唐云姣 霍秀龍 陸 海

（1.百色市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西百色 533000；2.平果縣動物疫病預(yù)防控制中心，廣西平果 531400；3.靖西市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西靖西 533800）

百色市地處廣西西北部山區(qū)，生豬養(yǎng)殖以農(nóng)村散養(yǎng)為主，養(yǎng)殖水平不高，一直以來，百色市依照農(nóng)業(yè)部制定的國家動物疫病強制免疫計劃，制定了本市生豬免疫程序，即先用FMD疫苗和CSF疫苗同時分邊免疫注射，間隔15天后再用HP-PRRS疫苗免疫注射一次，每頭豬在不同的時間至少進行兩次以上免疫注射，這不僅增加基層動物防疫人員防疫工作難度，而且多次免疫注射讓畜主擔(dān)心引起應(yīng)激反應(yīng)影響生產(chǎn)性能而拒接免疫，導(dǎo)致HP-PRRS應(yīng)免未免現(xiàn)象的發(fā)生。為了探索提高百色市豬群免疫密度與抗體水平的方法，建立堅強的免疫屏障，筆者選擇一個鄉(xiāng)鎮(zhèn)試行新型免疫程序，與另一使用傳統(tǒng)免疫程序的鄉(xiāng)鎮(zhèn)進行實驗對比，統(tǒng)計分析兩個鄉(xiāng)鎮(zhèn)不同飼養(yǎng)方式及使用不同免疫程序豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病的抗體產(chǎn)生效果，并對死淘豬進行病原檢測，調(diào)查豬群帶毒情況。現(xiàn)將分析結(jié)果報告如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 口蹄疫O型滅活疫苗（OMYA98/BY/2010株），內(nèi)蒙必威安泰生物科技有限公司生產(chǎn)疫苗（批號2014009），中牧實業(yè)股份有限公司生產(chǎn)疫苗（批號1411006）；豬瘟疫苗（細胞源），成都天邦生物制品有限公司（批號2014076）；高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（TJM-F92株），吉林特研生物技術(shù)有限責(zé)任公司（批號2014121002）。所有疫苗均為政府采購專用疫苗

1.1.2 檢測試劑 口蹄疫O型液相阻斷ELISA試劑盒，中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所，批號2014092301、20150415101-2、20150729101-2；豬瘟（CFS-AB）抗體檢測試劑盒，韓國金諾，批號107HS544，豬瘟抗體ELISA試驗盒，中國農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所，批號150506；LSI豬繁殖與呼吸綜合征ELISA抗體檢測試劑盒由北京天之泰生物有限公司提供，批號5-TTVETPRA-047?？谔阋咄ㄓ眯蚏T-PCR檢測試劑盒，北京世紀元亨動物防疫技術(shù)有限公司，批號FMD20141216P；豬瘟病毒通用型RT-PCR檢測試劑盒，北京世紀元亨動物防疫技術(shù)有限公司，批號CSF20141218P；豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Nsp2 1594～1680變異株），北京世紀元亨動物防疫技術(shù)有限公司，批號HPRRS20150203P。

1.1.3 主要實驗儀器：酶標儀（澳大利亞生產(chǎn)，2010型）。MyCycler核酸擴充儀（美國BIO-RAD公司生產(chǎn)）。

1.2 方法

1.2.1 分組及免疫方法：A鎮(zhèn)將豬瘟疫苗（細胞源）和高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（TJM-F92株）釋稀后混合在一起作為一針注射，同時口蹄疫O型滅活疫苗（OMYA98/BY/2010株）作為一針注射簡稱“321”免疫程序，免疫劑量為1 ml（頭份）/頭。B鎮(zhèn)繼續(xù)應(yīng)用傳統(tǒng)免疫程序組，先用口蹄疫O型滅活疫苗（OMYA98/BY/2010株）和政府采購專用豬瘟疫苗（細胞源）同時分點免疫注射，間隔15天后，再用高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（TJM-F92株）免疫一次，簡稱“332”免疫程序，免疫劑量為1 ml（頭份）/頭；

1.2.2 檢測方法：HP-PRRS抗體采用ELISA方法檢測，具體操作按試劑盒說明書要求進行，判斷標準：IRPC≤20，判定被檢血清HP-PRRS抗體為陰性，IRPC＞20，則判定被檢血清HP-PRRS抗體為陽性；CSF抗體采用ELISA方法檢測，具體操作按試劑盒說明書要求進行，判斷標準：PC＜40%，判定被檢血清CSF抗體為陰性，PC≥40%，則判定被檢血清CSF抗體為陽性；O型FMD抗體采用LpB-ELISA方法檢測，具體操作按試劑盒說明書要求進行，判斷標準：對照臨界值，抗體效價小于1：64判定被檢血清口蹄疫O型抗體為陰性，1：64～1：128判定被檢血清口蹄疫O型抗體為可疑，大于或等于1：128則判定被檢血清血清O型FMD抗體為陽性。FMDV通用型RT-PCR檢測按試劑盒說明書要求進行，陽性對照出現(xiàn)131bp擴增帶、陰性對照無帶出現(xiàn)時實驗結(jié)果成立，被檢樣品出現(xiàn)131bp擴增帶為FMDV陽性，否則為陰性；CSFV通用型RTPCR檢測按試劑盒說明書要求進行，陽性對照出現(xiàn)235bp擴增帶、陰性對照無帶出現(xiàn)時實驗結(jié)果成立，被檢樣品出現(xiàn)235bp擴增帶為CSFV陽性，否則為陰性；HP-PRRSV（Nsp2 1594～1680變異株）檢測按試劑盒說明書要求進行，陽性對照出現(xiàn)278bp擴增帶、陰性對照無帶出現(xiàn)時實驗結(jié)果成立，被檢樣品出現(xiàn)278bp擴增帶為HPPRRSV（Nsp2 1594～1680變異株）為陽性，否則為陰性；

2 結(jié)果與分析

2.1 兩種不同的免疫程序免疫抗體監(jiān)測

應(yīng)用“321”免疫程序鄉(xiāng)鎮(zhèn)（A）同比應(yīng)用“332組”免疫程序鄉(xiāng)鎮(zhèn)（B）規(guī)模場豬FMD免疫抗體陽性率低3.3個百分點，差異不顯著，CSF抗體陽性率高7.5個百分點，差異顯著，HP-PRRS抗體陽性率高13.3個百分點，差異顯著。應(yīng)用“321”免疫程序鄉(xiāng)鎮(zhèn)（A）同比應(yīng)用“332組”免疫程序鄉(xiāng)鎮(zhèn)（B）散養(yǎng)豬FMD免疫抗體陽性率高3.4個百分點，差異不顯著，CSF抗體陽性率高3.3個百分點，差異不顯著，HP-PRRS抗體陽性率高16.7個百分點，差異顯著；綜合對比鄉(xiāng)鎮(zhèn)（A）與鄉(xiāng)鎮(zhèn)（B）的免疫抗體檢測結(jié)果，F(xiàn)MD、CSF整體抗體陽性率差異不顯著，而HP-PRRS整體抗體陽性率差異顯著；如表1所示：

表1 農(nóng)村散養(yǎng)、規(guī)模養(yǎng)豬場三種疫病免疫抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計表

2.2 農(nóng)村散養(yǎng)死淘豬病原檢測

應(yīng)用“321”免疫程序鄉(xiāng)鎮(zhèn)同比應(yīng)用“332組”免疫程序鄉(xiāng)鎮(zhèn)死淘豬FMDV檢測結(jié)果均呈陰性，CSFV平均陽性率均為3.3%，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，HP-PRRSV平均陽性率低10個百分點，差異顯著；如表2所示：

表2 死淘豬三種疫病病原檢測結(jié)果統(tǒng)計表

3 討論

（1）抗體檢測結(jié)果顯示，應(yīng)用“321”免疫程序的鄉(xiāng)鎮(zhèn)（A）與應(yīng)用 “332”免疫程序的鄉(xiāng)鎮(zhèn)（B）相比較，F(xiàn)MD、CSF整體抗體陽性率差異不顯著，這表明兩種免疫程序?qū)MD、CSF抗體的產(chǎn)生并無太大影響；而HP-PRRS抗體陽性率差異顯著，則與免疫密度及免疫次數(shù)有關(guān)，調(diào)查發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用“332”免疫程序的鄉(xiāng)鎮(zhèn)HP-PRRS免疫密度同比FMD和CFS低5.91個百分點，而且應(yīng)用“332”免疫程序，既在一個免疫周期內(nèi)進行兩次免疫注射，導(dǎo)致免疫豬只多次應(yīng)激而影響生產(chǎn)性能，引發(fā)畜主抵制HP-PRRS疫苗免疫或者只愿實施一免而不愿意實施二免，致使應(yīng)用“332”免疫程序的鄉(xiāng)鎮(zhèn)（A）HP-PRRS抗體陽性率顯著低于應(yīng)用“321”免疫程序的鄉(xiāng)鎮(zhèn)（B）。

（2）從表1可以看出，規(guī)模養(yǎng)殖戶比農(nóng)村散養(yǎng)戶的FMD、CSF、HP-PRRS免疫抗體陽性率高，差異性顯著，這與規(guī)模養(yǎng)殖場普遍實施二免，而農(nóng)村散養(yǎng)戶大部分只實施一免有關(guān)，因此應(yīng)加強對農(nóng)村散養(yǎng)戶HP-PRRS免疫力度，增加免疫次數(shù)，提高豬群抗體水平。

（3）從表2可以看出，應(yīng)用“321”免疫程序鄉(xiāng)鎮(zhèn)（A）HP-PRRSV平均陽性率低10個百分點，差異顯著，這可能是應(yīng)用“321”免疫程序的鄉(xiāng)鎮(zhèn)（A）二免率比較高，因此豬群保持較高的免疫抗體，建立堅強的免疫屏障，可以大大降低生豬帶毒率；表2顯示，百色市豬群隱性帶CSFV、HP-PRRSV依然存在，疫情隱患大，而HP-PRRSV依然是當前危害百色市最為嚴重的疫病之一，如果該病的免疫工作跟不上或未能開展免疫，暴發(fā)疫情的風(fēng)險很大。

（4）在本次實驗中，“321”免疫程序未表現(xiàn)出各疫苗間相互干擾現(xiàn)象，周建國等研究也得出同樣的結(jié)論[1]，應(yīng)用“321”免疫程序同比應(yīng)用 “332”免疫程序的免疫副反應(yīng)稍高，但差異不顯著，孟麗軍等研究也得出同樣的結(jié)論[2]?！?21”免疫程序的應(yīng)用可以提高豬群的免疫密度與免疫次數(shù)，縮短免疫周期、降低基層動物防疫人員勞動強度，同時三種疫病同步建立有效的免疫屏障、減少免疫空白點，從而大大降低疫情發(fā)生風(fēng)險，具有一定的推廣價值。