王紅偉，吳夢媛，李雙龍，陳丹丹，高林瑞，邱相君

普洱茶(Camelliasinensisvar.assamica)主要產(chǎn)于云南省的西雙版納，以地理標(biāo)志保護(hù)范圍內(nèi)的云南大葉種曬青茶為原料，并在地理標(biāo)志保護(hù)范圍內(nèi)采用特定的加工工藝制成，是具有獨特品質(zhì)特征的茶葉。按照加工工藝及品質(zhì)特征，分為生茶和熟茶兩種類型。 生茶是以茶葉鮮葉為原料，經(jīng)殺青、揉捻、日光干燥、蒸壓成型等工藝制成的緊壓茶。熟茶是以云南大葉種曬青茶為原料，采用特定工藝、經(jīng)后發(fā)酵(快速后發(fā)酵或緩慢后發(fā)酵)加工形成的散茶和緊壓茶[1]。大益菌方茶屬于普洱熟茶，在加工過程中經(jīng)過渥堆優(yōu)勢菌株發(fā)酵而成。

目前已報道，高脂肪飲食會導(dǎo)致肥胖，普洱茶顯著上調(diào)P-AMPK和抑制FAS，可能通過抑制脂肪酸合成發(fā)揮作用[2]。普洱茶提取物可抑制飲食性肥胖小鼠肝臟中有害、異位的新生脂肪生成，從而保護(hù)小鼠免受肥胖癥的影響；普洱茶提取物顯著降低高脂飲食小鼠的體質(zhì)量和皮下脂肪組織[3]。

本研究通過建立高糖高脂小鼠模型，研究大益4種菌方茶對高脂高糖飲食導(dǎo)致的高糖高脂模型小鼠的治療作用，以期為普洱茶的藥用價值提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物健康雄性普通級昆明系小鼠220只，體質(zhì)量18～22 g，動物合格證號：SCXK(鄂)2010-0007。將小鼠常規(guī)分籠飼養(yǎng)。

1.2 主要試劑和儀器大益菌方茶濃縮提取物A、B、C、D(云南大益微生物技術(shù)有限公司)；M-007全自動生化分析儀(深圳市科技有限公司)；超純水儀器(成都優(yōu)普科技有限公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 大益菌方茶濃縮物的制備取A、B、C、D大益菌方茶各1.0 kg，加入20 000 mL純凈水，加熱至沸騰1 h。冷卻后過濾，將濾液冷凍干燥，得菌方茶濃縮物。 A、B、C、D 4種菌方茶的提取率分別為：191、180、133、179 g·kg-1。

1.3.2 動物的分組為了評價大益菌方茶濃縮物的降糖降脂效果，將220只健康雄性小鼠隨機(jī)分成7組；分別為正常對照組(normal control group，NC)、模型對照組(model control group，MC)、陽性對照組(positive control group，PC)和觀察組(大益菌方茶濃縮提取物DYA、DYB、DYC、DYD組)。NC組給予正常基礎(chǔ)飼料，MC組、PC組和觀察組給予高糖高脂飼料[4]。建模8周。從第9周開始，觀察組灌胃給予大益菌方茶濃縮提取物：DYA組0.318 g·kg-1、DYB組0.300 g·kg-1、DYC組0.222 g·kg-1、DYD組0.298 g·kg-1，PC組灌胃給予83.33 mg·kg-1二甲雙胍和3.33 mg·kg-1洛伐他汀。

1.3.3 動物處理及標(biāo)本采集在第8周末，NC和MC組分別取5只小鼠；然后分別在第11、13和15周，各組取10只小鼠。前一天晚上開始禁食，第二天早上量體質(zhì)量后予10% 水合氯醛腹腔注射麻醉各組小鼠，剖開腹腔，經(jīng)下腔靜脈抽血，3 000 r·min-1離心10 min分離血清。用全自動生化分析儀檢測血清中生化指標(biāo)，剩余的血清樣品在-80 ℃冰箱保存?zhèn)錅y。用酶聯(lián)免疫法檢測血清胰島素胰島素濃度，用全自動生化分析儀檢測血清中葡萄糖(glucose,Glu)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesferol,HDL-C)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine transaminase, ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate amino transferase, AST)、總蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、尿素(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatinine,Cr)的水平。

2 結(jié)果

2.1 大益菌方茶濃縮物對高血糖的影響在高脂飲食前，各組空腹血糖沒有明顯差異。隨著高脂飲食的進(jìn)展，在第8周時，與NC組相比，MC組血清Glu水平明顯增高(P<0.01)，說明造模成功。大益菌方茶濃縮物干預(yù)后5～7周，能顯著降低糖尿病模型大鼠空腹血糖水平，并接近正常值。與NC組和PC組相比，4個觀察組血清Glu水平無明顯差異。見表1。

表1 大益菌方茶對小鼠血糖的影響 mmol·L-1

2.2 大益菌方茶濃縮物對血清胰島素的影響與NC組相比，MC組血清胰島素水平顯著降低，說明高糖高脂飲食小鼠機(jī)體產(chǎn)生了胰島素抵抗。用二甲雙胍和洛伐他汀的PC組，血清胰島素水平升高。大益菌方茶濃縮物治療后，能顯著提高高糖高脂飲食小鼠血清胰島素水平，并接近正常值。第15周各組的胰島素水平見圖1。

圖1 大益菌方茶濃縮物對血清胰島素的影響

2.3 大益菌方茶濃縮物對血脂的影響各項生化指標(biāo)檢測結(jié)果顯示：與NC組相比，MC組的TC、TG、HDL-C顯著升高，與MC組相比，PC組和4個觀察組血清TC和TG水平明顯降低(P<0.01)，HDL-C水平稍升高；與NC組和PC組相比，4個觀察組血清TC、TG和HDL-C水平無明顯差異。第15周各組血脂結(jié)果見圖2。

2.4 大益菌方茶濃縮物對肝功能和腎功能影響的評價與NC組相比，MC組血清ALT、AST、BUN水平明顯增高(P<0.01)，ALB和Cr變化不明顯；與MC組相比，4個觀察組血清ALT、AST、BUN水平明顯降低(P<0.01)；與NC組和PC組相比，4個觀察組血清肝功能和腎功能指標(biāo)無明顯差異。提示，高脂飲食可以增加血清ALT、AST和BUN水平，大益茶濃縮提取物可以使高脂飲食小鼠肝腎功能恢復(fù)正常。各組ALT和AST結(jié)果見圖3。

圖2 大益菌方茶濃縮物對血脂的影響

圖3 大益菌方茶濃縮物對ALT和AST水平的影響(第15周)

3 討論

高血糖是臨床上常見的慢性疾病，近年來其患病率不斷增高。目前，我國糖尿病患病人數(shù)已長時間居世界首位，并預(yù)計仍將持續(xù)較長一段時間[5]。血脂異常與心血管疾病、高脂血癥、肥胖、低膽固醇血癥、冠心病等多種疾病有關(guān)，其中大多數(shù)是對人體健康的巨大威脅。高脂血癥是一種脂質(zhì)代謝異常的疾病，是引發(fā)心腦血管疾病的主要原因之一[6]。糖尿病和高脂血癥常常會合并發(fā)生，可進(jìn)一步導(dǎo)致心血管病、腫瘤等相關(guān)疾病，復(fù)雜的病因機(jī)制也使其在當(dāng)今多學(xué)科領(lǐng)域受到高度關(guān)注。

普洱茶是一種經(jīng)過微生物發(fā)酵后的茶，長期以來一直因其對健康的預(yù)期益處而被食用[7]。這種茶在干燥和蒸制前經(jīng)過采后發(fā)酵階段，在此期間，微生物在味道、顏色和功能成分的生產(chǎn)中起著非常重要的作用。近年來，普洱茶及其成分因其潛在的健康效益而受到了廣泛關(guān)注，如介導(dǎo)血脂代謝，降低心血管疾病和癌癥風(fēng)險，降低血清脂蛋白、TC和TG水平，增加HDL-C水平，并降低LDL-C水平[8]。普洱茶的有益健康作用歸因于它所含的生物活性多酚。充分?jǐn)z入普洱茶，通過調(diào)節(jié)脂肪酸代謝，可預(yù)防或減少體脂，可能降低與肥胖相關(guān)疾病的風(fēng)險。長期攝入普洱茶對緩解肥胖和代謝綜合征非常有益，普洱茶每日攝入可能比其他類似的茶飲料更具有安全抵抗飲食引起的肥胖和代謝綜合征的優(yōu)勢[9]。另外，普洱茶被認(rèn)為可有效地調(diào)節(jié)血脂和防止動脈粥樣硬化，在無載脂蛋白小鼠中，普洱茶通過促進(jìn)動脈粥樣硬化斑塊中巨噬細(xì)胞的凋亡而阻礙動脈粥樣硬化的進(jìn)展[10]。

大益菌方茶是大益公司開發(fā)的普洱茶，在加工過程中經(jīng)過渥堆優(yōu)勢菌株發(fā)酵而成。根據(jù)渥堆的菌株和數(shù)量的不同，分別開發(fā)出A、B、C、D 4種品種；經(jīng)渥堆微生物發(fā)酵后，所含的茶多酚、益原素等含量發(fā)生改變，作用也明顯不同。本研究結(jié)果顯示：4個菌方茶均可明顯降低高脂高糖飲食所致高血糖血脂小鼠模型的血糖水平，提高小鼠體內(nèi)胰島素水平，改善高血糖狀態(tài)，對血脂也有調(diào)節(jié)作用，可以降低TC和TG水平，提高HDL-C水平，改善脂質(zhì)代謝。