李旭，李成義，強(qiáng)正澤，何軍剛，祝健鴻，李波，李碩，王燕，鄭貴森

甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000

當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，味甘、辛，性溫，歸肝、心、脾經(jīng)，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)腸通便的功效[1]。當(dāng)歸所含化學(xué)成分復(fù)雜，主要有苯酞類、有機(jī)酸、多糖等[2-3]。其藥理作用廣泛，表現(xiàn)在對(duì)呼吸、循環(huán)、免疫、神經(jīng)等多個(gè)系統(tǒng)的作用，如當(dāng)歸中的成分阿魏酸具有抗血小板凝集、抗血栓形成、保護(hù)心肌等作用，苯酞類成分具有抗腫瘤活性、鎮(zhèn)痛、解痙、降壓、抗炎等作用[4-8]。因此，本研究通過(guò)HPLC同時(shí)測(cè)定當(dāng)歸中有機(jī)酸(綠原酸、阿魏酸)和苯酞類物質(zhì)(洋川芎內(nèi)酯A、正丁基苯酞、Z-藁本內(nèi)酯)的含量，對(duì)不同干燥處理后的當(dāng)歸藥材進(jìn)行分析比較，以期為現(xiàn)代干燥方法的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京科偉永興儀器有限公司)；熱泵干燥設(shè)備(天士力中天藥業(yè))；CEM SAM-255微波干燥箱(美國(guó)CEM公司)；DAF-6020型真空干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；Agilent 1100高效液相色譜儀(G13158 DAD檢測(cè)器，美國(guó)Agilent公司)；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；FW177型中草藥粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)；CAV214C型電子天平(美國(guó)奧豪斯公司)；BT25S型1/100 000電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司)；Milli-Q Century超純水機(jī)(德國(guó)默克公司)。

1.2 材料

阿魏酸(批號(hào)：110753-201718，純度≥99.6%)、綠原酸(批號(hào)：110773-201012，純度≥99.3%)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；洋川芎內(nèi)酯A(批號(hào)：62006-39-7，純度≥98%)、正丁基苯酞(批號(hào)：6066-49-5，純度≥98%)、Z-藁本內(nèi)酯(批號(hào)：4431-01-0，純度≥98%)均購(gòu)自北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院；乙酸(分析純，煙臺(tái)市雙雙化工有限公司，批號(hào)：20140103)；甲醇(分析純，批號(hào)：20171101)、甲醇(色譜純，批號(hào)：20171215)、乙腈(色譜純，批號(hào)：20180118)均購(gòu)自天津市大茂化學(xué)試劑廠。

當(dāng)歸新鮮樣品采自甘肅岷縣同一樣地，經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院李成義教授鑒定，為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的根。將采集的新鮮當(dāng)歸根隨機(jī)分為14份，做不同的干燥處理，得到的干燥藥材粉碎后過(guò)50目篩，樣品信息見(jiàn)表1。

表1 當(dāng)歸樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為TC-C18(2)色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈(A)-1%乙酸水溶液(B)，梯度洗脫(0～25 min，5%～25%A；25～40 min，25%～55%A；40～60 min，55%～80%A)，流速0.6 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL[9]。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定適量的阿魏酸、綠原酸、洋川芎內(nèi)酯A、正丁基苯酞于10 mL容量瓶中，甲醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為0.21、0.25、0.14、0.06 mg·mL-1的混合對(duì)照品溶液；取Z-藁本內(nèi)酯對(duì)照品適量，精密稱定，甲醇溶解并定容，配制成質(zhì)量濃度為3.05 mg·mL-1的Z-藁本內(nèi)酯對(duì)照品溶液。對(duì)照品溶液色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3 供試品溶液的制備

取當(dāng)歸藥材粉末1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入20 mL 50%甲醇，精密稱定。超聲提取40 min后冷卻，再以50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置。取上清液過(guò)0.45 μm微孔濾膜，即為供試品溶液。供試品溶液色譜圖見(jiàn)圖1。

注：A.混合對(duì)照品溶液；B.Z-藁本內(nèi)酯對(duì)照品溶液；C.供試品溶液；1.綠原酸；2.阿魏酸；3.洋川芎內(nèi)酯A；4.正丁基苯酞；5.Z-藁本內(nèi)酯。圖1 對(duì)照品和供試品溶液色譜圖

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性范圍考察 精密吸取混合對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、2.0、3.0 mL于5 mL容量瓶中，甲醇定容，搖勻。精密吸取Z-藁本內(nèi)酯對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 mL于5 mL容量瓶中，甲醇定容，搖勻。按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。以5個(gè)成分的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，得回歸方程，見(jiàn)表2。

表2 5個(gè)成分的回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍

2.4.2 精密度試驗(yàn) 取S4號(hào)樣品約1.0 g，精密稱定，按2.1、2.3項(xiàng)下方法測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算得5個(gè)成分含量的RSD為0.14%～1.65%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取S4號(hào)樣品約1.0 g，精密稱定，按2.1、2.3項(xiàng)下方法測(cè)定，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算得5個(gè)成分含量的RSD為0.37%～2.83%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取S4號(hào)樣品6份，每份約1.0 g，精密稱定，按2.1、2.3項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算得綠原酸、阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A、正丁基苯酞、Z-藁本內(nèi)酯的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.06、1.03、0.47、0.25、16.62 mg·g-1，RSD為1.26%～2.53%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取S4號(hào)樣品6份，每份約0.5 g，精密稱定，對(duì)照品加入量與供試品中待測(cè)定成分量之比為1∶1，按2.1、2.3項(xiàng)下方法測(cè)定，加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。由表中各成分回收率及RSD可以看出，該方法準(zhǔn)確度良好。

2.5 樣品含量測(cè)定

取14批不同方法干燥的當(dāng)歸藥材，每批樣品3份，每份約1.0 g，精密稱定，按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以干燥品計(jì)算，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 5個(gè)成分的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表4 當(dāng)歸不同干燥品成分測(cè)定結(jié)果 mg·g-1

注：—表示含量很低。

3 討論

本研究采用HPLC同時(shí)測(cè)定不同干燥方法處理后當(dāng)歸藥材的指標(biāo)成分，發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸不同干燥品的指標(biāo)成分含量存在差異性，同一成分的含量相差數(shù)倍。阿魏酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.749 1～1.486 9 mg·g-1，變幅較小，均符合2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定(含阿魏酸不得少于0.050%)，其中，60 ℃熱泵干燥品阿魏酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，為1.486 9 mg·g-1。綠原酸以80 ℃微波干燥的藥材質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，為2.788 5 mg·g-1。洋川芎內(nèi)酯A以50 ℃熱泵干燥的藥材質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，為1.068 2 mg·g-1。正丁基苯酞以40 ℃減壓干燥的藥材質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，為0.848 1 mg·g-1。Z-藁本內(nèi)酯以60 ℃熱泵干燥的藥材質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，為22.270 4 mg·g-1。

干燥方式對(duì)當(dāng)歸藥材外觀性狀的影響集中在表面、斷面顏色和氣味3個(gè)方面。熏干當(dāng)歸表面顏色為棕褐色，其余為淺棕色。低溫干燥(如：陰干、40 ℃烘干、40 ℃熱泵干燥)當(dāng)歸斷面色多黃白，較高溫干燥則為黃棕色，偶有焦斑，熏干當(dāng)歸為黃褐色。陰干、低溫干燥、微波干燥、熏干當(dāng)歸氣味較濃郁，微波干燥、較高溫干燥當(dāng)歸有焦香味，熏干當(dāng)歸則為煙熏味。與傳統(tǒng)陰干當(dāng)歸相比，熱泵干燥和低溫烘干當(dāng)歸性狀與之最為接近，基于“辨狀論質(zhì)”觀點(diǎn)，可將此兩種干燥方法作為當(dāng)歸適宜產(chǎn)地加工干燥方法。

以經(jīng)濟(jì)可行性的角度評(píng)價(jià)不同干燥方法，陰干、曬干、熏干為自然干燥，無(wú)電能消耗，設(shè)備干燥總能耗因干燥設(shè)備參數(shù)及干燥周期的不同而不同。本研究中，烘干、微波干燥、減壓干燥在實(shí)驗(yàn)室小設(shè)備中進(jìn)行，設(shè)備輸出功率低，耗電量低。熱泵干燥在產(chǎn)地大型干燥設(shè)備中進(jìn)行，設(shè)備輸出功率高，耗電量高。干燥設(shè)備規(guī)格不一致，上述分析結(jié)果存在一定的局限性。從規(guī)模化、規(guī)范化加工生產(chǎn)的角度分析，自然干燥難以形成規(guī)范，微波干燥、減壓干燥仍處在實(shí)驗(yàn)室研究階段，烘干、熱泵干燥具有明顯優(yōu)勢(shì)。

目前市場(chǎng)上流通的當(dāng)歸以陰干、曬干為主要的加工方式，干燥時(shí)間長(zhǎng)，易受自然環(huán)境因素影響。本研究將熱泵干燥應(yīng)用于當(dāng)歸藥材的產(chǎn)地加工，同傳統(tǒng)陰干、曬干相比，具有一定的優(yōu)勢(shì)，耗時(shí)短，對(duì)指標(biāo)成分的保留有一定的作用，適用于大規(guī)模干燥；同相同溫度熱風(fēng)干燥(烘干)相比，指標(biāo)成分阿魏酸、洋川芎內(nèi)酯A和Z-藁本內(nèi)酯的含量較高。因此，可將熱泵干燥作為當(dāng)歸藥材產(chǎn)地加工干燥處理的新方法。