覃雙來(lái)，趙賓賓，關(guān)江鋒，吳永貴，張秋*

(1.武漢市第一醫(yī)院，湖北 武漢 430022；2.湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065)

通過(guò)電針聯(lián)合疼痛貼對(duì)骨癌痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)脛骨癌痛模型大鼠伴隨有神情呆漠、活動(dòng)度降低、飲食減少、毛發(fā)干枯等抑郁樣行為，考慮該模型存在抑郁樣改變。電針具有較好的安神鎮(zhèn)痛作用，氟西汀片具有較好的抗抑郁作用，而癌痛是產(chǎn)生抑郁的主要原因，電針聯(lián)合氟西汀片可能會(huì)通過(guò)止痛和抗抑郁治療，從而改善脛骨癌痛模型大鼠的抑郁樣行為。本研究通過(guò)觀察脛骨癌痛模型大鼠抑郁樣行為學(xué)的改變，為臨床上推廣應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物來(lái)源

雄性SPF級(jí)SD大鼠(180～200 g)及幼鼠(60～80 g)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料均購(gòu)于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，許可證號(hào)SCXK(鄂)2015-0018。于湖北中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)中心(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)飼養(yǎng)，許可證號(hào)SYXK(鄂)2012-0067。室溫18℃～20℃，相對(duì)濕度50%～60%，12 h晝夜循環(huán)燈照，動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后進(jìn)行造模。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處置均符合科技部2006年頒布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》的規(guī)定。

1.2 試劑與器材

曠場(chǎng)試驗(yàn)分析系統(tǒng)(JLBehv-LA，上海吉量)；韓氏穴位神經(jīng)刺激儀(LH202H，中國(guó)，HANS)；氟西汀片由武漢市第一醫(yī)院制劑中心提供。

1.3 方法

1.3.1 模型的建立及分組

Walker-256乳腺癌細(xì)胞，購(gòu)于武漢大學(xué)生物中心，注射至60～80 g幼鼠腹腔(4×107cells/mL)，接種7天后收集癌性腹水，離心3 min(1 300 rpm)，沉淀后,用10mL PBS洗滌,再次離心沉淀,然后以PBS重懸計(jì)數(shù),調(diào)整至適當(dāng)濃度(4×106cells/mL),置于冰盒內(nèi)備用。對(duì)大鼠進(jìn)行適應(yīng)性刺激，篩選出連續(xù)3天的機(jī)械縮足閾值(Mechanical withdrawal threshold，MWT)≥26 g的大鼠，參照Medhurst的方法[6-7]建立脛骨癌痛模型。腹腔注射10%水合氯酸(4 mL/kg體質(zhì)量)麻醉大鼠,仰臥位固定于操作臺(tái)上，右側(cè)膝關(guān)節(jié)部位備皮,碘伏消毒皮膚。在無(wú)菌條件下，左手固定膝關(guān)節(jié)使其表面皮膚緊張,用7號(hào)針頭在膝關(guān)節(jié)髕韌帶內(nèi)側(cè)緣沿脛骨縱軸往脛骨遠(yuǎn)端鉆孔,深約1 cm。然后換用微量進(jìn)樣器往脛骨骨髓腔內(nèi)注入4 μL腫瘤細(xì)胞，最后推入2 μL凝膠海綿溶液封口。另有大鼠12只，注射等量PBS后推入2 μL凝膠海綿溶液封口，作為空白對(duì)照組(空白組)。所有注射后均留針1 min,防止注射物滲出。術(shù)后9～13天MWT持續(xù)≤8 g的大鼠視為造模成功，成模率約為50%。建立大鼠脛骨癌痛模型，挑選表現(xiàn)有神情呆漠、活動(dòng)度降低、飲食減少、毛發(fā)干枯等抑郁樣行為的大鼠48只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組(模型組)、電針治療組(電針組)、氟西汀片治療組(氟西汀組)和電針聯(lián)合氟西汀片治療組(聯(lián)合治療組)4組，各組分籠飼養(yǎng)，做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 干預(yù)方法

空白組與模型組正常飼養(yǎng)，無(wú)特殊干預(yù)。電針組：按照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》定位[8]，將大鼠軀干固定于布制的柔軟鼠套中，露出頭部，待大鼠安靜后用碘伏消毒，“百會(huì)”穴向后頭部平刺進(jìn)針，用0.25 mm×13 mm針灸針直刺約5～10 mm接電針，通過(guò)韓氏穴位神經(jīng)刺激儀給予“疏密波”,電針頻率為2 Hz/100 Hz，刺激強(qiáng)度為0.5～1.5 mA，以穴位局部出現(xiàn)皮膚肌肉輕微顫動(dòng)為宜，持續(xù)30 min，每日1次，連續(xù)12天。氟西汀組：0.2%氟西汀按10 mg/kg灌胃，每日1次，連續(xù)12天。聯(lián)合組：電針治療，0.5 h后0.2%氟西汀按10 mg/kg灌胃。各組自造模成功后第3天起，每天干預(yù)1次，連續(xù)12天，在干預(yù)完成后30 min內(nèi)，完成指標(biāo)測(cè)定。

1.3.3 曠場(chǎng)試驗(yàn)

本研究結(jié)果顯示，高脂血癥性和酒精性胰腺炎構(gòu)成比升高，膽源性胰腺炎構(gòu)成比下降，與其他研究結(jié)果一致[15-16]。這種變化與醫(yī)療水平的提高使膽道疾病得到很好的干預(yù)有關(guān)；同時(shí)還與社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們飲食及生活習(xí)慣的改變有著密切的關(guān)系[17]。飲食結(jié)構(gòu)的變化、酗酒及其他不良生活習(xí)慣導(dǎo)致高脂血癥和肥胖患者明顯增加[18-19]，血清三酰甘油持續(xù)>10 mmol/L或更高時(shí)就會(huì)誘發(fā)AP[20-21]。從AP病因譜變化來(lái)看，我國(guó)魯西南地區(qū)AP的發(fā)病原因由膽道系統(tǒng)疾病逐漸變?yōu)楦咧Y，因此積極改善人們的飲食結(jié)構(gòu)和生活方式，降低高脂血癥的患病率已迫在眉睫。

實(shí)驗(yàn)箱為80 cm×80 cm×80 cm的方形玻璃盒。清潔實(shí)驗(yàn)箱后，將其放在與計(jì)算機(jī)上曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)分析軟件相連的隔音箱中。將大鼠放在實(shí)驗(yàn)箱中央后觀察其15 min的自由活動(dòng)，應(yīng)用動(dòng)物行為視頻跟蹤分析系統(tǒng)跟蹤記錄5 min,分析大鼠的活動(dòng)總路程。

1.3.4 懸尾實(shí)驗(yàn)(TST)

將大鼠尾部固定后使大鼠頭部距離底面約5 cm，適應(yīng)2 min后以攝像機(jī)進(jìn)行記錄大鼠的不動(dòng)時(shí)間。計(jì)算2～6 min大鼠的無(wú)肢體掙扎的不動(dòng)時(shí)間總和。

1.3.5 強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)(FST)

強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)在直徑23 cm高60 cm裝滿一半水的測(cè)試桶中進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食不禁水12 h。在造模前1天進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，大鼠強(qiáng)迫游泳15 min后回籠, 在造模第12天進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。記錄內(nèi)容為5 min內(nèi)大鼠在水中停止掙扎、呈漂浮狀態(tài),或僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面的不動(dòng)時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 曠場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果

在曠場(chǎng)試驗(yàn)中，模型組、電針組、氟西汀組和聯(lián)合治療組大鼠的活動(dòng)里程低于空白組(P<0.01)；空白組、電針組、氟西汀組和聯(lián)合治療組大鼠的活動(dòng)里程高于模型組(P<0.01)。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠曠場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果比較

注：與空白組比較，aaP<0.01；與模型組比較，bbP<0.01。

2.2 懸尾試驗(yàn)結(jié)果

在懸尾試驗(yàn)中，模型組、電針組、氟西汀組大鼠的不動(dòng)時(shí)間高于空白組(P<0.01)；空白組、電針組、氟西汀組和聯(lián)合治療組大鼠的不動(dòng)時(shí)間低于模型組(P<0.01)。結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠懸尾試驗(yàn)結(jié)果比較

注：與空白組比較，aaP<0.01；與模型組比較，bbP<0.01。

2.3 強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)結(jié)果

在強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中，模型組、電針組、氟西汀組大鼠的不動(dòng)時(shí)間高于空白組(P<0.01)；空白組、電針組、氟西汀組和聯(lián)合治療組大鼠的不動(dòng)時(shí)間低于模型組(P<0.01)。結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)結(jié)果比較

注：與空白組比較，aaP<0.01；與模型組比較，bbP<0.01。

3 討論

癌癥是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一，骨轉(zhuǎn)移癌是癌癥晚期常見的并發(fā)癥，疼痛是骨轉(zhuǎn)移最主要的癥狀[9]，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量[10]。絕大多數(shù)患者因癌痛相關(guān)知識(shí)缺乏，一旦出現(xiàn)疼痛會(huì)產(chǎn)生不同程度的抑郁[11]。國(guó)外Hoos等[12]首先報(bào)道了癌癥患者治療中存在著疼痛引起的抑郁狀態(tài)。大量研究報(bào)道了癌癥患者疼痛與抑郁的相關(guān)性[13],疼痛和抑郁通過(guò)反復(fù)的惡性循環(huán)相互影響和促進(jìn)[14]。癌痛會(huì)導(dǎo)致患者情緒低落，產(chǎn)生抑郁，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[15]。而抑郁對(duì)疼痛的發(fā)生以及疼痛的頻率、持續(xù)時(shí)間、程度也具有很大影響[16]，抑郁情緒會(huì)加重患者對(duì)疼痛的感知，降低鎮(zhèn)痛治療的效果。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的兩種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)——去甲腎上腺素(NE)和5-羥色胺(5-HT)在疼痛信號(hào)的加工處理和疼痛的調(diào)節(jié)中扮演著重要角色。這兩種物質(zhì)的功能狀態(tài)決定了一個(gè)人對(duì)疼痛的感覺，即NE和(或) 5-HT功能低下時(shí)，疼痛閾值下降，產(chǎn)生疼痛。相關(guān)研究顯示，抑郁癥的主要病理改變表現(xiàn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，突出表現(xiàn)為中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)尤其是NE和5-HT的功能低下，這樣就在疼痛和抑郁癥之間建立了聯(lián)系：中樞神經(jīng)系統(tǒng)5-HT 和 NE 的功能失調(diào)。

針灸療法以其獨(dú)特的理論體系，廣泛應(yīng)用于癌痛治療領(lǐng)域。百會(huì)穴居顛頂，是足三陽(yáng)經(jīng)、肝經(jīng)和督脈等多經(jīng)交會(huì)的部位，內(nèi)通于腦，為百脈聚會(huì)之所在，各經(jīng)脈氣會(huì)聚之處，能連貫周身經(jīng)穴，通達(dá)陰陽(yáng)脈絡(luò)。百會(huì)穴性屬陽(yáng)，陽(yáng)中寓陰，對(duì)于調(diào)節(jié)機(jī)體的陰陽(yáng)平衡起著重要的作用，是調(diào)節(jié)大腦功能的重要穴位。針刺百會(huì)可以調(diào)節(jié)元神, 安神鎮(zhèn)痛。

電針是現(xiàn)代科學(xué)與中醫(yī)學(xué)的結(jié)合產(chǎn)物, 是在針刺的基礎(chǔ)上接通電流，在脈沖電流的作用下，通過(guò)結(jié)合針和電的雙重刺激，調(diào)節(jié)細(xì)胞膜兩側(cè)的離子分布情況和極化狀態(tài)，從而發(fā)揮治療作用?；A(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，電針刺激百會(huì)穴可使大鼠腦內(nèi)5-HT含量增加，增強(qiáng)選擇性 5-HT 再攝取抑制劑藥物的抗抑郁效果，減少大鼠模型的海馬結(jié)構(gòu)損傷和功能異常，改善大鼠的抑郁樣行為和認(rèn)知障礙[17]。

目前臨床上常用的三環(huán)類抗抑郁藥物能阻止中樞神經(jīng)突觸前膜對(duì)去甲腎上腺素的再攝取,阻斷Ach,以達(dá)到抗抑郁的目的。但三環(huán)類抗抑郁藥毒副作用較大，患者耐受性差。5-HT再攝取抑制劑氟西汀能夠增加突觸間隙中對(duì)5-HT的傳遞信息,緩解抑郁，安全性相較三環(huán)類抗抑郁藥物具有明顯優(yōu)勢(shì)。氟西汀可以上調(diào)患者的疼痛閾值和情感體驗(yàn)，同時(shí)通過(guò)影響 NE、5-HT 及阿片類受體等從而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效果[18]，切斷抑郁和疼痛的負(fù)性相互作用，并發(fā)揮止痛的協(xié)同作用，減少患者精神痛苦,改善患者軀體癥狀。

曠場(chǎng)試驗(yàn)中模型組大鼠的活動(dòng)里程低于空白組，而懸尾試驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中模型組大鼠的不動(dòng)時(shí)間均高于空白組，提示與空白組相比，脛骨癌痛模型大鼠存在抑郁樣行為學(xué)改變。曠場(chǎng)試驗(yàn)中3組治療組的大鼠的活動(dòng)里程均高于模型組，而懸尾試驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中模型組大鼠的不動(dòng)時(shí)間均低于模型組，提示電針治療、氟西汀治療以及聯(lián)合治療均可以改善脛骨癌痛模型大鼠的抑郁樣行為學(xué)改變。

目前關(guān)于針?biāo)幗Y(jié)合的研究日益增多，針?biāo)幗Y(jié)合，相輔相成，互相協(xié)同，其療效顯著優(yōu)于單一治療。本研究的結(jié)果具有積極意義，為痛-抑郁二聯(lián)征提供了新的研究手段，肯定了電針治療、氟西汀治療以及聯(lián)合治療對(duì)骨癌痛大鼠抑郁樣行為的改善作用，且多項(xiàng)指標(biāo)反應(yīng)出電針聯(lián)合氟西汀治療較單純的電針治療或氟西汀治療更加有效，為擴(kuò)大臨床應(yīng)用提供了思路和借鑒。下一步應(yīng)增加樣本量并優(yōu)化取穴，探討作用機(jī)制，擴(kuò)大治療效果和應(yīng)用范圍。