,2-COCH3),5.09(1H,d,J=7.3 Hz,H-glc1′),3.27(1H,m,H-2′),3.43(1H,m,H-3′),3.47(1H,m,H-4′),3.55(1H,m,H-5′),3.80(1H,m,H-6′)。13CNMR(125 MHz, ,DMSO-d6)δ(ppm):150.6(C-1),125.6(C-2),136.1(C-3),119.6(C-4),122.7(C-5),127.8(C-6),111.0(C-7),154.6(C-8),113.5(C-9),133.2(C-10),19.4(3-CH3),32.3(2-COCH3),205.3(2-COCH3),103.0(C-1′),73.7(C-2′),76.6(C-3′),70.1(C-4′),77.9(C-5′),61.0(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]中數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物9為8-O-β-D-glucopyranosyl-6-demethoxytorachrysone。

化合物10 ：淡黃色粉末,溶于氯仿-甲醇。1HNMR(500 MHz,CD3COCD3)δ(ppm):7.13(1H,s,H-4),7.30(1H,d,J=7.9 Hz,H-5),7.36(1H,t,J=7.9 Hz,H-6),7.42(1H,d,J=7.9 Hz,H-7),2.27(3H,s,3-CH3),2.54(3H,s,2-COCH3),5.16(1H,d,J=7.3 Hz,H-1′),3.64-3.72(2H,H-2′,3′,overlapped),3.53(1H,t,J=9.2 Hz,H-4′),3.81(1H,dt,J=9.2,1.8 Hz,H-5′),4.48(1H,dd,J=12.0,1.8 Hz,H-6a),4.28(1H,dd,J=12.0,7.3 Hz,H-6b),2.06(3H,s,6′-COCH3)。13CNMR(125 MHz,CD3COCD3)δ(ppm):152.0(C-1),126.2(C-2),134.3(C-3),120.4(C-4),123.5(C-5),128.0(C-6),111.5(C-7),155.4(C-8),114.5(C-9),137.2(C-10),19.7(3-CH3),32.2(2-COCH3),205.3(2-COCH3),103.6(C-1′),74.4(C-2′),77.5(C-3′),71.1(C-4′),75.3(C-5′),64.0(C-6′),20.7(6′-COCH3),171.1(6′-COCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]中數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物10為Hastatuside B。

化合物11 ：淡黃色粉末,溶于氯仿-甲醇。1HNMR(500 MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.08(1H,s，H-4),6.90(1H,d,J=2.44 Hz,H-5),6.97(1H,d,J=2.44 Hz,H-7),2.21(3H,s,3-CH3),2.49(3H,s,2-COCH3),3.82(3H,s,6-OCH3),5.04(1H,d,J=7.3 Hz,H-1′),3.35(1H,m,H-2′),3.42(1H,m,H-3′),3.45(1H,m,H-4′),3.46(1H,m,H-5′),3.71(1H,m,H-6′)。13CNMR(100 MHz, ,DMSO-d6)δ(ppm):151.1(C-1),123.4(C-2),137.0(C-3),119.0(C-4),102.8(C-5),158.4(C-6),103.2(C-7),155.5(C-8),108.8(C-9),133.9(C-10),19.6(3-CH3),32.4(2-COCH3),204.9(2-COCH3),55.5(6-OCH3),101.4(C-1′),73.5(C-2′),76.4(C-3′),70.1(C-4′),77.9(C-5′),60.9(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]中數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物11為8-O-β-D-glucopyranosyltorachrysone。

化合物12：黃色針晶(乙酸乙酯)。1HNMR( 500 MHz,Pyridine-d5)δ(ppm):12.50(2H,br.s,2OH),8.12(1H,s,H-4),7.67(1H,d,J=2.3 Hz,H-2,overlapped),7.67(1H,s,H-5,J=2.7 Hz,overlapped),6.97(1H,d,J=2.7 Hz,H-7),5.05(2H,s,3-CH2OH)。13CNMR(125 MHz,Pyridine-d5)δ(ppm):163.0(C-1),121.5(C-2),153.9(C-3),117.9(C-4),110.2(C-5),166.0(C-6),108.9(C-7),167.6(C-8),190.8(C-9),182.2(C-10),134.1(C-4a),109.8(C-9a),136.2(C-10a),63.3(-CH2OH)。以上數(shù)據(jù)文獻(xiàn)[17]中數(shù)據(jù)基本一致，故確定化合物12為6-羥基蘆薈大黃素。

化合物13、14：為一黃色粉末狀混合物。

ESI-MS m/z417[M-H]-,835[2M-H]-,817[2M+Cl]-,254[M-Glu+]-, 故分子量為418。分子式為C21H22O9,化合物13和14為一對對映異構(gòu)體，HPLC檢測為單一峰。500 MHz1HNMR和125MHz13CNMR。其數(shù)據(jù)歸屬見表1，綜合HMBC，HSQC和1H-1HCOSY也顯示為一對對映異構(gòu)體混合物，且數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]基本一致，故判定化合物13和14為cassialoin、rumejaposideⅠ。

化合物15：黃色粉末,ESI-MS m/z433[M-H+]-,C21H22O10。1HNMR(500 MHz,DSMO-d6) δ(ppm):7.10(1H,s,4-H),6.86(1H,d,J=2.2 Hz,5-H),6.22(1H,d,J=2.2 Hz,7-H),6.71(1H,s,2-H),12.20和12.01(1,8-OH),3.40(1H,overlapped,1′-H),2.36(3H,s,3-CH3)。13CNMR(100 MHz,DSMO-d6)δ(ppm):160.6(C-1),119.3(C-2),150.3(C-3),116.6(C-4),106.8(C-5),164.7(C-6),101.6(C-7),163.5(C-8),190.5(C-9),75.0(C-10),113.7(C-1a),145.8(C-4a),145.4(C-5a),108.7(C-8a),21.9(3-CH3),84.2(C-1′),80.9(C-5′),77.8(C-3′),71.5(C-4′),70.1(C-2′),61.7(C-6′)。對比以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]一致，故確定為(10R)10-C-β-glucopyranosyl-1,6,8,10-tetrahydroxy-3-methyl-9(10H)-anthracenone。

表1 化合物13或14的核磁數(shù)據(jù)(δ in ppm, J in Hz,CD3OD)

4 結(jié)論及分析

本研究通過對巴天酸模葉的乙酸乙酯部位進(jìn)行系統(tǒng)分離，共得到15個化合物：其中化合物1～4為黃酮類化合物、化合物5～8為木質(zhì)素類化合物、化合物9～11為萘類化合物、化合物12～15為蒽醌類化合物，以上均為巴天酸模葉乙酸乙酯部位的首次分離，將進(jìn)一步豐富了巴天酸模的化學(xué)成分,為巴天酸模葉的藥效學(xué)研究提供依據(jù)。