胡燕寧　劉小高　董敏

[摘要] 臨床上針對白血病的發(fā)病機(jī)制以及治療方案的探索一直都是大家普遍關(guān)注的問題，而白血病細(xì)胞小鼠白血病模型的建立則是實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)的重要途徑及手段。在該次研究中首先介紹了白血病的致病因素及其分類，接著闡述了建立白血病模型的小鼠類型以及白血病細(xì)胞小鼠白血病模型的構(gòu)建方法，最后探討了白血病細(xì)胞小鼠白血病模型的應(yīng)用前景，以供參考。

[關(guān)鍵詞] 白血病;小鼠模型;致病因素;應(yīng)用前景

[中圖分類號] R733? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-0742（2019）05（c）-0196-03

[Abstract] The clinical investigation of the pathogenesis and treatment of leukemia has always been a common concern， and the establishment of leukemia cell leukemia model is an important way and means to achieve this goal. In this study， the author first introduced the pathogenic factors and classification of leukemia， and then described the mouse type of leukemia model and the construction method of mouse leukemia model of leukemia cells. Finally， the application of mouse leukemia model in leukemia cells was discussed for reference.

[Key words] Leukemia; Mouse model; Pathogenic factors; Application prospects

白血病屬于目前臨床上的一種常見疾病類型，該病癥以人體中的造血細(xì)胞失控性增殖為主要特點(diǎn)，該病屬于造血干細(xì)胞惡性克隆性疾病，克隆性白血病細(xì)胞因?yàn)榈蛲鍪茏?、分化障礙以及增殖失控等機(jī)制在骨髓和其他造血組織中大量增殖累積，并浸潤其他非造血組織和器官，同時對骨髓中的造血細(xì)胞的造血功能具體顯著的抑制性作用[1]。目前臨床上許多學(xué)者也針對該病制定和進(jìn)行了許多的研究，并提出在白血病的患病過程中腫瘤干細(xì)胞起著極為關(guān)鍵的作用，并且這對該病的發(fā)病機(jī)制和病因建立起一套科學(xué)的模型進(jìn)行研究，具有極為重要的臨床意義[2-3]。

1? 白血病的致病因素及其分類

1.1? 白血病的致病因素

白血病屬于臨床上一種常見病癥類型，其直接致病原因?yàn)槿梭w中的造血干細(xì)胞出現(xiàn)惡性增殖，進(jìn)一步致使患者的造血組織以及骨髓中出現(xiàn)大量無核白血細(xì)胞，該類細(xì)胞失去了進(jìn)一步分化的能力，而導(dǎo)致其停滯在細(xì)胞分化過程中的某一階段。從深層次來看，導(dǎo)致白血病的發(fā)病機(jī)制異常復(fù)雜，就現(xiàn)階段的研究結(jié)果來看，導(dǎo)致白血病的因素主要包括遺傳因素、化學(xué)因素、病毒感染、各種輻射以及藥物作用等[4]。

1.2? 白血病的分類

就目前而言，臨床上根據(jù)發(fā)病程度將白血病分為慢性病及急性病2大類，具體而言主要分為慢性淋巴細(xì)胞白血病、慢性髓系白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病以及急性髓系白血病。

2? 構(gòu)建小鼠白血病模型的臨床意義

近些年，各種研究癌癥的動物模型紛紛出現(xiàn)，并且借助這些動物模型，臨床上針對癌癥的研究也取得了較大的進(jìn)步和發(fā)展。具體而言，構(gòu)建這些癌癥研究動物模型可以有效幫助人們認(rèn)識這些癌癥病癥的病理學(xué)特征、發(fā)病機(jī)制以及各種生化免疫方面的特點(diǎn)[5]。而之所以在進(jìn)行疾病研究時要采用小鼠為材料，其原因在于鼠科動物繁殖起來相對方便，且其造血系統(tǒng)以及遺傳學(xué)特性均和人類較為相似。

3? 建立白血病的細(xì)胞株

其中慢性淋巴細(xì)胞白血病的細(xì)胞株：HS505.T。慢性髓系白血病的細(xì)胞株：K562。急性淋巴細(xì)胞白血病的細(xì)胞株：MCLT-3及Jurkat。急性髓系白血病的細(xì)胞株：M0：M091;M1：KG1a;M2：Kasuml1;M3：NB4以及HL60; M4：ML2;M5：THP1以及MV-4-11;M6：HEL;M7：M07e。

4? 建立白血病模型的小鼠類型

臨床上經(jīng)常用于構(gòu)建白血病模型的小鼠類型主要分為突變系以及近交系。

4.1? 突變系小鼠

4.1.1? NOD/SCID小鼠? NOD/SCID小鼠，即指的是非肥胖糖尿病型重癥聯(lián)合免疫缺陷型小鼠（TGB和NK聯(lián)合缺陷，較易成功移植到不同的物種，NOD/SCID小鼠是目前臨川上最容易建立構(gòu)建白血病模型的小鼠類型。在對臨床化療方案設(shè)計的指導(dǎo)中，NOD/SCID小鼠已經(jīng)顯示出了極為突出的臨床療效，該小鼠類型已經(jīng)逐漸成為目前臨床上血液學(xué)實(shí)驗(yàn)研究的必要性工具[6]。但是采用該類型小鼠進(jìn)行白血病模型構(gòu)建的時候也會存在一定的缺陷，即該種類型的小鼠的價格通常較高，因此在采用該種類型小鼠進(jìn)行大型的試驗(yàn)的時候，經(jīng)常成本會比較高。

4.1.2? SCID小鼠? SCID小鼠，即指嚴(yán)重B淋巴細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞聯(lián)合免疫缺陷小鼠，是構(gòu)建白血病模型的有效小鼠類型。該類型小鼠淋巴結(jié)無明顯皮質(zhì)區(qū)，無麩皮質(zhì)區(qū)，并有網(wǎng)狀細(xì)胞占據(jù)。小腸粘膜下和支氣管淋巴集結(jié)較少見，結(jié)構(gòu)內(nèi)無淋巴聚集[7]。特別值得注意的是，少數(shù)SCID小鼠，在青年期可出現(xiàn)一定程度的免疫功能恢復(fù)，此即為SCID小鼠的滲漏現(xiàn)象。其滲漏現(xiàn)象不遺傳，但與小鼠的飼養(yǎng)環(huán)境、品系以及年齡等有關(guān)。SCID 小鼠極易感染，在高度潔凈的SPF環(huán)境下可存活1年以上。

4.1.3? BALB/c-nude小鼠 BALB/c-nude小鼠，即指裸小鼠，這種類型的老鼠是1962在英國的非近親繁殖的老鼠中發(fā)現(xiàn)的無毛老鼠。該小鼠具有先天性T淋巴細(xì)胞以及胸腺功能缺失。通過將裸基因?qū)肫渌∈笃废?，從而獲得BALB/c-nude類型的小鼠。純合裸鼠（NU/NU）無毛發(fā)和胸腺。成年裸鼠的NK細(xì)胞活性要顯著高于正常小鼠，但粒細(xì)胞數(shù)量和活性卻要低于正常小鼠。目前，裸鼠已成為白血病領(lǐng)域不可缺少的臨床實(shí)驗(yàn)研究工具。

4.2? 近交系小鼠

4.2.1? BALB/c小鼠 BALB/c小鼠的毛色為白色，其脾臟、肝臟等器官的重量及體積都要比普通小鼠大，該類型小鼠的基因型為：Aabbcc。據(jù)既往臨床研究發(fā)現(xiàn) BALB/c 小鼠雄鼠的白血病發(fā)病率為10%，雌鼠的白血病發(fā)病率為12%?；谠摲N類型的小鼠對射線均較為敏感，因此其在白血病的臨床試驗(yàn)中也具有較為廣泛的運(yùn)用。

4.2.2? L615小鼠 L615小鼠的基因型為aabbCC，該種類型的小鼠在臨床上經(jīng)常被用來研究白血病的發(fā)病機(jī)制以及其藥物的療效。

4.2.3? C57BL/6小鼠 C57BL/6小鼠的毛色為黑色，其對化學(xué)致癌因子的敏感性通常較低，但是其對Graffi白血病的致病因子則較為敏感，該類型小鼠的基因型為：aaBBCC。既往臨床實(shí)踐證明采用射線對該種類型的小鼠進(jìn)行全身處理之后，可以導(dǎo)致該種類型小鼠的淋巴瘤發(fā)生率達(dá)到90%以上。該種類型的小鼠在白血病的研究中也經(jīng)常會被使用到。

5? 白血病細(xì)胞小鼠白血病模型的構(gòu)建方法

5.1? 基因修飾小鼠腫瘤模型

5.1.1? 基因轉(zhuǎn)移小鼠 具體而言，指的是將外源基因引入到小鼠受精卵，可以采用不同的方法，進(jìn)而生產(chǎn)出攜帶外源基因的老鼠菌株，1976年，美國科學(xué)家Jaenisch和其他人等將莫氏白血病病毒基因插入小鼠基因組之中，建立了有史以來臨床上第一個白血病小鼠體系，具有劃時代的意義。自此之后，利用基因轉(zhuǎn)移技術(shù)建立白血病細(xì)胞小鼠白血病模型的技術(shù)手段在臨床上時有用到[8-9]。

5.1.2? 基因敲除小鼠 該技術(shù)手段指的是在臨床上使用基因編輯技術(shù)，在小鼠的特定基因位點(diǎn)上插入或者敲出掉部分的基因片段，從而使得小鼠患上白血病的技術(shù)手段。該技術(shù)手段不僅在理論上具有可行性，而且在既往的臨床研究實(shí)踐當(dāng)中也經(jīng)常會被用到[10]。

5.2? 自發(fā)及誘發(fā)小鼠腫瘤模型

5.2.1? 誘發(fā)性小鼠模型 在小鼠體內(nèi)使用物理、化學(xué)和生物因素引起的白血病模型。臨床上經(jīng)常使用的致癌化學(xué)物質(zhì)有3-甲基膽蒽，經(jīng)常使用的電離輻射類型為γ射線，既往臨床實(shí)踐證明，使用該2種方式可以在較大程度上引起小鼠患上白血病。在臨床研究中使用該誘導(dǎo)模型具有一定的優(yōu)勢，但同時也不可避免的具有一定的劣勢，優(yōu)勢為操作起來相對簡單，但是其缺點(diǎn)主要有該模型的生物學(xué)特性通通常不夠穩(wěn)定，并且所使用的誘導(dǎo)因子可能會對人體造成一定的傷害，因此該種模型在現(xiàn)代臨床上的使用率相對偏低。

5.2.2? 自發(fā)性小鼠模型 自發(fā)性小鼠模型中所使用的小鼠的白血病一般自然發(fā)生，其發(fā)病機(jī)制主要是由于其基因發(fā)生突變而導(dǎo)致，該種類型的小鼠白血病模型的自發(fā)性腫瘤通常比實(shí)驗(yàn)方法誘導(dǎo)的腫瘤腫大。該種模型中小鼠的腫瘤發(fā)生的條件更加自然，通過仔細(xì)觀察和統(tǒng)計分析，重點(diǎn)觀察遺傳因素所導(dǎo)致的白血病機(jī)制，通過該種模型往往可以發(fā)現(xiàn)以前未知的環(huán)境或其他致癌因素。但是該種模型的使用過程中同樣也存在著一些無法避免的缺陷，即該種模型中小鼠的腫瘤發(fā)生通常不均勻，不可能實(shí)現(xiàn)在先對較短的時間內(nèi)獲得大量的試驗(yàn)材料，導(dǎo)致其試驗(yàn)周期一般較長，相應(yīng)的其花費(fèi)的實(shí)驗(yàn)成本也會相對較大。

5.3? 移植性小鼠腫瘤模型

5.3.1? 異種移植 采集處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，然后采用尾靜脈注射的方式注射入小鼠提內(nèi)，從而構(gòu)建起白血病小鼠體系。該種模型構(gòu)建難度相對較小，其腫瘤發(fā)生率也相對較高，觀察時間也會相對集中，在臨床上具有較為廣泛的運(yùn)用[11]。

5.3.2? 同種移植? 可以將腫瘤細(xì)胞移植于同系的小鼠體內(nèi)，通過連續(xù)傳代的方式形成白血病小鼠體系。該種方式構(gòu)建白血病小鼠腫瘤模型的時間周期也先對較短，而且具有較好的重復(fù)性，在臨床上具有較為廣泛的運(yùn)用，并且和異種移植模型相比，該模型不會產(chǎn)生排異反應(yīng)而對試驗(yàn)結(jié)果造成干擾。

6? 白血病細(xì)胞小鼠模型的應(yīng)用前景分析

6.1? 利用此模型來對腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性進(jìn)行研究

臨床上，利用白血病細(xì)胞小鼠白血病模型可以對白血病的患者的腫瘤細(xì)胞的分化、增殖以及各種調(diào)控機(jī)制進(jìn)行必要的研究，進(jìn)而使得人們對腫瘤細(xì)胞的惡性增殖機(jī)制有一個更為深入的了解，深化人們對該病腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性方面的認(rèn)知。同樣在接下來的針對腫瘤細(xì)胞生活學(xué)特性的臨床研究實(shí)踐當(dāng)中，依然可以借助于白血病細(xì)胞小鼠模型。

6.2? 對白血病的干細(xì)胞特性進(jìn)行研究

白血病干細(xì)胞是一種極少量具有自我更新和增殖能力的白血病細(xì)胞，有別于一般造血干細(xì)胞。它也不同于其他的無性系白血病細(xì)胞。既往臨床上有學(xué)者利用白血病細(xì)胞小鼠白血病模型對白血病的干細(xì)胞特性進(jìn)行有效的研究，這也可以在一定程度上對該病的治療起到必要的參考作用。

6.3? 對微小殘留白血病診斷及治療的研究

既往臨床研究證明，微小殘留是致使癌癥病癥復(fù)發(fā)的直接性原因之一，而既往有學(xué)者研究證明借助于白血病細(xì)胞小鼠模型可以實(shí)現(xiàn)對微小殘留白血病診斷及治療。我國學(xué)者史劍慧等[12]借助于白血病細(xì)胞小鼠模型，研究了微小殘留白血病在身體內(nèi)的分布規(guī)律。

7? 討論

基于小鼠自我繁殖能力較強(qiáng)以及和人體結(jié)構(gòu)的相似，其在醫(yī)療科學(xué)的研究中具有極為廣泛的運(yùn)用，同樣其在白血病的臨床研究中也具有相對廣泛而深入的運(yùn)用，在該文中首先介紹了白血病細(xì)胞小鼠白血病模型的建立過程中需要重點(diǎn)注意的一些問題，最后結(jié)合實(shí)際簡單探討了小鼠白血病模型的一些運(yùn)用，希望能夠?qū)ο嚓P(guān)人員的工作起到一定的參考性作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 強(qiáng)琬婷，諸江. 急性早幼粒細(xì)胞白血病小鼠模型中白血病細(xì)胞對骨髓基質(zhì)細(xì)胞增殖及功能影響的研究[J].診斷學(xué)理論與實(shí)踐， 2016（1）：25-29.

[2]? 王藝潼， 徐雯. 急性早幼粒細(xì)胞白血病小鼠動物模型建立的研究現(xiàn)狀[J]. 實(shí)用腫瘤學(xué)雜志， 2017， 31（5）：454-457.

[3]? 徐玉潔， 賈文華， 劉蒼春，等.人源化慢性髓系白血病小鼠模型的建立[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2016，24（5）：1329-1333.

[4]? 王雪， 祁娜， 馬莎，等. 費(fèi)城染色體陽性急性淋巴細(xì)胞白血病小鼠模型的建立和鑒定[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志， 2016， 24（5）：1324-1328.

[5]? Shih Y L， Wu L Y， Lee C H， et al. Sulforaphane promotes immune responses in a WEHI 3 induced leukemia mouse model through enhanced phagocytosis of macrophages and natural killer cell activities in vivo[J]. Molecular Medicine Reports， 2016， 13（5）：4023.

[6]? Song M J， Qi L， Zhang X W， et al. Dynamic Tracking Human Mesenchymal Stem Cells Tropism following Smoke Inhalation Injury in NOD/SCID Mice：[J]. Stem Cells International，2016， 2016（1）：1-13.

[7]? Secchiero P，Zorzet S，Tripodo C，et al.Human bone marrow mesenchymal stem cells display anti-cancer activity in SCID mice bearing disseminated non-Hodgkin's lymphoma xenografts.[J]. Plos One， 2016， 5（6）：e11140.

[8]? 葉永斌， 張明宛， 邱大發(fā)，等. 斑馬魚異種異體白血病模型的建立[J]. 中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志， 2017， 25（1）：35-41.

[9]? 王艷飛， 梅芬， 沈濤，等. Nestin基因在髓系白血病的表達(dá)及意義[J]. 生命科學(xué)研究， 2016， 20（5）：413-417.

[10]? 莊琳，馬燕，王倩，等.穩(wěn)定表達(dá)GFP的骨髓增生異常綜合征轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞株的建立[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志， 2017， 25（5）：1487-1492.

[11]? 楊煥芝， 周軼平， 翁稚穎，等. 旱生香茶菜總二萜包合物對小鼠移植性腫瘤的抗腫瘤活性及其毒性研究[J]. 中國臨床藥理學(xué)雜志， 2016， 32（19）：1785-1788.

[12]? 史劍慧， 許小平， 程文英，等.小鼠微小殘留白血病模型的建立[J]. 復(fù)旦學(xué)報：醫(yī)學(xué)版， 2002， 29（5）：383-386.

（收稿日期：2019-02-17）