趙蕾，張媛媛，李軼，杜蘭威，張弘，*

（1.天津市食品研究所有限公司，天津 301609；2.中華人民共和國(guó)天津海關(guān)工業(yè)產(chǎn)品安全技術(shù)中心，天津 300000）

目前，我國(guó)蔬菜種植面積為3.35 億畝左右，產(chǎn)量達(dá)7.69 億噸。蔬菜作為百姓餐桌上最為常見(jiàn)的食物之一，其安全性關(guān)系著百姓的人身安全。因此，農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)就顯得尤為至關(guān)重要。通過(guò)探索，研究農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，力求找尋到一種可以快速、便捷且有效的檢測(cè)多種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法[1-3]。根據(jù)以往農(nóng)藥殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)多種有機(jī)磷農(nóng)藥需要耗費(fèi)大量時(shí)間，需使用不同檢測(cè)方法，不同升溫程序，不同色譜柱檢測(cè)，此文主要目的是找出一種可同時(shí)檢測(cè)出多種有機(jī)磷農(nóng)藥的方法，力求找尋出最短時(shí)，消耗原料最少，檢出效果最佳的方式來(lái)同時(shí)檢測(cè)多種有機(jī)磷農(nóng)藥。

1 材料與儀器

1.1 試劑與材料

乙酸乙酯（色譜純，500 mL/瓶）、氯化鈉（分析純，500 g/瓶）、丙酮（分析純，500 mL/瓶）：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)溶液（敵百蟲(chóng)、敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、滅線(xiàn)磷、甲拌磷、氧樂(lè)果、特丁硫磷、樂(lè)果、甲基對(duì)硫磷、馬拉硫磷、殺螟硫磷、對(duì)硫磷、倍硫磷、水胺硫磷）（濃度均為100 mg/L）：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心；HP-5 毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.250 mm×0.25 μm）、DB-1701 毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.250 mm×0.25 μm）、HP-INNOWAX 毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.250 mm×0.25 μm）：安捷倫公司；三角錐形瓶（250 mL）、量筒（100 mL）、離心管（50 mL）、比色管（10 mL）：天津市玻璃儀器廠(chǎng)。

1.2 試驗(yàn)儀器

Trace 1300 氣相色譜儀：美國(guó)熱電公司；AL204-IC電子分析天平：梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；Sci-NT2800D 超聲波洗滌儀：天津市圣信唯科技有限公司；HY-5 回旋式振蕩器：鞏義市英峪予華儀器廠(chǎng)；LXJ64-01 離心機(jī)：河北省滄州地區(qū)微電機(jī)廠(chǎng)；PGC-08-006 干式氮吹儀：天津艾維歐科技發(fā)展有限公司。

2 氣相色譜條件

2.1 色譜柱的選擇

近幾年氣相色譜分析過(guò)程中，色譜柱已經(jīng)由毛細(xì)管柱取代了原來(lái)較為主流的填充柱，毛細(xì)管色譜柱的優(yōu)勢(shì)在于分離效率高，分析速度快，柱容量小，靈敏度高[4]。

試驗(yàn)選擇不同類(lèi)型的3 種毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行分析，HP-5 為弱極性色譜柱，DB-1701 為中等極性色譜柱，HP-INNOWAX 為強(qiáng)極性色譜柱。將HP-5、DB-1701、HP-INNOWAX 這3 種色譜柱在同一個(gè)柱溫箱升溫程序的條件下進(jìn)行分析，15 種農(nóng)殘的氣相色譜（gas chromatography，GC）圖譜見(jiàn)圖1、圖2、圖3。

從分離情況來(lái)看，DB-1701 毛細(xì)管柱分離15 種，效果最好；HP-5 毛細(xì)管柱分離 10 種，其中某些物質(zhì)峰沒(méi)分開(kāi)；HP-INNOWAX 分離10 種。由此得出，安捷倫公司的DB-1701 毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.250 mm×0.25 μm）作為試驗(yàn)用色譜柱，其分離效果是最好的[5]。

2.2 柱溫箱升溫程序條件的選擇

柱溫箱升溫程序在農(nóng)藥殘留檢測(cè)過(guò)程中是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)，其溫度梯度的變化對(duì)于待測(cè)物中物質(zhì)的分離效能和試驗(yàn)整體的完成時(shí)效有至關(guān)重要的作用。升溫程序的選擇一般原則是根據(jù)混合物的沸點(diǎn)范圍、固定液的配比和檢測(cè)器的靈敏度。升高柱子溫度，可使試驗(yàn)完成時(shí)間縮短，降低柱子升溫速度，有利于各種物質(zhì)在試驗(yàn)過(guò)程中的分離，且可以延長(zhǎng)柱子的壽命。此外，檢測(cè)器溫度一般不低于250 ℃，升溫程序的最高溫度不應(yīng)高于所使用色譜柱的最高溫度，且不低于室溫，進(jìn)樣口溫度不低于進(jìn)樣物質(zhì)中沸點(diǎn)最高的物質(zhì)加50 ℃的溫度。如果有某幾種物質(zhì)沸點(diǎn)接近，出峰時(shí)間接近，可選擇把柱溫箱在此段時(shí)間的升溫速率放緩，或把此兩種物質(zhì)分開(kāi)分析。此外，進(jìn)樣口溫度和檢測(cè)器溫度不得低于柱溫，防止產(chǎn)生逆向氣壓氣體回流所造成的檢測(cè)器污染[6-8]。

圖1 HP-5 毛細(xì)管柱上15 種農(nóng)殘的GC 圖譜Fig.1 Gas chromatograms of 15 pesticide residues on HP-5 capillary column

圖2 DB-1701 毛細(xì)管柱上15 種農(nóng)殘的GC 圖譜Fig.2 Gas chromatograms of 15 pesticide residues on DB-1701 capillary column

圖3 HP-INNOWAX 毛細(xì)管柱上15 種農(nóng)殘的GC 圖譜Fig.3 Gas chromatograms of 15 pesticide residues on HP-INNOWAX capillary column

設(shè)定3 個(gè)柱溫箱升溫程序進(jìn)行研究：

程序（1）：60 ℃（1 min）→10 ℃/min→180 ℃（5 min）→20 ℃/min→270 ℃（5 min）

程序（2）：60 ℃（1 min）→10 ℃/min→180 ℃（5 min）→20 ℃/min→300 ℃（5 min）

程序（3）：80 ℃（1 min）→10 ℃/min→180 ℃（5 min）→20 ℃/min→300 ℃（5 min）

DB-1701 毛細(xì)管柱在程序（1）～程序（3）升溫 15種農(nóng)殘的GC 圖譜見(jiàn)圖4、圖5、圖6。

通過(guò)DB-1701 毛細(xì)管柱在以上3 種升溫程序條件下對(duì)15 種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的分析來(lái)看，程序（1）只能分離11 種農(nóng)藥殘留；程序（2）能分離出12 種農(nóng)藥；程序（3）能很好地分離15 種農(nóng)藥，且出峰很好。

最后確定了程序升溫的條件：進(jìn)樣口溫度250 ℃，檢測(cè)器溫度250 ℃。柱溫箱程序升溫：初始溫度80 ℃，保留1 min；以10 ℃/min 的速度升溫至180 ℃，保留5 min；再以 20 ℃/min 的速度升溫至 300 ℃，保留 5 min。氫氣75 mL/min，空氣100 mL/min，載氣為高純氮?dú)?5 mL/min，尾吹 0.7 mL/min，分流比 10 ∶1。柱溫室升溫程序見(jiàn)表1。

3 樣品前處理及檢測(cè)方法的選擇

3.1 樣品前處理

圖4 DB-1701 毛細(xì)管柱在程序（1）升溫15 種農(nóng)殘的GC 圖譜Fig.4 Gas chromatograms of 15 pesticide residues heated by DB-1701 capillary column in program（1）

圖5 DB-1701 毛細(xì)管柱在程序（2）升溫15 種農(nóng)殘的GC 圖譜Fig.5 Gas chromatograms of 15 pesticide residues heated by DB-1701 capillary column in program（2）

圖6 DB-1701 毛細(xì)管柱在程序（3）升溫15 種農(nóng)殘的GC 圖譜Fig.6 Gas chromatograms of 15 pesticide residues heated by DB-1701 capillary column in program（3）

蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的分析檢測(cè)是從待測(cè)樣品中進(jìn)行提取開(kāi)始，提取效果的好壞與提取溶劑的選擇有密切關(guān)聯(lián)，而提取溶劑的選擇跟待測(cè)樣品中的農(nóng)藥特性、檢測(cè)所使用的方法有關(guān)。為此，選擇提取溶劑的原則是：可以根據(jù)相似相溶的原則，選取既可以溶解待測(cè)農(nóng)藥，又不會(huì)與之發(fā)生反應(yīng)的溶劑，且還需要考量所使用的提取溶劑對(duì)于待測(cè)樣品的提取程度，最好還可以減少對(duì)人體的傷害。在農(nóng)藥殘留的分析過(guò)程中，常用的提取液按照極性由強(qiáng)到弱分別是水、乙腈、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷、苯、甲苯、環(huán)己烷、正己烷、石油醚。在試驗(yàn)中最為常見(jiàn)的提取液為乙腈、甲醇、丙酮、正己烷、石油醚。

表1 柱溫室升溫程序Table 1 Warming procedure of column chamber

選擇乙酸乙酯作為提取液，根據(jù)以往試驗(yàn)得出，乙酸乙酯具有與乙腈同樣的提取效果，且乙酸乙酯揮發(fā)快，溶解能力強(qiáng)，價(jià)格成本低于乙腈，對(duì)人身體造成的傷害也較少。

西紅柿：測(cè)定部位為全果（去柄），用攪拌器采用四分法均勻打散，取25 g 混勻樣品，放置在250 mL 具塞三角錐形瓶中，加入50 mL 色譜級(jí)乙酸乙酯，放置在振蕩器上振蕩30 min，過(guò)濾至50 mL 離心管中，放入6 g左右氯化鈉使水相和無(wú)機(jī)相分層。量取10 mL 濾液，在氮吹儀上吹至近干，用丙酮定容至5 mL，待GC 分析。

3.2 檢測(cè)方法的選擇

3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備

15 種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度分別為100 μg/mL，從每種單標(biāo)分別移取0.5 mL 標(biāo)品至同一個(gè)10 mL 容量瓶，用乙酸乙酯定容至刻度，即配得濃度為5 μg/mL 的15 種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

分別移取15 種農(nóng)藥混標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.02、0.04、0.1、0.2、0.4、1.0 mL 至 6 個(gè) 10 mL 容量瓶，用乙酸乙酯定容至刻度，即配制出濃度為 0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。15 種組分的線(xiàn)性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表2。

表2 15 種組分的線(xiàn)性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)Table 2 Linear range，regression equation and correlation coefficient of 15 components

續(xù)表2 15 種組分的線(xiàn)性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)Continue table 2 Linear range，regression equation and correlation coefficient of 15 components

3.2.3 回收率

本試驗(yàn)挑選不含15 種農(nóng)殘的樣品進(jìn)行了加標(biāo)回收試驗(yàn)。每組樣品進(jìn)行涵蓋在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍內(nèi)的3 個(gè)濃度的加標(biāo)回收試驗(yàn)。

試驗(yàn)分別對(duì)空白樣品進(jìn)行 0.02、0.1、0.5 μg/mL 不同濃度的加標(biāo)回收試驗(yàn)，15 種組分的加標(biāo)回收率均在98.2%～108.2%，其中敵百蟲(chóng)101.1%～104%、敵敵畏99.6%～101%、甲胺磷99.1%～101.2%、乙酰甲胺磷100.4 %～102.8 %、滅線(xiàn)磷98.2 %～100.8 %、甲拌磷100.1%～105.4%、氧樂(lè)果 106.1%～109.1%、特丁硫磷99.7 %～100.6 %、樂(lè)果100.8 %～108.2 %、甲基對(duì)硫磷100.3%～103%、馬拉硫磷100.3%～103.4%、殺螟硫磷100.3%～102.7%、對(duì)硫磷98.8%～103%、倍硫磷99.3%～102.1%、水胺硫磷98.4%～101.8%。

4 結(jié)論與討論

本文以蔬菜中的15種農(nóng)殘作為研究對(duì)象，根據(jù)研究結(jié)果最終選擇DB-1701MS 毛細(xì)管色譜柱，升溫程序?yàn)?0 ℃（1 min）→10 ℃/min→180 ℃（5 min）→20 ℃/min→300 ℃（5 min）。此方法相較于其他方法，具有用時(shí)短，峰形較好，能夠有效分離15 種農(nóng)殘，且各物質(zhì)回收率在98.2%～108.2%的優(yōu)勢(shì)，可用于蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測(cè)[9-10]。