張巧云，歐紅玲，王 巖，吳繼敏，李 娜，白 靜，李曉寧，王欣茹

（1.火箭軍特色醫(yī)學(xué)中心醫(yī)學(xué)檢驗科，北京100088；2.火箭軍特色醫(yī)學(xué)中心胃食管反流中心，北京100088）

胃食管反流?。╣astroesophageal reflux disease，GERD）是常見的消化道疾病，指胃內(nèi)容物或十二指腸內(nèi)容物反流入食管、咽喉甚至呼吸道等部位，從而引起燒心、不典型胸痛、吞咽困難等不適感。近幾年GERD發(fā)病率越來越高［1］，嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量，該類疾病臨床表現(xiàn)多樣，缺少特異體征，導(dǎo)致診斷較為困難。目前臨床GERD的診斷多數(shù)采用臨床癥狀加24 h食管pH監(jiān)測、內(nèi)鏡、鋇餐等有創(chuàng)檢查綜合評價［2］，患者的依從性差，檢查費用高、普及率不高。臨床急需簡單快速、創(chuàng)傷性小、經(jīng)濟的新型檢驗技術(shù)協(xié)助診斷。體外檢測具有標(biāo)本易得（血液、痰、唾液或反流物）、檢測簡便、費用低、檢出率高、病人檢查前后無不適反應(yīng)等優(yōu)勢，易于患者接受。本研究探討血清胃蛋白酶原水平檢測在GERD診斷中的價值，旨在為臨床診斷提供新的檢驗指標(biāo)?，F(xiàn)報告如下。

材料和方法

1 一般資料

選取本院2018年8月至2019年2月確診的胃食管反流病患者40例，其中男22例，女18例，年齡28～84歲，平均49.0±17.3歲。胃食管反流組納入標(biāo)準(zhǔn)（以下任一項符合）［3］：①胃鏡提示食管炎；②病理性酸反流（24 h pH-阻抗監(jiān)測DeMeester評分＞14.7或者反流總次數(shù)＞73）；③典型癥狀＋抑酸治療有效。另選擇40例同期健康體檢者為對照組，其中男24例，女16例，年齡29～73歲，平均44.0±12.5歲。兩組研究對象均為同期在院，隨機選擇獲得，在性別、年齡構(gòu)成上差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究均獲得患者知情同意，并在血清采集檢測前均未采取過任何治療措施。排除標(biāo)準(zhǔn)為：①有嚴(yán)重的心、肺，腹基礎(chǔ)疾病者或有精神異常者。②有凝血功能障礙或正在服用阿司匹林、華法林等抗凝藥者。③胃癌、萎縮性胃炎患者或曾行胃部手術(shù)史。

2 方法

被檢者空腹采集靜脈血5mL置于真空促凝管內(nèi)，離心分離血清，-80℃冰凍保存?zhèn)溆?。采用全自動化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法（雅培I2000及配套試劑）檢測PGI、PGII，并計算PGI／PGII比值（PGR）。另2種比對試劑盒分別采用化學(xué)發(fā)光法（國產(chǎn)某A產(chǎn)品）和速率散射比濁POCT法（國產(chǎn)某B產(chǎn)品）。所有質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品及檢測試劑均由各公司提供。各指標(biāo)參考范圍［4］：PGI＞70ng／mL，PGI／PGII＞3。

3 比對試驗

隨機選取42份標(biāo)本，包含有低、中、高各濃度水平，標(biāo)本均無黃疸、溶血或脂血，本研究以雅培I2000作為參考儀器，國產(chǎn)某A產(chǎn)品與國產(chǎn)某B產(chǎn)品作為實驗儀器。將所選取的標(biāo)本分別在3臺儀器上平行檢測PGI與PGII，對檢測結(jié)果進行相關(guān)性分析［5］。

4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，計量資料用表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。ROC曲線下面積評估三項指標(biāo)對GERD的臨床診斷價值，用EXCEL軟件做線性回歸統(tǒng)計，得到回歸方程：Y＝b X＋a及相關(guān)系數(shù)。

結(jié) 果

1 胃食管反流組與健康對照組血清中PGI、PGII及PGR水平比較

胃食管反流組PGI、PGR水平與對照組比較明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），胃食管反流組PGII水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 2組患者血清PGI、PGII及PGR水平的比較（）

表1 2組患者血清PGI、PGII及PGR水平的比較（）

組別 例數(shù) PGI（ng／mL）PGII（ng／mL） PGR GERD 40 106.71±57.89 13.72±8.91 8.41±2.96健康對照組 40 62.15±43.98 10.52±7.95 6.47±2.87 t值 2.677 1.195 2.115 P值0.01 0.239 0.04

2 PGI、PGII及PGR對胃食管反流的診斷

根據(jù)ROC數(shù)據(jù)分析，PGI用于診斷胃食管反流病的曲線下面積為0.739，介于0.7～0.9之間，表明PGI具有診斷價值，對于胃食管反流的診斷具有一定的指示性。PGII用于診斷胃食管反流病的曲線下面積為0.614，低于0.7，表明PGII對診斷胃食管反流病準(zhǔn)確性較低，PGR用于診斷胃食管反流病的曲線下面積為0.696，略低于0.7，表明PGI／PGII診斷價值不大，診斷價值依次為PGI＞PGI／PGII＞PGI。見圖1、2、3。

圖1 PGI的ROC曲線

圖2 PGII的ROC曲線

圖3 PGI／PGII的ROC曲線

3 三種檢測系統(tǒng)的相關(guān)分析

結(jié)果表明，國產(chǎn)某A產(chǎn)品與雅培檢測系統(tǒng)對PGI、PGII及PGI／PGII檢測的相關(guān)性都較好，相關(guān)系數(shù)r分別為0.9947、0.9893、0.8063，見表2。國產(chǎn)某B產(chǎn)品與雅培檢測系統(tǒng)對PGI檢測的相關(guān)性較好，相關(guān)系數(shù)r為0.9427，PGII與PGI／PGII兩者與雅培檢測系統(tǒng)相關(guān)性稍差，分別為0.7957、0.7695，見表3。

表2 國產(chǎn)某A產(chǎn)品與雅培檢測系統(tǒng)的相關(guān)系數(shù)和回歸分析

表3 國產(chǎn)某B產(chǎn)品與雅培檢測系統(tǒng)的相關(guān)系數(shù)和回歸分析

討 論

胃食管反流病已成為一種危害極大的慢性疾病，臨床表現(xiàn)極具特異性和復(fù)雜性［6］。對其診治難易程度不一，癥狀可為頻發(fā)或偶發(fā)，需要多種診斷手段聯(lián)合確診或排除GERD。目前臨床常用的檢查為反流監(jiān)測、PPI實驗、胃鏡、喉鏡、高分辨率測壓和造影，患者對這些有創(chuàng)檢查往往難以接受，尋找一種簡單易行體外檢測方法是當(dāng)務(wù)之急，新的診斷方法如血清胃蛋白酶原檢測，簡便無創(chuàng)，有很好的應(yīng)用前景［7］。

胃蛋白酶原屬于天冬氨酸蛋白酶家族，由375個氨基酸組成的蛋白多肽鏈，是胃蛋白酶（蛋白水解酶）的非活性前體［8］。免疫學(xué)上可分為2型：胃蛋白酶原I（PGI）和胃蛋白酶原II（PGII），PGI由胃底腺分泌，PGII由胃底腺、幽門腺和Brunner腺分泌。PG由高爾基體分泌入胃腔，然后少量PG通過毛細(xì)血管進入血液循環(huán)，血液濃度在通常情況下比較穩(wěn)定［9-10］，波動較小。

有大量報道發(fā)現(xiàn)萎縮性胃炎和胃癌患者血清PG和PGR的變化顯著，為診斷和評估病情提供重要價值［11］，然而對于PG和PGR在食管反流病中變化如何這方面研究甚少。本研究為了驗證PGI及PGI／PGII血清學(xué)檢測在GERD診斷中的應(yīng)用價值，選取了40例GERD患者和40例健康體檢者作為研究對象進行研究，結(jié)果顯示，胃食管反流病患者血清中PGI及PGI／PGII水平明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且ROC曲線分析顯示，PGI對胃食管反流病診斷的曲線下面積為0.739，具有一定的診斷價值，這與顧紅［12］的研究結(jié)論相近，提示血清胃蛋白酶原的檢測可作為胃食管反流病診斷的一項新型指標(biāo)。盡管仍然需要更多大樣本的研究來證明胃蛋白酶原在GERD診斷中的靈敏度及特異性，但將胃蛋白酶原測定作為GERD的輔助診斷試驗還是比較可靠的，值得在GERD篩查中推廣應(yīng)用，為臨床GERD的診斷提供一定的參考依據(jù)。目前實驗室血清胃蛋白酶原的檢測并未普及，主要檢測方法有化學(xué)發(fā)光法、微粒子發(fā)光法和免疫比濁POCT法，本研究對三家產(chǎn)品進行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光法與進口微粒子化學(xué)發(fā)光法相關(guān)性不錯，三項結(jié)果均符合，國產(chǎn)免疫比濁POCT法試劑盒與進口微粒子化學(xué)發(fā)光法試劑盒對于PGI的檢測相關(guān)性較好，對于PGII及PGI／PGII檢測，國產(chǎn)POCT法試劑盒較進口發(fā)光法相關(guān)性稍差。綜上所述，目前實驗室儀器具有良好的可比性，符合質(zhì)量目標(biāo)要求，具有高通量的大型儀器或檢測快速、成本低廉、攜帶方便的小型床旁快速設(shè)備能夠滿足不同層次中小型實驗室、專科實驗室的需求。

胃蛋白酶原檢測是近年來診斷反流的熱點，具有方便、廉價的優(yōu)點，有望成為篩查GERD的重要手段。下一步仍需要大量收集標(biāo)本，進一步驗證胃蛋白酶原對GERD診斷的臨床應(yīng)用價值，并且可進一步研究GERD的其他實驗室診斷指標(biāo)［13-15］，如胃泌素-17、白介素-6、胃蛋白酶、幽門螺桿菌（呼氣試驗和血清HP-IgG）、痰及肺泡灌洗液細(xì)胞學(xué)分析，旨在提高GERD的診斷率，避免漏診甚至誤診，為GERD患者帶來更多的福音。