朱克鋒

湖北省武穴市刊江辦事處畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)中心，湖北武穴435400

為檢驗(yàn)武穴市豬O 型口蹄疫滅活疫苗免疫效果，探索更合理以及更符合生產(chǎn)實(shí)際的豬口蹄疫免疫程序，更好的控制和預(yù)防生豬O 型口蹄疫疫情，筆者開展了豬O 型口蹄疫疫苗免疫試驗(yàn)，以期使豬O 型口蹄疫滅活疫苗產(chǎn)生更高和持續(xù)時(shí)間更長的免疫保護(hù)效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)場地

武穴市魏垸養(yǎng)殖小區(qū)位于武穴市刊江辦事處魏垸村，遠(yuǎn)離人群密集區(qū)，自然防疫條件好，地理位置優(yōu)越。該場為自繁自養(yǎng)豬場，現(xiàn)有存欄母豬160頭，存欄生豬1 600 頭，每月新增仔豬250～300 頭，年可出欄商品豬3 000 頭；符合試驗(yàn)所需樣品數(shù)量要求。母豬每年免疫4 次0 型口蹄疫疫苗（每3 個(gè)月免疫1 次）。近幾年來，疫情穩(wěn)定，沒有發(fā)生重大動(dòng)物疫病。

1.2 試驗(yàn)疫苗

豬口蹄疫O 型滅活疫苗（O/Mya98/XJ/2010 株+O/GX/09-7 株），新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)為201807。

1.3 試驗(yàn)方法

1）試驗(yàn)動(dòng)物。試驗(yàn)前隨機(jī)選取20 頭32～68日齡未免疫豬O 型口蹄疫疫苗的健康仔豬，采血檢測其母源抗體，確定該試驗(yàn)場口蹄疫母源抗體消失期為50日齡左右，遂選取50+日齡未免疫豬O 型口蹄疫疫苗健康仔豬120 頭，隨機(jī)分為A、B、C、D 4組，每組30 頭。

2）免疫方法：A、C 組按1 頭份（2 mL）進(jìn)行免疫；B、D 組按2 頭份(4 mL)進(jìn)行免疫；一免4 周后C組按1 頭份進(jìn)行二次免疫；D 組按2 頭份進(jìn)行二次免疫，A、B 組不免疫；疫苗注射由筆者所在單位人員獨(dú)立完成。各組用耳牌做好標(biāo)記，分欄飼養(yǎng)。A 組，每頭肌肉注射2 mL 豬O 型口蹄疫滅活苗。B 組，每頭肌肉注射4 mL 豬O 型口蹄疫滅活苗。C 組，每頭肌肉注射2 mL 豬O 型口蹄疫滅活苗；30 d 后肌肉注射2 mL 豬O 型口蹄疫滅活苗。D 組，每頭肌肉注射4 mL 豬O 型口蹄疫滅活苗；30 d 后日肌肉注射4 mL 豬O 型口蹄疫滅活苗。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬O 型口蹄疫滅活疫苗免疫抗體檢測

1）采血。一次性采血器前腔靜脈采血，每份不少于3 mL，靜置2 h 后3 500 r/min 離心6 min，分離血清。A、B 組分別于一免后28、58 d 各采血1次，分離血清做口蹄疫免疫抗體檢測試驗(yàn)。C、D 組分別于一免后28 d、二免后28、58 d，各采血1 次，分離血清做口蹄疫免疫抗體檢測試驗(yàn)。

2）抗體檢測。按照口蹄疫O 型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒說明書操作，結(jié)果判定：抗體效價(jià)≥1∶64，判為免疫合格（99%以上保護(hù)）。

3）抗體檢測結(jié)果。由表1可知，規(guī)模化豬場母豬經(jīng)年多次免疫后，仔豬通過母乳獲得的抗體水平很高；本試驗(yàn)按初始設(shè)計(jì)方案為30日齡免疫注射，但在篩選試驗(yàn)豬時(shí)發(fā)現(xiàn)，5 周齡仔豬抗體滴度仍能達(dá)到1∶256～1∶512，7 周齡后衰減到1∶64 以下,9周齡時(shí)全部轉(zhuǎn)陰。

2.2 免疫效果評(píng)估

由表2可以看出，A、B 組免疫后28、58 d 的免疫抗體合格率分別為0.0%、0.0%、0.0%、6.6%，免疫抗體合格率很低，說明一次免疫的效果極不理想。

由表3可以看出,1 頭份二次免疫后28、58 d，免疫抗體合格率分別為6.6%、10%，2 頭份二次免疫后28、58 d，免疫抗體合格率分別為13.3%、43.3%，說明口蹄疫苗2 頭份二次免疫效果比較明顯。

免疫28 d 后，1 頭份1 次免疫組（A 組）、2 頭份1 次免疫組（B 組）免疫合格率均為0.0%；1 頭份2次免疫組（C 組）免疫合格率為6.6%；2 頭份2 次免疫組（D 組）免疫合格率為13.3%。免疫58 d 后，1頭份1 次免疫組（A 組）免疫合格率仍為0.0%、2 頭份1 次免疫組（B 組）免疫合格率增長為6.6%；1 頭份2 次免疫組（C 組）免疫合格率增長為10%；2 頭份2 次免疫組（D 組）免疫合格率增長為43.3%。

本試驗(yàn)免疫抗體檢出率特別低，甚至2 頭份2次免疫組（D 組）的免疫合格率也只有43.3%，是否試驗(yàn)豬受到藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒、飼料霉菌毒素污染等免疫抑制類疾病的影響，因試驗(yàn)設(shè)計(jì)的原因沒有得到驗(yàn)證。另外，檢測試劑盒的準(zhǔn)確性也值得進(jìn)一步校驗(yàn)。

表1 免疫前O 型口蹄疫母源抗體情況

表2 一次免疫組O 型口蹄疫抗體合格率

表3 二次免疫組O 型口蹄疫抗體合格率

2.3 試驗(yàn)期豬發(fā)病死亡情況

最后1 次對(duì)120 頭試驗(yàn)豬全部進(jìn)行前腔采血，10 d 后在全棟276 頭豬注射中牧成都豬瘟細(xì)胞苗（含120 頭試驗(yàn)豬），每頭豬注射4 頭份，2 d 后試驗(yàn)豬開始出現(xiàn)咳嗽、減食，其他同時(shí)免疫豬瘟疫苗豬除偶見咳嗽外無其他異常。自始至終發(fā)病豬只見于試驗(yàn)豬，同場同棟其他豬只，未見發(fā)病。

發(fā)病率約60%（70 頭左右），主要集中在A、B 2組（日齡較?。珻、D 組零星發(fā)生。病豬體溫40.5～41.5 ℃，食欲廢絕但未見明顯消瘦、被毛粗亂、扎堆；耳尖發(fā)紺、皮膚發(fā)紅、有清涕、眼瞼發(fā)炎、咳嗽、便秘、個(gè)別豬嘔吐；病豬中約20%嚴(yán)重喘氣。

剖檢情況：喉頭、會(huì)厭軟骨未見出血，氣管內(nèi)有白色泡沫狀分泌物；肺門淋巴結(jié)出血、腫脹，肺部出血、輕微水腫、間質(zhì)增寬，肺尖頁、膈頁、心葉均有對(duì)稱型蝦肉樣變；心衰、胃底輕度彌散性出血；腸系膜淋巴結(jié)串珠狀腫脹；其他臟器未見明顯變化

病初診斷為支原體肺炎混感豬流感，飼料投喂泰萬菌素（10%預(yù)混劑）1 kg+氟苯尼考（10%預(yù)混劑）800 g/t，不采食豬肌注氟苯尼考（20%）注射液；以上方案治療3 d 不見好轉(zhuǎn)，發(fā)病數(shù)量仍有增加，并出現(xiàn)死亡。共計(jì)死亡52 頭。

結(jié)合流行病學(xué)、臨床、剖檢癥狀、治療及死亡情況，診斷為環(huán)境和免疫應(yīng)激誘發(fā)高致病性藍(lán)耳病混感支原體肺炎。

3 討 論

抗體檢測結(jié)果較差，但無口蹄疫病例發(fā)生。疫苗儲(chǔ)運(yùn)、使用及注射操作都是試驗(yàn)人員親自操作的，非常規(guī)范，免疫抗體監(jiān)測部分樣品作重復(fù)檢測，并無不同。整個(gè)試驗(yàn)期間沒有口蹄疫疑似病例發(fā)生?？贵w檢出率低的原因，可能是試劑的抗原與新疆天康雙毒株苗的抗原相差較大，或者是試劑盒本身的可靠性問題。仔豬首次免疫口蹄疫疫苗時(shí)應(yīng)考慮母源抗體干擾影響，建議規(guī)模化豬場定期監(jiān)測母源抗體水平，適當(dāng)調(diào)整首次免疫時(shí)間。免疫2 頭份比免疫1 頭份效果好。2 頭份免疫組（B、D 組）58 d抗體合格率的增長，說明免疫抗原量增加后對(duì)豬免疫系統(tǒng)刺激的時(shí)間更長，對(duì)后期抗體水平的提升有一定意義。免疫2 次比免疫1 次效果好。2 次免疫組（C、D 組）免疫合格率和抗體滴度都優(yōu)于1 次免疫組，說明2 次免疫能更好地誘導(dǎo)、刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生IgG 抗體，產(chǎn)生更高和持續(xù)時(shí)間更長的免疫保護(hù)效果。

對(duì)豬O 型口蹄疫疫苗采購質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)予以提高，建議省中心每年對(duì)豬O 型口蹄疫疫苗的有效抗原含量進(jìn)行檢測。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，建議在實(shí)際免疫工作中豬O 型口蹄疫疫苗實(shí)施2 次免疫。