巨帥，張英英，潘婷婷

酸棗仁-五味子提取物對小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用研究＊

巨帥，張英英，潘婷婷

（商洛學(xué)院 生物醫(yī)藥與食品工程學(xué)院，陜西 商洛 726000）

以酸棗仁、五味子為主要原料制備了醇水提取物，并通過藥理實(shí)驗(yàn)對其鎮(zhèn)靜催眠效果進(jìn)行評價。結(jié)果表明，與陰性對照組相比，低、中、高劑量酸棗仁-五味子提取物均能有效縮短巴比妥鈉造成的睡眠潛伏期，顯著延長了閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間，顯著提高了戊巴比妥鈉閾下劑量誘導(dǎo)小鼠睡眠發(fā)生率，具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠效果。

酸棗仁；五味子；鎮(zhèn)靜催眠；藤本植物

酸棗仁為鼠李科植物酸棗Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa（Bge）Hu ex H. F. Chou的干燥成熟種子[1]。現(xiàn)代研究表明，酸棗仁有鎮(zhèn)靜催眠、抗抑郁、抗驚厥、抗焦慮、增強(qiáng)免疫力、改善記憶力、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、保護(hù)視網(wǎng)膜細(xì)胞、降血脂、抗動脈粥樣硬化等作用，并對心肌及腦缺氧、缺血有保護(hù)作用，酸棗仁中皂苷類、黃酮類、生物堿類、酚酸類、揮發(fā)油類等均為鎮(zhèn)靜催眠的主要活性成分[2-5]。五味子為木蘭科多年生落葉木質(zhì)藤本植物五味子Schisandra Chinese（Turcz.）Baill.的成熟果實(shí)[6]。

現(xiàn)代藥理研究表明，五味子具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、保肝、保護(hù)神經(jīng)、體外抑菌與殺蟲、抗衰老與抗疲勞、降血糖與降血脂、抑制肌肉萎縮與增強(qiáng)骨骼肌、鎮(zhèn)靜催眠、抗焦慮、改善記憶障礙、鎮(zhèn)咳等作用，且五味子中的五味子醇甲、五味子酯甲和五味子乙素等均為鎮(zhèn)靜催眠的主要活性成分[7-13]。酸棗仁、五味子均有較好的鎮(zhèn)靜催眠作用，本研究旨在對酸棗仁-五味子藥提取物對昆明鼠鎮(zhèn)靜催眠效果進(jìn)行評價。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

實(shí)驗(yàn)藥物為酸棗仁、五味子，產(chǎn)地為陜西商洛，購自商洛市國藥控股有限責(zé)任公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

實(shí)驗(yàn)動物為昆明鼠，體重20～22 g，購自空軍軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

實(shí)驗(yàn)試劑有戊巴比妥鈉，分析純，國藥控股化學(xué)試劑有限公司；阿普唑侖，金花企業(yè)（集團(tuán)）股份有限公司；生理鹽水，上海優(yōu)選生物科技有限公司；乙醇，利安隆博華（天津）醫(yī)藥化學(xué)有限公司。

1.4 儀器

儀器主要有KQ-250E多功能粉碎機(jī)，鉑歐五金廠；DHG-9030A（101）電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；S1-2002電子天平，丹佛儀器（北京）有限公司；RE52-99旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；SHZ-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，上海亞榮生化儀器廠；100目分級篩，新鄉(xiāng)市同心機(jī)械有限責(zé)任公司；KQ-250E超聲波清洗機(jī)，昆山市超聲儀器有限公司。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 酸棗仁-五味子醇水提取物的制備

取2個1 000 mL的圓底燒瓶，依次放入30 g的酸棗仁和五味子；加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%的乙醇浸泡30 min，于85 ℃下回流提取1 h，將煎液過濾保存；再加10倍量水回流提取1 h，將煎液過濾保存；將醇提取液和水提取液混合在一起，減壓濃縮，干燥箱里面烘干成浸膏，密封保存[14]。

1.5.2 酸棗仁-五味子提取物鎮(zhèn)靜催眠作用評價

1.5.2.1 戊巴比妥鈉閾下及閾上睡眠劑量的測定[15-17]

50只小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只。實(shí)驗(yàn)組腹腔注射戊巴比妥鈉，注射劑量的質(zhì)量濃度分別為30 mg/kg、34 mg/kg、38 mg/kg、40 mg/kg，陰性對照組注射等量生理鹽水。15 min后，小鼠的翻正反射消失1 min以上，以確定小鼠的靜息指數(shù)，并記錄進(jìn)入睡眠的小鼠數(shù)量。在小鼠將要睡著但是沒有睡著時（90%～100%），翻正反射不消失的戊巴比妥鈉的最大劑量的藥物劑量即為閾下劑量。

50只小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只。實(shí)驗(yàn)組腹腔注射戊巴比妥鈉，注射劑量的質(zhì)量濃度分別為42 mg/kg、45 mg/kg、49 mg/kg、50 mg/kg，陰性對照組注射生理鹽水。記錄15 min內(nèi)翻正反射消失超過1 min的小鼠數(shù)量，作為睡眠指標(biāo)，剛進(jìn)入睡眠的小鼠的最小劑量（睡眠率100%）為閾上劑量。

1.5.2.2 酸棗仁-五味子提取物對閾下睡眠劑量戊巴比妥鈉致入睡小鼠數(shù)量的影響

50只昆明小鼠被分為5組，每組10只，分組如下：阿普唑侖陽性對照組（0.25 mg/kg）、低劑量組（0.40 g/kg）、中劑量組（0.80 g/kg）、高劑量組（1.60 g/kg）、陰性對照組。實(shí)驗(yàn)組按低、中、高劑量進(jìn)行灌胃給藥，陽性對照組腹腔注射阿普唑侖溶液，陰性對照組注射相同劑量的生理鹽水，給藥1 h后，腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉。觀察并記錄注射戊巴比妥鈉后30 min內(nèi)各組小鼠睡眠情況。

1.5.2.3 酸棗仁-五味子提取物對閾上催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間的影響

50只昆明小鼠被分為5組，每組10只，分組如下：阿普唑侖陽性對照組（0.25 mg/kg）、低劑量組（0.40 g/kg）、中劑量組（0.80 g/kg）、高劑量組（1.60 g/kg）、陰性對照組。實(shí)驗(yàn)組按低、中、高劑量進(jìn)行灌胃給藥，陽性對照組腹腔注射阿普唑侖溶液，陰性對照組注射相同劑量的生理鹽水，給藥1 h后，腹腔注射閾上劑量戊巴比妥鈉，對注射戊巴比妥鈉后各實(shí)驗(yàn)組小鼠睡眠時間進(jìn)行記錄。

1.5.2.4 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 戊巴比妥鈉閾下及閾上睡眠劑量的測定

不同濃度戊巴比妥鈉對小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用具體如表1所示。

表1 不同濃度戊巴比妥鈉對小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用

組別劑量/（mg/kg）入睡動物/只入睡率/（%） 陰性對照組—00 戊巴比妥鈉3000 3400 38110 40220 42550 45990 4910100 5010100

由表1可知，戊巴比妥鈉的質(zhì)量濃度為30 mg/kg、34 mg/kg時小鼠入睡率為0%，質(zhì)量濃度為38 mg/kg時小鼠入睡率為10%，質(zhì)量濃度為40 mg/kg、42 mg/kg、45 mg/kg時小鼠入睡率分別為20%，50%，90%，質(zhì)量濃度為49 mg/kg和50 mg/kg時小鼠入睡率100%。因此，戊巴比妥鈉閾下睡眠劑量的質(zhì)量濃度確定為38 mg/kg，閾上睡眠劑量確定為49 mg/kg。

2.2 酸棗仁-五味子提取物對閾上催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間的影響

酸棗仁與五味子提取物對延長閾上劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間的影響如表2所示。

表2 酸棗仁與五味子提取物對延長閾上劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠時間的影響（n=10，±s）

注：與陰性對照組比，*為＜0.05，**為＜0.01，***為＜0.001。

由表2可知，與陰性對照組比較，阿普唑侖組明顯延長了小鼠睡眠時間，且酸棗仁五味子提取物的低、中、高劑量組均能顯著延長閾上劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時間。

2.3 酸棗仁-五味子提取物對閾下睡眠劑量戊巴比妥鈉致入睡小鼠數(shù)量的影響

酸棗仁-五味子提取物對閾下睡眠劑量戊巴比妥鈉致入睡小鼠數(shù)量的影響如表3所示。

表3 酸棗仁-五味子提取物對閾下睡眠劑量戊巴比妥鈉致入睡小鼠數(shù)量的影響

組別n入睡動物數(shù)/只入睡率/（%） 陰性對照組10110 阿普唑侖組1010100 低劑量組（0.40 g/kg）10220 中劑量組（0.80 g/kg）10550 高劑量組（1.60 g/kg）10880

由表3可知，與陰性對照組相比，各實(shí)驗(yàn)組小鼠入睡率均有所增加。其中阿普唑侖組催眠效果最為明顯，入睡率最大，為100%；酸棗仁-五味子低、中、高劑量組，入睡率隨劑量的增加而增加，高劑量組入睡率為80%。說明在戊巴比妥鈉閾下劑量下，酸棗仁與五味子提取物對于小鼠睡眠發(fā)生率具有較好的誘導(dǎo)作用。

2.4 酸棗仁-五味子提取物對巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠潛伏期的影響

酸棗仁-五味子提取物對巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠潛伏期的影響如表4所示。

表4 酸棗仁-五味子提取物對巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠潛伏期的影響（n=10，±s）

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注：與陰性對照組比，*為＜0.05，**為＜0.01，***為＜0.001。

由表4可知，與陰性對照組相比，阿普唑侖組與酸棗仁五味子提取物的低、中、高劑量組均能有效縮短小鼠巴比妥鈉睡眠潛伏期，使小鼠更快地進(jìn)入睡眠狀態(tài)。

3 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，與陰性對照組相比，酸棗仁-五味子提取物能夠有效縮短巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠的潛伏期，增加閾下睡眠劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡的數(shù)量，延長閾上催眠劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠的睡眠時間，具有明顯的鎮(zhèn)靜催眠作用。

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R285.5

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2019.16.020

2095－6835（2019）16－0049－03

潘婷婷（1988—），女，山西臨汾人，碩士，講師，研究方向?yàn)橹兴庂Y源開發(fā)。

國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（編號：201711396015）

〔編輯：張思楠〕