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        1例弓形蟲病的PCR鑒定與診治

        2019-08-12 07:29:06舒鑫標(biāo)婁昆鵬
        養(yǎng)殖與飼料 2019年8期
        關(guān)鍵詞:弓形蟲雞舍病豬

        舒鑫標(biāo) 婁昆鵬

        1.浙江大飛龍動(dòng)物保健品股份有限公司,浙江金華321017;2.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,江蘇揚(yáng)州225009

        弓形蟲病又稱弓形體病, 是由剛地弓形蟲寄生在豬、牛、羊、狗、貓和人體內(nèi)而引起的一種人畜共患的專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲病。豬的弓形蟲感染率較高,為3.32%~66.39%[1]。近年來豬弓形蟲病暴發(fā)較多,特別是種豬,由于生活周期長,感染機(jī)會(huì)多,天氣驟冷、更換飼料等應(yīng)激容易誘發(fā)疫情。根據(jù)流行特點(diǎn),本病多發(fā)生在5-10月,夏季發(fā)病率最高,寒冷的冬季也有發(fā)生?,F(xiàn)將浙江某豬場冬季母豬爆發(fā)弓形蟲病病例診治和防控措施報(bào)告如下:

        1 發(fā)病情況

        2018年12月,浙江某存欄300 余頭母豬場,第2 棟限位欄母豬開始有幾頭不吃料,后蔓延至整棟限位,很多母豬均有厭食情況。患豬出現(xiàn)氣喘、咳嗽等癥狀,剛開始豬場技術(shù)人員按照豬流感進(jìn)行治療,添加荊防敗毒散和阿莫西林進(jìn)行治療,結(jié)果無效。12~24 h 后母豬陸續(xù)出現(xiàn)流產(chǎn),流產(chǎn)胎兒潮紅且體表有針尖狀出血點(diǎn)。流產(chǎn)母豬以2~4 胎較多,流產(chǎn)后母豬癥狀有所減輕。第2 天第1 頭母豬死亡,保育豬亦有傷亡。之后豬場技術(shù)人員又按照藍(lán)耳病對患病豬只進(jìn)行處理,添加替米考星等,注射頭孢、氟苯尼考等均未見到明顯效果。至筆者接到案例時(shí)發(fā)病已3 周,病豬流產(chǎn)比例占孕豬總數(shù)超過10%,流產(chǎn)、返情比例和弱仔比例明顯高于平時(shí)。

        2 臨床癥狀

        病豬體溫40~42 ℃,呈稽留熱,眼結(jié)膜潮紅,分泌物增多;精神萎靡,減食或食欲廢絕,個(gè)別嘔吐,喜臥,被毛粗亂,大便秘結(jié)如栗,尿液茶褐色。病豬呈現(xiàn)明顯的呼吸道癥狀,呼吸急促,兼有咳嗽,呈腹式呼吸,嚴(yán)重的張口呼吸,呈犬坐姿勢,流漿液性、粘液性鼻液。耳根、鼻端、腹內(nèi)側(cè)呈現(xiàn)紅紫色斑塊,兼有出血點(diǎn),嚴(yán)重的甚至遍布全身。有的后軀麻痹、運(yùn)動(dòng)障礙。發(fā)病保育豬腹股溝及頜下淋巴結(jié)腫大,后期臥地不起、體溫下降,最終衰竭死亡,部分病豬瀕死期嘴角流出血色泡沫。

        3 病理變化

        剖檢病死母豬仔豬共5 頭,腹下和四肢內(nèi)側(cè)皮膚多見紫紅色斑塊。全身淋巴結(jié)特別是肺門、肝門和腸系膜淋巴結(jié)腫大,切面出血、有灰白色壞死。胸腔和腹腔大量積液、呈淡黃色。心肌柔軟、外膜有少量出血點(diǎn)、心耳出血。肺臟腫大,呈暗紅色,間質(zhì)增寬,充滿半透明膠凍樣滲出物,切面流出紅黃色泡沫液體。肝臟腫大、色暗紅,有大量白色或灰黃色小米粒樣壞死結(jié)節(jié)。腎臟表面有針尖大小出血點(diǎn)。脾臟腫大,棕紅色,表面有結(jié)節(jié)樣出血性梗死。胃底潮紅、充血、出血。

        4 實(shí)驗(yàn)室診斷

        4.1 涂片染色鏡檢

        無菌操作取病豬肺、肝、淋巴結(jié)做涂片,用姬姆薩染色液染色后,油鏡下檢查發(fā)現(xiàn)月牙形或梭形的弓形蟲蟲體,核為紅色,細(xì)胞質(zhì)為藍(lán)色。

        4.2 細(xì)菌培養(yǎng)

        無菌操作取病死豬肝、脾、淋巴組織分別涂抹接種普通營養(yǎng)瓊脂、鮮血營養(yǎng)瓊脂平板,37 ℃培養(yǎng),觀察至48 h,無細(xì)菌生長。

        4.3 PCR 鑒定

        無菌條件下采取13 頭病死豬心臟血液,以弓形蟲(TP)1 基因作為分子標(biāo)記建立PCR 檢測[2]。同時(shí)用PCR 方法檢測豬偽狂犬病毒(PRV)、圓環(huán)病毒2 型(PCV2)、細(xì)小病毒(PPV)。用RT-PCR 方法檢測豬藍(lán)耳病毒(PRRSV)和豬瘟病毒(CSFV),參考浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院豬病檢測室診斷方法設(shè)計(jì)引物,由上海生工生物工程有限公司合成,引物名稱、序列及預(yù)期片段大小如表1。檢測結(jié)果見圖1。

        抗原PCR 檢測結(jié)果見表2。由表2可知,13 個(gè)樣品的豬藍(lán)耳病毒、圓環(huán)病毒2 型、豬偽狂犬病毒、豬瘟病毒、細(xì)小病毒抗原檢測均為陰性,說明此次疫情并非上述疾病引起,而弓形蟲抗原檢測陽性數(shù)為11 個(gè),占比84.6%(11/13)。結(jié)合臨床癥狀、病理變化和實(shí)驗(yàn)室診斷,確診該病為豬弓形蟲病。

        表1 引物名稱、序列及預(yù)期片段大小

        圖1 PCR 檢測電泳圖譜

        表2 抗原PCR 檢測結(jié)果統(tǒng)計(jì)

        5 防治措施

        立即將病豬與假定健康、精神狀態(tài)好的豬隔離,單獨(dú)飼養(yǎng),對病程長、嚴(yán)重的和治療效果不佳的豬進(jìn)行淘汰并作無害化處理。降低豬舍濕度,保持豬舍清潔干燥,全進(jìn)全出,定期用3%氫氧化鈉溶液對墻面、地面、器具和糞溝徹底消毒,用聚維酮碘對豬噴霧消毒。豬場禁止養(yǎng)犬、貓,做好滅鼠工作。全群投喂“弓連優(yōu)”(浙江某獸藥廠家生產(chǎn),通用名復(fù)方磺胺甲惡唑粉),按照說明書治療量使用,每噸飼料添加1 kg,另等量添加碳酸氫鈉,以減少對泌尿道的不良反應(yīng),連用7 d。飲水中添加葡萄糖和電解多維,連用14 d。對采食量低、發(fā)熱的患病豬按照每千克體質(zhì)量0.1 mL 劑量肌肉注射“聯(lián)合黃安”(浙江某獸藥廠家生產(chǎn),通用名磺胺間甲氧嘧啶注射液),首次用量加倍。同時(shí)配合柴胡注射液使用,1 次/d,連打3 d。用藥4 d 后,不再有新增病例,采食量逐漸增加,患豬體溫逐漸恢復(fù)正常,7 d 后大群精神狀態(tài)恢復(fù)正常。

        6 討 論

        豬弓形蟲病多在炎熱的夏季發(fā)病,本次為冬季發(fā)病,此種情況少見。通過現(xiàn)場調(diào)查發(fā)現(xiàn),豬場衛(wèi)生狀況不佳,未及時(shí)清理的糞污點(diǎn)較多,新粉碎的配合料雜亂堆放并有暴露。據(jù)飼養(yǎng)員介紹,豬場內(nèi)及豬圈舍經(jīng)常有野貓出入,在豬場飼料房也能看到疑是貓糞的動(dòng)物糞便。從天氣看,發(fā)病期間陰雨連綿,氣溫較低,豬圈舍密閉開啟暖風(fēng)機(jī),溫度適宜,但濕度大,上述狀況都為蟲體滋生創(chuàng)造了條件,是否豬采食污染貓糞的飼料或由飲水導(dǎo)致發(fā)病有待進(jìn)一步考證。

        弓形蟲病是一種危害很大的人獸共患病,人和動(dòng)物感染弓形蟲很常見[3]。研究弓形蟲病具有重要的公共衛(wèi)生意義。孕婦若妊娠前3 個(gè)月感染弓形蟲可引起流產(chǎn)、胎兒畸形或產(chǎn)出弱智兒[4]。目前隨著家庭寵物犬貓飼養(yǎng)量的增加,人類與寵物密切接觸的機(jī)會(huì)增多,弓形蟲的感染率有逐年增加的趨勢[5]。弓形蟲感染成人后,可侵害神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心臟、淋巴內(nèi)皮系統(tǒng)等多種器官或系統(tǒng),并造成損傷,嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成死亡。弓形蟲能感染大部分溫血?jiǎng)游?,可致孕畜流產(chǎn)死胎,急性弓形蟲病可造成家畜的死亡,貓科動(dòng)物是弓形蟲終末宿主,貓?jiān)谠摬〉牧餍泻蛡鞑ブ衅鹬匾饔?。因此,豬場禁止養(yǎng)貓、嚴(yán)防野貓及排泄物污染飼料及飲水;做好滅鼠工作,禁止豬接觸老鼠或其他動(dòng)物尸體;禁止屠宰下腳料和生肉湯水喂豬;流產(chǎn)母豬胎衣、胎兒焚燒處理,以防豬吃到患病或帶蟲動(dòng)物體內(nèi)的滋養(yǎng)體和包囊而感染。北方部分養(yǎng)豬場有從周邊農(nóng)戶購買散裝玉米的習(xí)慣,豬場若發(fā)生疑是弓形蟲病時(shí)應(yīng)格外注意留意飼料糧是否被貓糞污染。

        弓形蟲的高熱、全身紫紅和呼吸道表現(xiàn),雖然有一定示病意義,但因與豬瘟、藍(lán)耳病、鏈球菌病、豬肺疫等臨床表現(xiàn)有諸多相似之處,難以區(qū)分,往往容易誤診漏診。如條件允許,建議進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室鏡檢和PCR 鑒定,以確定病原[6]。目前,有關(guān)弓形蟲的研究大量集中于豬血清中弓形蟲抗體方面,這些方法并不能準(zhǔn)確反映豬體弓形蟲的感染狀況[7-8]。隨著PCR 技術(shù)的快速發(fā)展,對弓形蟲感染組織的檢測敏感度已經(jīng)能夠達(dá)到0.05 個(gè)速殖子水平[9]。但因PCR檢測所需組織樣本較小,而且慢性感染的動(dòng)物一般在腦部形成組織包囊,這給陽性組織的尋找?guī)砹艘欢ɡщy,容易造成漏檢。如何解決這方面的問題將是未來弓形蟲檢測的重點(diǎn)。

        絕大多數(shù)抗生素對弓形蟲無效,目前臨床上治療弓形蟲病最有效的方法是使用磺胺類藥物,早期診斷和早期治療能收到較好效果,治療時(shí)用藥劑量要足,首次用量加倍,療程要夠,一個(gè)療程需5~7 d,不能病情見好就停藥,這種情況極易復(fù)發(fā),繼續(xù)治療難度很大。臨床用藥較晚雖能控制臨床表現(xiàn)和癥狀,但不能控制蟲體進(jìn)入組織形成包囊,造成病豬成為帶蟲豬,給豬群帶來再次發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。

        賣完雞,進(jìn)雞苗前怎樣給雞舍徹底消毒?

        ①肉雞出欄后,清出雞舍內(nèi)所有廢棄物,用高壓水槍沖洗雞舍干凈,包括地面、網(wǎng)子、用具、墻壁、頂棚等。尤其注意清洗網(wǎng)上殘留的雞糞,也可用鐵刷擦洗。

        ②飲水管線的消毒:將水管拆卸下來,放出殘余的水,并用高壓水槍沖洗,沖洗水箱等應(yīng)用洗潔球或海綿擦洗,待全部擦洗干凈后,再用1%~2%稀鹽酸水溶液充滿水線,浸泡24 h,放出浸泡液后用清水沖洗干凈。

        ③待雞舍干燥后,再用高壓水槍噴灑消毒藥水(可選用含碘或含氯消毒劑等)。噴灑應(yīng)包括雞舍內(nèi)所有用具及雞舍外周圍環(huán)境及與本雞舍有聯(lián)系的設(shè)備、車輛等。

        ④再次檢修設(shè)備,并調(diào)試使其全部處于完好狀態(tài),將雞舍內(nèi)所有用具放入雞舍,用廢報(bào)紙或膠帶密閉所有門窗,后用固體甲醛或戊二醛薰蒸消毒。雞舍密閉24 h 后,打開門窗通風(fēng)。

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