邱鴻宇 曹華 齊楷 叢艷昭

1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)

2.吉林省延邊州畜牧總站

3.吉林省延吉市動(dòng)物衛(wèi)生檢疫站

造成萊姆病的病原體為伯氏疏螺旋體，是一種在全球范圍內(nèi)對(duì)人類和動(dòng)物健康存在嚴(yán)重危害的蜱傳疾病，可引起人體多系統(tǒng)、器官的損害。該病的流行特點(diǎn)呈現(xiàn)出明顯的季節(jié)性，到目前為止，全球伯氏疏螺旋體至少可分為20個(gè)不同的基因型，其中我國(guó)北方以伽氏（B.garinii）和阿氏（B.afzelii）為主。松峰山位于黑龍江省哈爾濱市，附近山林相連，存在著各種蜱類，但關(guān)于相關(guān)地區(qū)蜱攜帶伯氏疏螺旋體的情況還未見(jiàn)報(bào)道，因此本研究開(kāi)展相關(guān)研究為蜱及蜱傳播的疾病防控提供依據(jù)。

一、材料與方法

1.試驗(yàn)材料

1）采集樣品：布旗(60 cm×100 cm)，鑷子，5mL離心管。

2）PCR引物及條件：本試驗(yàn)采用Chu的方法檢測(cè)病原。需進(jìn)行兩輪PCR擴(kuò)增。第一輪擴(kuò)增時(shí)使用的引物：23S3和 23Sa， 23S3：5'-CGA CCT TCT TCG CCT TAA AGC-3' ；23Sa：5'-TAA GCT GAC TAA TAC TAA TAA CCC-3'。第二輪擴(kuò)增時(shí)使用的引物：23S5和23S6，23S5：5'-CTG CGA GTT CGC GGG AGA-3'；23S6：5'-TCC TAG GCA TTC ACC ATA-3'。兩輪 PCR擴(kuò)增條件分別為：變性94℃ 30s，退火55℃ 30s，延伸 72℃ 40s，共進(jìn)行 30 個(gè)循環(huán)；94℃ 30s，59℃ 30s，72℃ 40s，30 個(gè)循環(huán)。

2.方法。用人工布旗法采集自由生活的蜱，將兩個(gè)地點(diǎn)采集的蜱裝入5mL離心管并標(biāo)記信息。應(yīng)用布旗法采集游離蜱1000余只；隨機(jī)選擇96只革蜱，48只血蜱和48全溝硬蜱進(jìn)行檢測(cè)。提取DNA后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，初步確定伯氏疏螺旋體陰陽(yáng)性后將陽(yáng)性PCR產(chǎn)物測(cè)序，鑒定所攜帶伯氏疏螺旋體基因型。

二、結(jié)果

1.統(tǒng)計(jì)結(jié)果。對(duì)黑龍江省哈爾濱市松峰山的三種蜱攜帶伯氏疏螺旋體情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，如表1 所示，總檢出率為8.85%。其中全溝硬蜱的檢出率最高，其次是血蜱，最低是革蜱的檢出率，分別為29.17%、4.17%和1.04%。

表1 三種蜱的感染情況

2.基因測(cè)序。將伯氏疏螺旋體陽(yáng)性樣本送去DNA測(cè)序后，測(cè)序結(jié)果經(jīng)BLAST發(fā)現(xiàn)了伯氏疏螺旋體的兩種基因型，分別為阿氏疏螺旋體（B.afzelii）和伽氏疏螺旋體（B.garinii），這兩種基因型均被報(bào)道為伯氏疏螺旋體的致病基因型。

三、討論

我國(guó)在1987 年初次檢測(cè)到萊姆病，現(xiàn)根據(jù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，我國(guó)大部分山林地區(qū)都是萊姆病的自然疫源地。本次試驗(yàn)的192份樣品中檢測(cè)到17份含有伯氏疏螺旋體，總檢出率為8.85%。與威虎山檢出率相比相對(duì)較低。本次試驗(yàn)在革蜱樣品中檢出率為1.04%，與陜西省、大興安嶺等地區(qū)的報(bào)道相比較低。血蜱樣品中檢出率為4.17%（48/2），同樣本研究的檢出率相對(duì)低。而本研究中的48份全溝硬蜱樣品中檢出率為29.17%，與其他研究相比較高。

這次試驗(yàn)表明松峰山附近的蜱攜帶伯氏疏螺旋體，其中全溝硬蜱的攜帶率最高，其次是血蜱，而革蜱的攜帶率最低。同時(shí)本研究檢測(cè)的兩種伯氏疏螺旋體均屬于致病基因型。因此，松峰山相關(guān)地區(qū)應(yīng)做好防控工作以保護(hù)游客的安全，游客也要采取一定的措施以防感染。蜱的生存能力很強(qiáng)，可以長(zhǎng)時(shí)間耐饑餓，宿主也是多種多樣，因此，蜱很難防治，以蜱作為傳播媒介的疾病應(yīng)引起足夠的重視。

結(jié)論：松峰山附近蜱攜帶伯氏疏螺旋體，且感染率相對(duì)較低，但在此生活的人類及家畜在一定程度上有感染該病原體的危險(xiǎn)。