楊 帆，楊熙芮，邱 靜

（1.成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，四川 成都610075；2.廣元市第二人民醫(yī)院呼吸科，四川 廣元628000）

支氣管哮喘也被稱為哮喘，是一種免疫系統(tǒng)紊亂相關(guān)性疾病，以喘息、氣短、胸悶、咳嗽為主要臨床病癥，對患者的工作與生活造成嚴(yán)重影響［1］。支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，由多種細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)、免疫活性細(xì)胞參與，隨著臨床對該疾病的深入研究，遺傳因素被受到重視。解整合素-金屬蛋白酶33（a disintegrin and metalloprotease-33，ADAM33）、嗜乳脂蛋白樣3（butyrophilin-like 3，BTNL3）是哮喘最為重要的易感基因，雖然機(jī)制尚未明確，但已成為臨床研究熱點(diǎn)［2］。為明確ADAM33、BTNL3基因在支氣管哮喘中的作用，本研究檢測我院收治不同嚴(yán)重程度支氣管哮喘患者血清中ADAM33、BTNL3表達(dá)水平，以及與IgE、EOS、IL-4水平的相關(guān)性，報(bào)告如下。

材料和方法

1 一般資料

選取2017年1月至2018年1月在我院住院治療的支氣管哮喘急性發(fā)作患者90例，其中輕度患者29例，中度患者36例，重度患者22例，危重患者3例（因危重級患者家屬拒絕參加檢測而未納入研究），故共計(jì)納入研究87例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①診斷符合中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會制定的《支氣管哮喘防治指南》［3］中的標(biāo)準(zhǔn)；②患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①咳嗽變異性哮喘及胸悶性哮喘；②合并有肺炎、慢性阻塞性肺疾病、肺結(jié)核等肺部疾病；③有心血管疾病、惡性腫瘤、高血壓、糖尿病等。同時(shí)選取健康志愿者90例作為對照組，觀察組和對照組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組一般資料比較

2 實(shí)驗(yàn)方法

所有患者入院后空腹抽取3mL肘靜脈血，以3000r／min轉(zhuǎn)速進(jìn)行10min離心，提取上清液，保存至-80℃待檢，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測ADAM33 mRNA和BTNL3 mRNA表達(dá)，試劑盒購于深圳市賽爾生物技術(shù)有限公司；使用電化學(xué)發(fā)光法檢測血清免疫球蛋白E（IgE）水平，試劑盒購于上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司；采用XFA6000Intelligent智能化全自動血液細(xì)胞分析儀（購自南京普朗醫(yī)用設(shè)備有限公司）檢測嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）計(jì)數(shù)，試劑盒購于北京樂博生物科技有限公司；使用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測白細(xì)胞介素-4（IL-4）水平，試劑盒購于上海西唐生物科技有限公司，操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

1 兩組ADAM33 mRNA和BTNL3 mRNA表達(dá)

觀察組ADAM33 mRNA相對表達(dá)量明顯高于對照組（P＜0.05），而BTNL3 mRNA相對表達(dá)量明顯低于對照組（P＜0.05）。見表2和圖1。

表2 兩組ADAM33 mRNA和BTNL3 mRNA相對表達(dá)比較

圖1 PCR圖

2 兩組外周血EOS計(jì)數(shù)、IgE、IL-4表達(dá)比較

觀察組EOS計(jì)數(shù)、IgE和IL-4明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義（P＜0.05），見表3。

表3 兩組外周血EOS計(jì)數(shù)、IgE、IL-4表達(dá)比較

3 觀察組不同病情患者ADAM33、BTNL3 mRNA、EOS計(jì)數(shù)等比較

重度患者ADAM33 mRNA相對表達(dá)和IL-4明顯高于中度和輕度患者（P＜0.05），而BTNL3 mRNA相對表達(dá)明顯低于中度和輕度患者（P＜0.05）；中度患者ADAM33 mRNA相對表達(dá)和IL-4明顯高于輕度患者（P＜0.05），而BTNL3 mRNA相對表達(dá)明顯低于輕度患者（P＜0.05）；不同病情患者EOS計(jì)數(shù)和IgE比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表4和表5。

表4 觀察組不同病情患者ADAM33 mRNA和BTNL3 mRNA比較

表5 觀察組不同病情患者外周血EOS計(jì)數(shù)、IgE、IL-4表達(dá)比較

4 相關(guān)分析

將患者ADAM33 mRNA、BTNL3 mRNA相對表達(dá)與外周血EOS計(jì)數(shù)、IgE、IL-4進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：ADAM33 mRNA與IL-4呈正相關(guān)（r＝0.541，P＜0.05），BTNL3 mRNA與IL-4、ADAM33 mRNA呈負(fù)相關(guān)（r＝-0.622和-0.464，P＜0.05）。

討 論

支氣管哮喘是一種非特異性慢性氣道炎癥性疾病，病情易遷延、反復(fù)發(fā)作，對患者的生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響，已成為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題［4］。早期診斷對緩解臨床病癥、改善預(yù)后具有重要作用。因此，尋找一種可靠的檢測因子已成為臨床研究的重點(diǎn)［5］。

支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制尚未明確，可能與遺傳、環(huán)境相關(guān)，其中遺傳因素占75%，基因易感性處于主導(dǎo)地位［6］。ADAM33、BTNL3是近年來被發(fā)現(xiàn)與支氣管哮喘發(fā)生可能有關(guān)的新型基因，成為臨床研究的熱點(diǎn)［7］。ADAM33屬于鋅依賴性金屬蛋白酶基因超家族，基因位于20pl3，長度約2439bp，編碼蛋白質(zhì)含有813個(gè)氨基酸，具有裂解蛋白質(zhì)活性的酶，可作為細(xì)胞因子與細(xì)胞因子受體著床蛋白，在胞漿結(jié)構(gòu)域與胞內(nèi)各種信號蛋白的作用下進(jìn)行信號傳導(dǎo)［8］。ADAM33常表達(dá)于大腦、心臟、腎臟組織中，ADAM33 mRNA常表達(dá)在間質(zhì)細(xì)胞起源的肺成纖維細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞，其水平變化與氣道高反應(yīng)性、氣道重塑相關(guān)［9］。BTNL3作為免疫調(diào)節(jié)活性基因超家族成員，是一種具有免疫調(diào)節(jié)活性的基因，基因定位于5號染色體q35.3區(qū)，常表達(dá)于人類機(jī)體的肺、小腸、骨髓等多種組織器官，具有抑制Th2細(xì)胞活化的作用［10-11］。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組患者ADAM33 mRNA相對表達(dá)量明顯高于對照組患者，而BTNL3 mRNA相對表達(dá)量明顯低于對照組患者，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這佐證了上述分析，ADAM33、BTNL3參與了支氣管哮喘的發(fā)病過程，其中ADAM33 mRNA在支氣管哮喘氣道上皮與間質(zhì)細(xì)胞中均表達(dá)上調(diào)，BTNL3 mRNA表達(dá)下降。

支氣管哮喘急性發(fā)作過程中會出現(xiàn)Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞免疫應(yīng)答失衡，其中Th2細(xì)胞活化亢進(jìn)是重要步驟［12-13］。IgE、EOS通過I型變態(tài)反應(yīng)促進(jìn)組胺釋放，形成氣道痙攣；IL-4是Th2細(xì)胞活化時(shí)所產(chǎn)生的細(xì)胞因子，其水平變化能夠反映Th2免疫反應(yīng)強(qiáng)度［14-15］。本研究對患者炎癥指標(biāo)進(jìn)行檢測得出，觀察組患者EOS計(jì)數(shù)、IgE和IL-4明顯高于對照組，提示EOS、IgE、IL-4在支氣管哮喘發(fā)病中發(fā)揮重要作用，其水平變化與病情嚴(yán)重程度具有相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，所有患者ADAM33 mRNA和IL-4水平的表達(dá)為重度＞中度＞輕度，這說明ADAM33水平與支氣管哮喘病情嚴(yán)重程度有聯(lián)系，且與IL-4呈正相關(guān)性。而BTNL3 mRNA相對表達(dá)為重度＜中度＜輕度，這提示BTNL3 mRNA水平隨著支氣管哮喘發(fā)病的嚴(yán)重程度依次遞減，其水平變化可以在一定程度上反映支氣管哮喘的病情。

為進(jìn)一步明確ADAM33 mRNA、BTNL3 mRNA與支氣管哮喘的相關(guān)性，本研究將患者ADAM33 mRNA、BTNL3 mRNA相對表達(dá)與外周血EOS計(jì)數(shù)、IgE、IL-4進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：ADAM33 mRNA與IL-4呈正相關(guān)，BTNL3 mRNA與IL-4、ADAM33 mRNA呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），這說明支氣管哮喘Th1／Th2免疫失衡會促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞ADAM33表達(dá)，BTNL3對Th2免疫反應(yīng)進(jìn)行抑制而降低支氣管哮喘的發(fā)病嚴(yán)重程度。

本研究創(chuàng)新性在于不僅僅同時(shí)分析ADAM33、BTNL3基因在支氣管哮喘中的表達(dá)，同時(shí)還進(jìn)一步探究該基因在不同病情重的表達(dá)及與炎癥IL-4、EOS、IgE水平的相關(guān)性，通過具體的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證實(shí)ADAM33、BTNL3水平能夠反映支氣管哮喘的病情嚴(yán)重程度，為臨床哮喘的診療提供新思路。但本研究限于研究樣本的不足，且主要對急性發(fā)作的哮喘患者的指標(biāo)進(jìn)行分析，以及研究中未進(jìn)行患者不同時(shí)間段標(biāo)本的分析，這對于支氣管哮喘患者ADAM33、BTNL3基因的變化與其病情發(fā)展和發(fā)生的具體關(guān)系仍需下一步以及大樣本的進(jìn)一步深入探究。

綜上所述，ADAM33、BTNL3在不同嚴(yán)重程度支氣管哮喘患者中表達(dá)有所差異，兩者存在一定相關(guān)性，同時(shí)可能與Th2類細(xì)胞因子有關(guān)。